高效液相色譜法同時測定美愈軟膠囊中氫溴酸右美沙芬和愈創(chuàng)木酚甘油醚

高效液相色譜法同時測定美愈軟膠囊中氫溴酸右美沙芬和愈創(chuàng)木酚甘油醚

美果膠囊是一種新型藥物。主要成分為:氫溴酸右美沙芬100mg,愈創(chuàng)木酚甘油醚15mg。用于治療急、慢性支氣管炎及上呼吸道感染等引起的咳嗽、痰多。有文獻報道用HPLC同時測定雷登泰口服液中愈創(chuàng)木酚甘油醚,鹽酸偽麻黃堿,氫溴酸右美沙芬的含量,緩釋片中愈創(chuàng)木酚甘油醚和氫溴酸右美沙芬的含量,速立克糖漿中氫溴酸右美沙芬及愈創(chuàng)木酚甘油醚的含量,愈美分散片中氫溴酸右美沙芬及愈創(chuàng)木酚甘油醚的含量。本實驗以甲醇-0.28%辛烷磺酸鈉-三乙胺(500∶498∶2),磷酸調(diào)pH(3.4±0.05)為流動相,可同時測定美愈軟膠囊中兩組分的含量,方法可靠,結(jié)果準確。1譜站站的建立P200Ⅱ高效液相色譜儀(大連依利特公司),Echrom98色譜工作站。氫溴酸右美沙芬對照品(上海新亞制藥廠,純度99.8%),愈創(chuàng)木酚甘油醚對照品(西格瑪公司,純度99.6%),甲醇為色譜醇,三乙胺為分析純,美愈軟膠囊樣品(黑龍江省醫(yī)藥工業(yè)研究所)。2辛烷磺酸鈉-三乙胺的制備色譜柱為迪馬C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流動相為甲醇-0.28%辛烷磺酸鈉-三乙胺(500∶498∶2),磷酸調(diào)pH至(3.4±0.05)。檢測波長280nm,流速1.0mL·min-1,進樣量10μL。在此條件下,兩個測定組分可完全分離,其他共存組分不出峰或不干擾測定,測得色譜圖見圖1。3方法學的檢驗3.1線性方程的建立精密稱取氫溴酸右美沙芬10mg,愈創(chuàng)木酚甘油醚70mg于100mL量瓶,加重蒸水稀釋至刻度。精密量取上述溶液3,4,5,6,7,8mL置10mL量瓶中,加水稀釋至刻度。分別進樣10μL,記錄峰面積A,并以濃度c(μg·mL-1)為橫坐標,峰面積A為縱坐標,作圖,進行回歸,各得一條直線,其線性方程如下(n=6):氫溴酸右美沙芬:A=68376c-7.8074,r=0.9999;愈創(chuàng)木酚甘油醚:A=100202c+167.85,r=0.9999。結(jié)果表明氫溴酸右美沙芬在32.7～82.7μg·mL-1,愈創(chuàng)木酚甘油醚在223.8～596.8μg·mL-1內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。3.2檢出限和測定下限分別精密稱取干燥的兩組分對照品適量,配制成系列濃度的樣品,按信噪比(S/N)為3,測得檢出限為愈創(chuàng)木酚甘油醚62.5μg·mL-1,氫溴酸右美沙芬200μg·mL-1。3.3算法的精密度精密吸取“3.7”項下供試品溶液連續(xù)進樣6次,以峰面積計算方法精密度,結(jié)果氫溴酸右美沙芬RSD為1.1%(n=6),愈創(chuàng)木酚甘油醚RSD為0.09%(n=6)。3.4儀器精密度試驗精密吸取“3.7”項下對照品溶液連續(xù)進樣6次,以峰面積計算儀器精密度,結(jié)果氫溴酸右美沙芬RSD為1.34%(n=6),愈創(chuàng)木酚甘油醚RSD為0.48%(n=6)。3.5峰面積測定條件精密吸取“3.7”項下供試品溶液,分別于1,2,4,8,12,24h進樣,測定峰面積。氫溴酸右美沙芬RSD為1.13%(n=6),愈創(chuàng)木酚甘油醚RSD為0.46%(n=6),在24h內(nèi)穩(wěn)定。3.6氫溴酸右美沙芬、愈創(chuàng)木酚甘油醚對照品溶液精密稱樣品內(nèi)容物0.4g(相當于氫溴酸右美沙芬100mg,愈創(chuàng)木酚甘油醚15mg),置100mL量瓶中,加流動相稀釋至刻度做儲備液。按處方比例量的80%(80,12mg),100%(100,15mg)和120%(120,18mg)加入氫溴酸右美沙芬、愈創(chuàng)木酚甘油醚對照品,分別置100mL量瓶中,加流動相稀釋。超聲處理15min,放冷加流動相稀釋至刻度,搖勻,濾過。分別取續(xù)濾液10mL,儲備液10mL置100mL量瓶中,用流動相稀釋,配制成高、中、低3個濃度的供試品溶液各3份。分別取10μL注入色譜儀,記錄色譜圖;另取對照品溶液,同法測定,按外標法以峰面積計算,測定回收率,結(jié)果見表1。3.7對照品與供試品溶液的制備①對照品溶液的制備:精密稱取氫溴酸右美沙芬和愈創(chuàng)木酚甘油醚適量。用重蒸水溶解制備每1mL含氫溴酸右美沙芬0.06mg,愈創(chuàng)木酚甘油醚0.4mg的對照品溶液。②供試品溶液的制備:取裝量合格的美愈軟膠囊20粒,切開膠囊收集內(nèi)容物。精密稱內(nèi)容物0.16g(相當于氫溴酸右美沙芬6mg,愈創(chuàng)木酚甘油醚40mg),加水稀釋成每1mL含0.06mg氫溴酸右美沙芬和0.4mg愈創(chuàng)木酚苷油醚的供試品溶液,用0.45μm濾膜濾過。分別吸取對照品及供試品溶液各10μL注入色譜儀。按外標法以峰面積計算,測定3批樣品的結(jié)果見表2。4流動相及色譜相的選擇,應(yīng)注意執(zhí)法、藥物的使用方法4.1本品以聚乙二醇(PEG)為基質(zhì),輔料為枸櫞酸和山梨醇等不影響主要成分的測定。4.2氫溴酸右美沙芬和愈創(chuàng)木酚甘油醚在280nm均有最大吸收,若采用分光光度法測定愈創(chuàng)木酚甘油醚的含量,不能排除同樣有最大吸收的氫溴酸右美沙芬的影響。本實驗選擇高效液相色譜法同時測定兩組分的含量,操作簡單,結(jié)果準確。4.3流動相的選擇參考了23版美國藥典及國內(nèi)外相關(guān)資料并進行大量實驗摸索,在本制劑中氫溴酸右美沙芬的峰形易拖尾,加入適量三乙胺后能明顯改善。筆者認為在本制劑中兩種有效成分能較好分離的前提下,掃尾劑三乙胺的用