試管凝集試驗(yàn)報(bào)告

試管凝集試驗(yàn)報(bào)告:凝集試管試驗(yàn)報(bào)告試管凝集試驗(yàn)結(jié)果分析試管凝集試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告試管凝集試驗(yàn)注意事項(xiàng)篇一:直接凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告免疫學(xué)?直接凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)一:玻片凝集實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理：顆粒性抗原（細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)的抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)（通常是0.85%NaCl）存在的條件下出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)的方法有兩種:？直接法;？間接法。顆粒性抗原（如完整的細(xì)菌或細(xì)胞）與相應(yīng)抗體在體外直接結(jié)合而出現(xiàn)的凝集反應(yīng)，稱為直接凝集反應(yīng)。如玻片凝集反應(yīng)和試管凝集反應(yīng)。將可溶性抗原預(yù)先吸附于一種與免疫無關(guān)的顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體結(jié)合，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反應(yīng)。如RF因子檢測(cè)玻片凝集試驗(yàn)是使用已知抗體與未知顆粒性抗原在玻片上直接結(jié)合而出現(xiàn)的凝集反應(yīng)。此類反應(yīng)較簡單迅速，常用于抗原或抗體的定性檢測(cè)。本次實(shí)驗(yàn)使用玻片凝集試驗(yàn)的原理進(jìn)行人類ABO血型的鑒定。ABO血型系統(tǒng)是按照血液中紅細(xì)胞表面的抗原分子來命名的。人類ABO血型抗原有兩種:A抗原和B抗原。A型血紅細(xì)胞表面具有A型抗原，血液中具有抗B抗體;B型血紅細(xì)胞表面具有B型抗原，血液中具有抗A抗體;AB型血紅細(xì)胞表面具有A抗原和B抗原，血液中不具有抗A、B抗體;O型血紅細(xì)胞表面不具有A、B抗體，但血液中含有抗A、B抗體。若用已知的抗A血清和抗B血清與受試者紅細(xì)胞上的相應(yīng)抗原結(jié)合，即可引起紅細(xì)胞凝集，根據(jù)凝集反應(yīng)結(jié)果便可判斷出受試者的血型。實(shí)驗(yàn)方法：取潔凈載玻片一張，用馬克筆分為兩格并注明A、B分區(qū)。倒置標(biāo)準(zhǔn)抗血清試劑瓶，懸空輕擠出抗A血清一滴，滴在A區(qū)內(nèi)；同法在B區(qū)內(nèi)滴加抗B血清一滴。使用消毒液對(duì)左手無名指進(jìn)行消毒，待消毒液自然干燥后，使用無菌三棱采血針快速刺破手指。用木棒的兩端取血，分別在抗A血清和抗B血清中攪拌均勻。用無菌棉棒壓迫手指止血。靜置玻片數(shù)分鐘后，觀察紅細(xì)胞凝集反應(yīng)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果分析：實(shí)驗(yàn)二:試管凝集實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理：試管凝集反應(yīng)是在試管內(nèi)將待檢血清對(duì)倍稀釋后，加入等量的已知顆粒性抗原與待檢血清混合，然后觀察試管內(nèi)有無凝集快出現(xiàn)。如出現(xiàn)凝集塊者為陽性反應(yīng)。混合后仍均勻渾濁，無凝集塊出現(xiàn)者為陰性反應(yīng)。根據(jù)血清凝集效價(jià)判定待檢血清中相應(yīng)抗體的含量。即在試管內(nèi)用已知顆粒性抗原檢測(cè)未知抗體的相對(duì)含量的半定量試驗(yàn)。本次實(shí)驗(yàn)是以定量的傷寒桿菌為抗原，根據(jù)是否發(fā)生凝集反應(yīng)來檢測(cè)血清中是否含有對(duì)應(yīng)的抗體;根據(jù)各試管凝集程度的不同，來判斷抗體的效價(jià)。實(shí)驗(yàn)方法：取試管6支，用馬克筆進(jìn)行標(biāo)記，依次放入試管架中。在第一支試管中加入生理鹽水0.9ml,其余各管加生理鹽水0.5ml。