總大腸菌的測定實驗作業(yè)指導(dǎo)書

作業(yè)指導(dǎo)書頁碼：第111作業(yè)指導(dǎo)書頁碼：第111文件名稱：水中總大腸菌群的測定水中總大腸菌群的測定1、方法依據(jù)水質(zhì)水中總大腸菌群的測定多管發(fā)酵法2、適用范圍菌屬、檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬等菌屬的細菌?？偞竽c菌群的檢驗方法中，多管發(fā)酵法可適用于各種水樣〕，但操作較繁，需要時間較長；濾膜法主要是用于雜質(zhì)較少的水樣，操作簡潔快速。暗色菌落的、需氧的和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。處。3、測定原理3.1水中總大腸菌群的測定以求得水樣中的總大腸菌群數(shù)。多管發(fā)酵法是以最可能數(shù)簡稱MPN法。假設(shè)從理論上考慮，并且進展大量的重復(fù)檢定，可以覺察這種估量定。4、試劑乳糖蛋白胨培育液:蛋白胨 10g牛肉浸膏 3g氯化鈉 5g乳糖 5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1ml蒸餾水 100ml1000mlpH7.2～7.4，再參與1.61ml，充11520min，貯存于暗處備用。三倍乳糖蛋白胨培育液：4.134.3品紅亞硫酸鈉培育基：蛋白胨10g乳糖10g磷酸氫二鉀3.5g瓊脂20～30g蒸餾水1000ml無水硫酸鈉5g5%堿性品紅乙醇溶液20ml900ml后參與磷酸氫二鉀及蛋白胨，混勻使其溶解，再加以蒸餾水補足至1000ml，調(diào)整pH7.2～7.4。趁熱用脫脂棉或多層紗布過濾，在參與乳糖，混勻后定量分裝于燒瓶中，置高壓蒸汽滅菌器中，在115℃20min。貯存于冷暗處備用。平板培育基：將上述貯備培育基加熱溶化。以無菌操作，依據(jù)瓶內(nèi)培育基的容量，用滅菌吸管按1:505%堿1:200無水硫酸鈉置于另一滅菌空試管內(nèi)，加滅菌水少許使其溶解，品紅空平皿內(nèi)，待其冷卻凝固后，倒置冰箱內(nèi)備用。此種已制成的培育基能再用。伊紅美藍培育基蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氫二鉀 2.0g瓊脂 20g蒸餾水 100ml2%伊紅水溶液 20ml0.5%美藍水溶液 13ml900ml后參與磷酸氫二鉀及蛋白胨，混勻使之溶解，再以蒸餾水補足至1000ml，調(diào)整pH7.2～7.4。趁熱用脫脂棉或多層紗布過濾，在參與乳糖，混勻后定量分裝于燒瓶中，置高壓蒸汽滅菌器中，在115℃20min。貯存于冷暗處備用。平板培育基的配置：將上述貯備培育基加熱溶化。以無菌操作，依據(jù)瓶內(nèi)培育基的容量，用滅菌吸管吸取確定量已滅菌的2%伊紅水溶液及0.5%美藍水溶液參與已溶化的貯備培育基中，并充分混勻。當(dāng)混好的培育基冷至45℃，便馬上適量傾倒入已滅菌的空平皿內(nèi)，待其冷卻凝固后，倒置與冰箱備用。5、步驟生活飲用水50ml液的大試管或燒瓶中，以無菌操作各參與已充分混勻的水樣100ml；105ml10ml37℃恒溫箱培育24h。24h3718～24,選擇符合以下特征的菌落，取菌落的一小局部進展涂片、革蘭氏染色、鏡檢。品紅亞硫酸鈉培育基上的菌落：紫紅色，具有金屬光澤的菌落；深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色，中心色較深的菌落。伊紅美藍培育基上的菌落：深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色，中心色較深的菌落。復(fù)發(fā)酵試驗：上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽胞的桿菌，則選擇該菌落的另一局部接種于一般濃度乳糖蛋白胨培育液中〔內(nèi)有倒管〕，每管可接種分別自同一動身酵管〔瓶〕的最1~33724h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證明有大腸菌群菌存在。依據(jù)證明有大腸菌群存在的陽性管〔瓶〕5-2-9，報告每升水樣中的大腸菌群數(shù)。水源水1:105ml10ml10ml1ml10ml1ml1:101537℃24h。5.1檢驗方法。5—2—10，即求得100ml地表水和廢水5.2有嚴峻污染的地表水和廢水初發(fā)酵試驗的接種水樣應(yīng)做1:10,1:100,1;10005.2法。假設(shè)接種的水樣量不是10ml，1ml，0.1ml，而是較低或較高MPN100mlMPNMPN值MPN指數(shù) 1〔ml〕接種量最大的一管〔ml〕大腸桿菌。作業(yè)指導(dǎo)書作業(yè)指導(dǎo)書頁碼：第911頁文件名稱：游離氯和總氯的測定公布日期：202311日5-2-9大腸菌群檢數(shù)表100ml〔100ml2，10ml10100ml10ml陽性管數(shù)0菌群數(shù)1菌群數(shù)2菌群數(shù)0＜3411138182713273111838414245251830706223692727431208315116193660230104069＞230作業(yè)指導(dǎo)書作業(yè)指導(dǎo)書頁碼：第1011文件名稱：游離氯和總氯的測定公布日期：202311日5-2-10最可能數(shù)〔MPN〕表消滅陽 100ml水95%置信限 消滅陽性份數(shù) 100ml水樣 95%置信限性份數(shù)樣中細菌值細菌數(shù)的最值數(shù)的最可下上101ml0.1可能數(shù)下上能數(shù)限限mlml限限000＜2421269780012＜0.57430279800102＜0.574313311930204＜0.5114403412931002＜0.57500237701014＜0.5115013411891104＜0.51150243151101116＜0.5155103311931206＜0.51551146161202005＜0.513512632115021171175204917130200711752170232702119221522942822020092215307925190200123285311103125030081195321403731030111225533180445003101122554013035300311144345411704319032014434542220577003211754654328090850330175465443501201