生物化學(xué)實驗習(xí)題及解答

生物化學(xué)實驗習(xí)題及解答一、名詞解釋1、pI；2、層析；3、透析；4、SDS-聚丙烯酰氨凝膠電泳；5、蛋白質(zhì)變性；6、復(fù)性；7、Tm值；8、同工酶；9、Km值；10、DNA變性；11、退火；12、增色效應(yīng)二、基礎(chǔ)理論單項選擇題1、用下列方法測定蛋白質(zhì)含量，哪一種方法需要完整的肽鍵？（）A、雙縮脲反應(yīng)B、凱氏定氮C、紫外吸收D、羧肽酶法2、下列哪組反應(yīng)是錯誤的？（）A、葡萄糖——Molish反應(yīng)B、膽固醇——Libermann-Burchard反應(yīng)C、色氨酸——坂口（Sakaguchi）反應(yīng)D、氨基酸——茚三酮反應(yīng)3、Sanger試劑是（）A、苯異硫氰酸B、2，4-二硝基氟苯C、丹磺酰氯D、?-巰基乙醇4、肽鍵在下列哪個波長具有最大光吸收？（）A、215nmB、260nmC、280nmD、340nm5、下列蛋白質(zhì)組分中，哪一種在280nm具有最大的光吸收？（）A、色氨酸的吲哚基B、酪氨酸的酚環(huán)C、苯丙氨酸的苯環(huán)D、半胱氨酸的硫原子6、SDS凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的相對分子量是根據(jù)各種蛋白質(zhì)（）A、在一定pH值條件下所帶的凈電荷的不同B、分子大小不同C、分子極性不同D、溶解度不同7、蛋白質(zhì)用硫酸銨沉淀后，可選用透析法除去硫酸銨。硫酸銨是否從透析袋中除凈，你選用下列哪一種試劑檢查？（）A、茚三酮試劑B、奈氏試劑C、雙縮脲試劑D、Folin-酚試劑8、蛋白質(zhì)變性是由于（）A、一級結(jié)構(gòu)改變B、亞基解聚C、空間構(gòu)象破壞D、輔基脫落9、用生牛奶或生蛋清解救重金屬鹽中毒是依據(jù)蛋白質(zhì)具有（）A、膠體性B、粘性C、變性作用D、沉淀作用10、有關(guān)變性的錯誤描述為（）A、蛋白質(zhì)變性后，其一級結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)改變B、蛋白質(zhì)變性后，其理化性質(zhì)和生物學(xué)活性改變C、加熱、紫外線照射、超聲波等可以引起蛋白質(zhì)變性D、變性蛋白質(zhì)粘度增加，易被酶水解，易沉淀11、雙鏈DNA熱變性后（）A、黏度下降B、沉降系數(shù)下降C、浮力密度下降D、紫外吸收下降12、酶的活化和去活化循環(huán)中，酶的磷酸化和去磷酸化位點通常在酶的哪一種氨基酸殘基上？（）A、天冬氨酸B、脯氨酸C、賴氨酸D、絲氨酸13、在生理條件下，下列哪種基團既可以作為H的受體，也可以作為H的供體？（）A、His的咪唑基B、Arg的胍基C、Cys的巰基D、Trp的吲哚基三、填空1、脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生（）色物質(zhì)，而其他氨基酸與茚三酮產(chǎn)生（）色的物質(zhì)。2、通?？捎米贤夥止夤舛确y定蛋白質(zhì)的含量，這是因為蛋白質(zhì)分子中的（）、（）、（）三種氨基酸的共軛雙鍵有紫外吸收能力。3、移液槍在每次實驗后應(yīng)將刻度調(diào)至（），讓彈簧回復(fù)原型以延長移液槍的使用壽命，并嚴禁吸取（）。4、使用離心機時，如有噪音或機身振動時，應(yīng)立即（），并且離心管須對稱放入套管中，防止機身振動，若只有一支樣品管，則另外一支要用（）代替。5、測定蛋白質(zhì)濃度的方法主要有（）、（）、（）。6、利用蛋白質(zhì)不能通過半透膜的特性，使它和其他小分子物質(zhì)分開的方法有（）和（）等。7、核酸在260nm附近有強吸收，這是由于（）。8、雙鍵DNA熱變性后，或在pH2以下，或在pH12以上時，其OD260（），同樣條件下，單鍵DNA的OD260（）。9、硝酸纖維素膜可結(jié)合（）鏈核酸。