然后在第一只試管中加入傷寒免疫血清0.1ml，用吸管將它與生理鹽水吹打混勻后，取出0.5ml加入第二支試管中；再將第二只試管的液體吹打混勻，取出0.5ml加入到第三支試管中，其余各管依次按照上述步驟將血清對(duì)倍稀釋。至第五支試管時(shí)，將試劑混勻后，取出0.5ml棄之不用。是第六支試管不含傷寒免疫血清，作為實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照管。最后在各管中都加入0.5ml傷寒桿菌菌液。輕搖試管架，混勻試管內(nèi)液體，56?水浴1小時(shí)后，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：對(duì)照組:即第六支試管，上清液渾濁，管底可有沉淀的細(xì)菌，輕搖后分散呈均勻渾濁。實(shí)驗(yàn)組:按1-5管依次觀察。陽性者管底出現(xiàn)不規(guī)則凝集物，較松散。陰性者與對(duì)照組相同。凝集程度：++++:液體澄清透明，細(xì)菌全部凝集于管底，輕搖可見大的凝集塊。+++:液體稍渾，細(xì)菌大多數(shù)凝集于管底，搖動(dòng)后凝塊較前者小。++:液體中等混濁，液體中有明顯的凝集物，凝集塊較小。+:液體混濁，仔細(xì)觀察可以看見液體中有很小的凝集顆粒。-:與對(duì)照管相同。(4)凝集效價(jià):出現(xiàn)明顯可見凝集物(++)時(shí)的血清最高稀釋度為血清效價(jià)。篇二:布病試管凝集試驗(yàn)布病試管凝集試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備1、試管的準(zhǔn)備?把試管浸泡于帶有洗滌劑的溫水中30分鐘，浸泡后用試管刷將其刷干凈。先用自來水沖洗10遍，再用去離子水沖洗1遍。?試管沖洗干凈后倒置于籃子中，等水瀝干后置干燥箱中，160?干燥3個(gè)小時(shí)（整個(gè)干燥過程需要5?6個(gè)小時(shí)）。?實(shí)驗(yàn)前要配置0.5%的石炭酸生理鹽水配置方法:稱取0.5克石炭酸，加入100ml的生理鹽水中，配置后置高壓鍋中121?高壓30分鐘。2、 試劑的準(zhǔn)備?標(biāo)準(zhǔn)抗原:按照說明書使用。使用時(shí)充分搖勻，用稀釋液作1，20（工作濃度）稀釋。?標(biāo)準(zhǔn)陽性血清凍干品，使用前用蒸餾水溶解至規(guī)定容積。？標(biāo)準(zhǔn)陰性血清:凍干品，使用前用蒸餾水溶解至規(guī)定容積。3、 被檢血清?按常規(guī)方法采血分離血清血清必須新鮮，無明顯蛋白絮凝物、無溶血和無腐敗氣味。？運(yùn)送和保存血清樣品防止血清凍結(jié)和受熱，以免影響凝集價(jià)。若3d內(nèi)不能送到實(shí)驗(yàn)室，可用冷藏方法運(yùn)送血清。二、試驗(yàn)操作過程1、確定被檢血清的稀釋度牛、馬、駱駝稀釋用1:50,1:100,1:200,1:400（4個(gè)稀釋度）；豬、山羊、綿羊和狗用1:25,1:50,1:100,1:200（4個(gè)稀釋度）。大規(guī)模檢疫時(shí)也可用2個(gè)稀釋度，即牛、馬、駱駝?dòng)?:50,1:100，豬、山羊、綿羊和狗用1:25,1:50，為測(cè)定強(qiáng)陽性血清效價(jià)，稀釋度可以增加。2、稀釋被檢血清--豬、山羊、綿羊和狗血清的稀釋?每份被檢血清用4支試管，標(biāo)記檢驗(yàn)編號(hào)后第I管加1.15mL稀釋液，第2-4管各加人0.5mL稀釋液。?取被檢血清0.1mL，加人第1管，充分混勻后吸棄0.25mL。?從第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均勻后，再從第2管吸取0.5mL至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去0.5mL，稀釋完畢。？從第1至第4管的血清稀釋度分別為1:12.5,1:25,1:50,1:100。3、 加抗原將0.5mL抗原（1:20）加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，豬、羊或狗的血清稀釋則依次變?yōu)?:25,1:50,1:100,1:200，牛、馬和駱駝的血清稀釋度則依次變?yōu)?:50,1:100,1:200,1:400。各反應(yīng)管反應(yīng)總量為1mL。4、 設(shè)立對(duì)照一每次試驗(yàn)都應(yīng)設(shè)立下列對(duì)照。?陰性血清對(duì)照陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清同?