糞大腸桿菌群測定方法

創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十日水質(zhì)糞年夜腸菌群的測定之馬矢奏春創(chuàng)作創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十日°C溫度下能生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的年夜腸菌群稱為糞年夜腸菌群.用提高培養(yǎng)溫度的方法，造成晦氣于來自自然環(huán)境的年夜腸菌群生長的條件，使培養(yǎng)出來的菌主要為來自糞便中的年夜腸菌群，從而更準確地反映出水質(zhì)受糞便污染的情況.糞年夜腸菌群的測定可以用多管發(fā)酵法和濾膜法.第一篇多管發(fā)酵法適用范圍本標準適用于地表水、地下水及廢水中糞年夜腸菌群的測定.原理多管發(fā)酵法是以最可能數(shù)(mostprobablenumber)簡稱MPN來暗示試驗結(jié)果的.實際上它是根據(jù)統(tǒng)計學理論，估計水體中的年夜腸桿菌密度和衛(wèi)生質(zhì)量的一種方法.如果從理論上考慮,而且進行年夜量的重復檢定，可以發(fā)現(xiàn)這種估計有年夜于實際數(shù)字的傾向.不外只要每一稀釋度試管重復數(shù)目增加，這種不同便會減少，對細菌含量的估計值，年夜部份取決于那些既顯示陽性又顯示陰性的稀釋度.因此在實驗設(shè)計上，水樣檢驗所要求重復的數(shù)目，要根據(jù)所要求數(shù)據(jù)的準確度而定.培養(yǎng)基和試劑本標準所用試劑除另有注明外，均為符合國家標準的分析純化學試劑；實驗用水為新制備的去離子水.3.1單倍乳糖卵白胨培養(yǎng)液：TOC\o"1-5"\h\z成份：卵白胨 10g牛肉浸膏 3g乳糖 5g氯化鈉 5g1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1mL蒸餾水 1000mL制法：將卵白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH為7.2?7.4,再加入1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1mL,充沛混勻，分裝于含有顛倒的小玻璃管的試管中,于高壓蒸汽滅菌器中，在115°C滅菌20min,貯存于暗處備用.3.2三倍乳糖卵白胨培養(yǎng)液：按上述配方比例三倍（除蒸餾水外），配成三倍濃縮的乳糖卵白胨培養(yǎng)液，制法同上.3.3EC培養(yǎng)液：TOC\o"1-5"\h\z成份：胰胨 20g乳糖 5g膽鹽三號 1.5g磷酸氫二鉀（K2HP04）4g磷酸二氫鉀（KH2P04）1.5g氯化鈉 5g蒸餾水 1000mL制法：將上述成份加熱溶解，然后分裝于含有玻璃倒管的試管中.置高壓蒸汽滅菌器中，115°C滅菌20min.滅菌后pH應為6.9.3.4培養(yǎng)基的寄存在密封瓶中的脫水培養(yǎng)基制品要寄存在年夜氣濕度低、溫度低于30C的暗處，寄存時應防止陽光直接照射，而且要防止雜菌侵入和液體蒸發(fā).當培養(yǎng)液顏色變動，或體積變動明顯時廢棄不用.步伐4.1水樣接種量將水樣充沛混勻后，根據(jù)水樣污染的水平確定水樣接種量.每個樣品至少用三個分歧的水樣量接種.同一接種水樣量要有五管.相對未受污染的水樣接種量為10mL、1mL、0.1mL.受污染水樣接種量根據(jù)污染水平接種1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等.使用的水樣量可參考下表1.表1接種用水量參考表接種量(mL)水樣種類檢測方法100501010.110-210-310-410-5TOC\o"1-5"\h\z井水多管發(fā)酵法 XXX河水、塘水多管發(fā)酵法 XXX湖水、塘水多管發(fā)酵法 XXX城市原污水多管發(fā)酵法 XXX如接種體積為10mL,則試管內(nèi)應裝有三倍濃度乳糖卵白胨培養(yǎng)液5mL；如接種量為1mL或少于1mL,則可接種于普通濃度的乳糖卵白胨培養(yǎng)液10mL中.4.2初發(fā)酵試驗將水樣分別接種到盛有乳糖卵白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中.在37°C±°C下培養(yǎng)24h±2h.產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管標明試驗陽性.如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽性.4.3復發(fā)酵試驗C土C溫度下培養(yǎng)24h±2h（水浴箱的水面應高于試管中培養(yǎng)基液面）.接種后所有發(fā)酵管必需在30min內(nèi)放進水浴中.培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實為糞年夜腸菌群陽性.結(jié)果的計算根據(jù)分歧接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽性結(jié)果的數(shù)目，從表2或表3中查得每升水樣中的糞年夜腸菌群.接種水樣為100mL2份、10mL10份、總量300mL時，查表2可得每升水樣中的糞年