將RNA變性后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上再進行雜交，稱（）印跡法。10、常用二苯胺法測定（）含量，用苔黑酚法測定（）含量。11、變性DNA的復(fù)性與許多因素有關(guān)，包括（）、（）、（）、（）、（）。12、溫度對酶活力影響有以下兩方面：一方面（），另一方面（）。13、維生素C是（）酶的輔酶，另外還具有（）作用。14、在分光光度計的使用或檢定中，（）的準(zhǔn)確度是衡量儀器工作性能的一項重要指標(biāo)，它的準(zhǔn)確程度直接關(guān)系到所測數(shù)據(jù)的可信性及科學(xué)性。（）的誤差越大，測試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。四、問答1、紫外分光光度法測定核酸含量的原理。2、蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。3、牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。4、試述凝膠成像系統(tǒng)操作時應(yīng)注意的事項。++5、若樣品中含有蛋白質(zhì)和核苷酸等雜質(zhì)，如何排除干擾？6、體液血糖測定有哪些方法？?7、DNA在電場中的遷移率取決于哪些因素？8、瓊脂糖凝膠有哪些注意事項？9、考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質(zhì)含量的原理是什么？10、何謂Rf值？影響Rf值的主要因素是什么？11、蛋白質(zhì)分離和純化的一般方法？12、如何正確選擇核酸電泳指示劑？參考答案一、名詞解釋1、指氨基酸的正離子濃度和負離子濃度相等時的pH值，用符號pI表示。2、按照在移動相和固定相（可以是氣體或液體）之間的分配比例將混合成分分開的技術(shù)。3、通過小分子經(jīng)過半透膜擴散到水（或緩沖液）的原理，將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術(shù)。4、在去污劑十二烷基硫酸鈉存在下的聚丙烯酰氨凝膠電泳。SDS只是按照分子的大小，而不是根據(jù)分子所帶的電荷大小分離的。5、生物大分子的天然構(gòu)象遭到破壞導(dǎo)致其生物活性喪失的現(xiàn)象。蛋白質(zhì)在受到光照，熱，有機溶濟答；電泳時點樣端應(yīng)靠近負極，因為血清中各種蛋白質(zhì)在PH為8.6的環(huán)境中均帶負電，根據(jù)同性相吸，異性相斥原理，點樣端在負極時蛋白質(zhì)向正極泳動從而實現(xiàn)蛋白質(zhì)分離。2.用分光光度計測定物質(zhì)含量時，設(shè)置空白對照管的作用,為什么？答；空白對照是為了排除溶劑對吸光度的影響。溶液的吸光度表示物質(zhì)對光的吸收程度，但是作為溶劑也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必須以相同的溶劑設(shè)置對照，排除溶劑對吸光度的影響。3.簡述血清蛋白的醋酸纖維薄膜的電泳原理？答；血清蛋白中各種蛋白質(zhì)離子在電場力的作用下向著與自身電荷相反的方向涌動，而各種蛋白質(zhì)等電點不同，且在PH為8.6時所帶電荷不同，分子大小不等，形狀各有差異，所以在同一電泳下永動速度不同從而實現(xiàn)分離。4.何謂Rf值？影響Rf值的因素？答;Rf是原點到層析中心的距離與原點到溶劑前沿的距離之比。Rf的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，性質(zhì)，溶劑系統(tǒng)，層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度有關(guān)，對同一種物質(zhì)來講Rf是一個常量。5.什么是鹽析？鹽析會引起蛋白質(zhì)的變性嗎？一般用什么試劑?