陽性血清對(duì)照陽性血清的最高稀釋度應(yīng)超過其效價(jià)滴度，加抗原的方法與被檢血清同。？抗原對(duì)照在0.5mL稀釋液中，加0.5mL抗原（1:20）5、 比濁管的配置每次試驗(yàn)均須配制比濁管，作為判定凝集反應(yīng)程度的依據(jù)，先將抗原（1:20）用等量稀釋液作一倍稀釋，然后按表1配制比濁管。表1比濁管的配制6、 感作所有試驗(yàn)管充分震蕩后，置37?溫箱感作20小時(shí)7、結(jié)果判斷確定每份被檢血清效價(jià)：比照比濁管判讀，出現(xiàn)++以上凝集現(xiàn)象的最高血清稀釋度為血清凝集價(jià)。?結(jié)果判定當(dāng)陰性血清對(duì)照和抗原對(duì)照不出現(xiàn)凝集（一），陽性血清的凝集價(jià)達(dá)到其標(biāo)準(zhǔn)效價(jià)士1個(gè)滴度，則證明試驗(yàn)成立，可以判定。否則，試驗(yàn)應(yīng)重做。?牛、馬和駱駝?dòng)?:10。血清稀釋度，豬、山羊、綿羊和狗于1:50血清稀釋度出現(xiàn)“++”以上的凝集現(xiàn)象時(shí)，被檢血清判定為陽性反應(yīng)。三、試驗(yàn)后的處理1、 試管的處理把所用試管必須高壓處理（121?高壓30分鐘），然后用自來水徹底洗涮干凈，再用去離子水沖洗，后放置框中瀝干，干燥（160?干燥3個(gè)小時(shí)），保存?zhèn)溆谩?、 配置好而未用完的抗原及其盛裝其瓶子的處理瓶子連其抗原一同高壓滅菌（121?高壓30分鐘），后清洗干凈以備用。3、 試管架的處理把試管架上帶有樣品標(biāo)記的符號(hào)用無水乙醇徹底清除掉，后用自來水把試管架沖洗干凈，晾干、保存?zhèn)溆闷?免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)-凝集試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一凝集試驗(yàn)顆粒性抗原（細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在有適量電解質(zhì)存在下，抗原顆粒可相互凝集成肉眼可見的凝集塊，稱為凝集反應(yīng)（Agglutinationreaction）或凝集試驗(yàn)。參與凝集反應(yīng)的抗原稱為凝集原（Agglutinogen），抗體稱為凝集素（Agglutinin）。細(xì)菌或其它凝集原都帶有相同的負(fù)電荷，在懸液中相互排斥而呈現(xiàn)均勻的分散狀態(tài)。抗原與相應(yīng)抗體相遇后可以發(fā)生特異性結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物，降低了抗原分子間的靜電排斥力，此時(shí)已有凝集的趨向，在電解質(zhì)（如生理鹽水）參與下，由于離子的作用，中和了抗原抗體復(fù)合物外面的大部分電荷，使之失去了彼此間的靜電排斥力，分子間相互吸引，凝集成大的絮片或顆粒，出現(xiàn)了肉眼可見的凝集反應(yīng)。根據(jù)是否出現(xiàn)凝集反應(yīng)及其程度，對(duì)待測(cè)抗原或待測(cè)抗體進(jìn)行定性、定量測(cè)定。凝集反應(yīng)包括直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)兩大類，本實(shí)驗(yàn)主要介紹直接凝集反應(yīng)。［目的要求］掌握平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)的操作方法。2.掌握凝集試驗(yàn)的結(jié)果判定及判定標(biāo)準(zhǔn)。3.熟悉平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)所需材料和試劑。［材料與試劑］玻板，載玻片，試管（1cmx8cm），試管架，刻度吸管，滴管，微量可調(diào)加樣器，滴頭（tip頭），牙簽或火柴棒，記號(hào)筆。滅菌的生理鹽水，滅菌的0.5%石炭酸生理鹽水。布氏桿菌病試管凝集抗原，布氏桿菌病平板凝集抗原，布氏桿菌病虎紅平板凝集抗原，布氏桿菌病陽性血清，布氏桿菌病陰性血清，被檢血清（牛、羊或豬）。雞白痢平板凝集抗原，雞白痢陽性血清，雞白痢陰性血清，被檢雞血清。［實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作方法］（一）試管凝集試驗(yàn)以牛布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)為例。