河南科技大學(xué)微生物工程學(xué)課件第二章4節(jié)保藏、PPT幻燈片

①菌種連續(xù)傳代導(dǎo)致自發(fā)突變或回復(fù)突變是菌種發(fā)生退化的直接原因。由于連續(xù)傳代使培養(yǎng)物經(jīng)常處于旺盛的生長(zhǎng)狀態(tài)，且每次傳代時(shí)營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境等培養(yǎng)條件都是不斷變化的，與處于休眠狀態(tài)的培養(yǎng)物相比，細(xì)胞的自發(fā)突變率要高的多。菌株經(jīng)過連續(xù)傳代后，含突變基因的個(gè)體在數(shù)量上逐漸占優(yōu)勢(shì)，退化現(xiàn)象就逐漸顯露出來。1.菌種衰退的原因③菌種生長(zhǎng)的條件要求沒有得到滿足，或是遇到不利的條件，或是失去某些需要的條件。②菌種保藏方法不當(dāng)。各種菌種的保藏法對(duì)阻止菌種變異的效果不盡相同，用效果較差的條件保藏菌種時(shí)，菌種就較易發(fā)生退化。保藏操作不當(dāng)也會(huì)影響保藏效果，會(huì)影響到菌種的變異。2.防止菌種衰退的措施（1）控制傳代次數(shù)（2）創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件（3）利用不易衰退的細(xì)胞傳代（4）采用有效的菌種保藏方法

盡量避免不必要的移種和傳代，并將必要的傳代降低到最低限度，以減少細(xì)胞分裂過程中所產(chǎn)生的自發(fā)突變幾率。

如：在赤霉素生產(chǎn)菌G.fujikuroi的培養(yǎng)基中，加入糖蜜、天冬酰胺、谷氨酰胺、5‘-核苷酸或甘露醇等豐富營(yíng)養(yǎng)物時(shí)，有防止衰退效果。

對(duì)于放線菌和霉菌，菌絲細(xì)胞常含有幾個(gè)細(xì)胞核，因此用菌絲接種就易出現(xiàn)衰退，而孢子一般是單核的，用于接種就可避免這種現(xiàn)象。三、菌種的保藏

一個(gè)優(yōu)良的菌種被選育出來以后，要保持其生產(chǎn)性能的穩(wěn)定、不污染雜菌、不死亡，這就需要對(duì)菌株進(jìn)行保藏。盡量減少傳代次數(shù)，防止菌種衰退。1.菌種保藏的原理菌種保藏主要是根據(jù)菌種的生理、生化特性，人工創(chuàng)造條件使菌體的代謝活動(dòng)處于休眠狀態(tài)。保藏時(shí)，一般利用菌種的繁殖體和休眠體（孢子、芽胞等），創(chuàng)造最有利于休眠狀態(tài)的環(huán)境條件，如低溫、干燥、隔絕空氣或氧氣、缺乏營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等，使菌體的代謝活性處于最低狀態(tài)，同時(shí)也應(yīng)考慮到經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便方法。由于微生物種類繁多，代謝特點(diǎn)各異，對(duì)各種外界環(huán)境因素的適應(yīng)能力不一致，一個(gè)菌種選用何種方法保藏較好，要根據(jù)具體情況而定。2.菌種保藏方法7種常用菌種保藏方法的比較方法主要措施適宜菌種保藏期評(píng)價(jià)冰箱保藏法（斜面）低溫（4℃）各大類約1～6月簡(jiǎn)便冰箱保藏法（半固體）低溫（4℃），避氧細(xì)菌，酵母菌約6～12月簡(jiǎn)便石蠟油封藏法*低溫（4℃），阻氧各大類**約1～2年簡(jiǎn)便甘油懸液保藏法－20℃－－70℃低溫，保護(hù)劑（20％甘油）各大類約10年較簡(jiǎn)便砂土保藏法干燥，無營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)孢子的微生物約1～10年簡(jiǎn)便有效冷凍干燥保藏法干燥、低溫、無氧，有保護(hù)劑各大類>5~15年繁而高效液氮保藏法超低溫（－196℃），有保護(hù)劑各大類>15年繁而高效*用斜面或半固體穿刺培養(yǎng)物均可，一般置于4℃下。**對(duì)于可利用石油作碳源的微生物不適宜。3.菌種保藏的注意事項(xiàng)菌種在保藏前所處的狀態(tài)菌種保藏所用的基質(zhì)操作過程對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損害4.主要的菌種保藏機(jī)構(gòu)①從事原始菌株的保藏，進(jìn)行有關(guān)保藏的研究；②提供保藏菌種的品種目錄，定期（或不定期）出刊溝通信息；③提供菌種，促進(jìn)微生物菌種的交流。作用：國(guó)內(nèi)

1979年7月，我國(guó)在國(guó)家科委和中國(guó)科學(xué)院主持下，召開了第一次全國(guó)菌種保藏工作會(huì)議，在會(huì)上成立了中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)（ChinaCommitteeforCultureCollectionofMicroorganisms，CCCCM），下設(shè)六個(gè)菌種保藏管理中心：1、普通微生物菌種保藏管理中心真菌、細(xì)菌病毒中國(guó)科學(xué)院微生物研究所（北京）中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所（武漢）2、農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所（北京）3、工業(yè)微生物菌種保藏管理中心輕工業(yè)部食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所（北京）4、醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心真菌中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所（南京）細(xì)菌衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所（北京）病毒中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所（北京）5、抗生素菌種保藏管理中心中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗生素研究所（北京）四川抗生素工業(yè)研究所（成都）華北藥廠抗生素研究所（石家莊）新抗生素菌種生產(chǎn)用抗生素菌種6、獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所研究所（北京）微生物菌種保藏機(jī)構(gòu)名稱和縮寫

中國(guó)縮寫名稱縮寫名稱ACCC中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心ISF中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所SH上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所CACC抗菌素菌種保藏管理中心IA中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗菌素研究所SIA四川抗菌素工業(yè)研究所CGMCC普通微生物菌種保藏管理中心AS中國(guó)科學(xué)院微生物研究所AS-IV中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所CFCC林業(yè)微生物菌種保藏管理中心CAF中國(guó)林業(yè)科學(xué)院菌種保藏管理中心CICC工業(yè)微生物菌種保藏管理中心IFFI輕工業(yè)部食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所CMCC醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心ID中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所NICPB衛(wèi)生部藥品生物制品監(jiān)察所IV中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所CVCC獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心CIVBP中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所YM云南省微生物研究所國(guó)外重要菌種保藏機(jī)構(gòu)1、ATCC：美國(guó)模式培養(yǎng)物（菌