答;鹽析是指當(dāng)溶液中的中性鹽持續(xù)增加時，蛋白質(zhì)的溶解度下降，當(dāng)中性鹽的濃度達到一定程度的時候，蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象。鹽析不會引起蛋白質(zhì)的變性，因為蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)并未發(fā)生改變，去掉引起鹽析的因素蛋白質(zhì)仍能溶解；一般用飽和硫酸銨溶液進行鹽析6.簡述DNS法測定還原糖濃度的實驗原理？答;還原糖與DNS在堿性條件下加熱被氧化成糖酸，而DNS被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)還原糖的量與3-氨基-5硝基水楊酸顏色的深淺成正比，用分光光度計測出溶液的吸光度，通過查對標(biāo)準(zhǔn)曲線可計算出3-氨基-5硝基水楊酸的濃度，從而得出還原糖的濃度。7.影響蛋白質(zhì)沉淀的因素是什么？沉淀和變性有什么聯(lián)系？答;水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面形成水化層和雙電層從而形成穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下蛋白質(zhì)顆粒因失去電荷和脫水而沉淀。這些因素包括溶液的酸堿度、鹽溶液的濃度、溫度、重金屬離子以及有機溶劑等。變性蛋白質(zhì)不一定沉淀，沉淀的蛋白質(zhì)不一定變性。沉淀時蛋白質(zhì)可能仍然保持天然構(gòu)像，而變性是蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)被破壞失去活性。8.簡述薄層層析法分離糖類的原理/?答;薄層層析的實質(zhì)就是吸附層析，也就是在鋪有吸附劑的薄層上，經(jīng)過反復(fù)地被吸附劑吸附以及被擴展劑擴展的過程。而吸附劑對不同的物質(zhì)的吸附力不同，從而使糖在薄層上的涌動速度不同達到分離的目的9.等電點的定義？蛋白質(zhì)在等電點時有哪些特點？答;當(dāng)溶液的PH為一定數(shù)值時，其中的蛋白質(zhì)正負電荷相等，即凈電荷為零，此時的PH值就是該蛋白質(zhì)等電點。蛋白質(zhì)在等電點時的溶解度最小。10.蛋白質(zhì)顯色黃色反應(yīng)的原理是什么?反應(yīng)結(jié)果為什么深淺不一？答;含有苯環(huán)的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黃色的物質(zhì)，而且不同蛋白質(zhì)中所含的苯環(huán)數(shù)量不同，造成與試劑反應(yīng)的程度不同，因此呈現(xiàn)顏色深淺不一。11.RNA水解后的三大組分是什么？怎樣各自驗證的？答;核糖，磷酸，嘌呤堿。核糖+苔黒酚—Fe（濃HCI）綠色物質(zhì)；磷酸+鉬酸銨——藍色；嘌呤堿+硝酸銀——白色12.等電點時為什么蛋白質(zhì)溶解度最低？答;蛋白質(zhì)形成膠體二等條件是帶電荷，從而在外表面形成水化膜，導(dǎo)致各膠體顆粒不結(jié)合，當(dāng)PH等于PI時，靜電荷為零，蛋白質(zhì)分子之間不存在排斥，則聚集沉淀，所以在等電點時溶解度最小。13.雞蛋清可以用作鉛汞中毒的解毒劑是為什么?答;由于重金屬離子能與蛋白質(zhì)中帶負電基團如—COOH等作用，生成難溶重金屬的蛋白質(zhì)鹽，減少機體對重金屬的吸收。14.血清醋酸纖維薄膜電泳可將血清蛋白依次分為哪幾條帶？哪帶電泳最快？影響電泳速度有哪些？答;有血清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、r-球蛋白；其中血清蛋白點用最快。影響因素蛋白質(zhì)所帶電荷數(shù)，分子大小與形狀以及緩沖液濃度。15.什么是抑制劑？什么是變性劑？區(qū)別是什么？答;凡是能使酶活性降低而不使酶失活變性的物質(zhì)成為抑制劑；凡是能引起蛋白質(zhì)變性失活的物質(zhì)叫變性劑。抑制劑只是抑制蛋白質(zhì)的特性而變