試管準(zhǔn)備:每份血清用試管4支，另取3支試管作為對(duì)照，作好標(biāo)記，置試管架上。如被檢血清有多份，對(duì)照只需做1份。被檢血清稀釋:第1管加入2.3ml0.5%石炭酸生理鹽水，第2、3、4管加入0.5ml0.5%石炭酸生理鹽水;然后用加樣器或刻度吸管吸取被檢血清0.2ml，加入第1管中，反復(fù)吹吸5次混勻，吸取1.5ml棄之，再吸取0.5ml加入第2管中，混勻后吸取0.5ml加入第3管，依此類推至第4管，混勻后吸棄0.5ml（見表1-1）。該被檢血清的稀釋度分別是1:12.5、1:25、1:50、1:100。對(duì)照管制作:第5管中加0.5%石炭酸生理鹽水0.5ml，第6管加1:25稀釋的布氏桿菌病陽性血清0.5ml，第7管加1:25稀釋的布氏桿菌病陰性血清0.5ml。加抗原:將布氏桿菌病試管凝集抗原用0.5%石炭酸生理鹽水作1:20稀釋，每支試管加0.5ml。表1-1布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)術(shù)式表（單位:ml）感作（反應(yīng)）：7支試管加完抗原后，充分混勻，置于37?溫箱中4-10h，取出后置室溫18-24h（或37?溫箱12-14h，取出后置室溫2-4h;或37?溫箱中22-24h取出），然后觀察并記錄結(jié)果。結(jié)果判定:判定結(jié)果時(shí)用“+”表示反應(yīng)的強(qiáng)度。根據(jù)各管中上清液的透明度、抗原被凝集的程度及凝集塊的形狀，來判定凝集反應(yīng)的程度。，，，，:100,抗原凝集，上清液完全透明，菌體完全被凝集呈傘狀沉于管底，振蕩時(shí)，沉淀物呈片狀、塊狀或顆粒狀。，，，:75,抗原凝集，上清液略呈混濁，菌體大部分被凝集沉于管底，振蕩時(shí)情況如上。（管底凝集物與100%凝集時(shí)相同，只是上清液稍渾濁）。，，:50,抗原凝集，上清液渾濁半透明，管底有中等量的凝集物（管底有明顯的凝集）。,:25,抗原凝集，上清液完全渾濁不透明，管底有少量凝集物或凝集的痕跡。，：抗原完全未凝集，上清液完全渾濁不透明，但由于菌體的自然下沉，在管底中央出現(xiàn)規(guī)則的菌體自沉圓點(diǎn)，振蕩后立即散開呈均勻混濁。判定標(biāo)準(zhǔn):能使50%抗原凝集的血清最高稀釋度稱為該血清的凝集價(jià)（或稱滴度）。牛、馬和駱駝的血清凝集價(jià)大于或等于1:100，判為陽性，1:50的凝集價(jià)判為疑似反應(yīng)（可疑）；豬、綿羊、山羊和狗的血清凝集價(jià)大于或等于1:50，判為陽性，1:25的凝集價(jià)判為疑似反應(yīng)（可疑）。［注意事項(xiàng)］實(shí)驗(yàn)時(shí)必須設(shè)抗原、陽性血清及陰性血清對(duì)照，以避免假陽性、假陰性的結(jié)果。結(jié)果判為可疑時(shí)，隔2-3周后采血重做。陽性畜群，重檢時(shí)仍為可疑，可判為陽性。對(duì)同群中既無臨床癥狀又無凝集反應(yīng)陽性者，馬、豬重檢仍為可疑，判陰性;牛、羊重檢仍為可疑者，可判為陽性，或以補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)核對(duì)。（二）布氏桿菌病平板凝集試驗(yàn)加血清:取潔凈玻板一塊，用蠟筆劃成方格（4cm），并注明被檢血清號(hào)碼，以100?L微量可調(diào)加樣器按下列量加被檢血清于方格內(nèi)，第l格80?L、第2格40?L、第3格20?L、第4格10?L。血清用前需放室溫，使其溫度達(dá)20?左右。每一份檢樣需換一個(gè)tip頭。大規(guī)模檢疫時(shí)，允許只用兩個(gè)血清量作試驗(yàn)，牛、馬、駱駝?dòng)?0?L和20?L;豬、山羊、綿羊、狗用80?L和40?L。加抗原:每格加布氏桿菌病平板凝集抗原30?L，滴在血清附近，而不與血清接觸。從血清量最少的一格起，用牙簽將血清與抗原混勻，一份血清用一根牙簽。抗原用前搖勻，并置室溫使其溫度達(dá)20?左右。作用：混和完畢后，將玻板置恒溫箱中或采用別的辦法適當(dāng)加溫，使溫度達(dá)到30?左右，3-5min內(nèi)記錄反應(yīng)結(jié)果。對(duì)照:每次試驗(yàn)須用標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和陰性血清以及生理鹽水作對(duì)照。5.結(jié)果判定:按下列標(biāo)準(zhǔn)記錄反應(yīng)結(jié)果。，，，，：出現(xiàn)大的凝集塊，液體完全透明，即100%凝集。2，，，：有明顯凝集塊，液體幾乎完全透明，即75%凝集。，，：有可見凝集塊，液體不甚透明，即50%凝集。