DB1402T9-2023黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSB311402IDB1402/T9—2023前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4試驗(yàn)材料 4.1材料 4.2試劑 4.3儀器設(shè)備 25操作流程 25.1外植體的處理 25.2培養(yǎng)基配置 25.3滅菌 25.4接種 25.5轉(zhuǎn)接 25.6生根培養(yǎng) 26生產(chǎn)檔案 2DB1402/T9—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由大同市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出、組織實(shí)施和監(jiān)督檢查。本文件由大同市農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（DTS/TC01）歸口。本文件起草單位：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)高寒區(qū)作物研究所。本文件主要起草人：李小玉、邢寶龍、沈日敏、盧瑤、岳新麗、王慧、馬濤、孟璐、張知、王力、馮婧。1DB1402/T9—2023黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)的術(shù)語和定義、試驗(yàn)材料、操作流程及生產(chǎn)檔案。本文件適用于黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T1882-2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1606-2008馬鈴薯種薯生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程N(yùn)Y/T2306-2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義LY/T1882-2010、NY/T2306-2013等界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。為便于使用，以下重復(fù)列出了LY/T1882-2010、NY/T2306-2013中的某些術(shù)語和定義。3.1黃花菜黃花菜（HemerocalliscitrinaBar.）學(xué)名萱草，又名金針菜，屬阿?；戚娌輰偎薷荼局参?。3.2植物組織培養(yǎng)在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體，在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中，使其再生新植株的過程和技術(shù)。[來源：LY/T1882-2010，3.2]3.3幼葉培養(yǎng)以植物葉片為外植體，通過植物組織培養(yǎng)的方式獲得完整植株的一種生物技術(shù)。[來源：NY/T2306-2013，3.4]4試驗(yàn)材料4.1材料應(yīng)以黃花菜幼葉為外植體。4.2試劑MS、1/2MS培養(yǎng)基（不含瓊脂和糖）、生長素類的2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、細(xì)胞分裂素類6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）、3%蔗糖、粉末瓊脂（52DB1402/T9—2023g/L）、氫氧化鈉（NaOH）。4.3儀器設(shè)備萬分之一分析電子天平、立式壓力蒸汽滅菌鍋、移液槍、精度0.1g的天平、超凈工作臺(tái)。5操作流程5.1外植體的處理5.1.1外植體剝離將剛發(fā)芽的黃花菜幼苗剪去老根，根冠表皮切除，剝離葉片直至露出黃綠色嫩葉，用洗潔精清洗，紗布包裹在流水下沖洗12h。經(jīng)上述處理后，將幼葉放進(jìn)超凈工作臺(tái)，待用。5.1.2幼葉的消毒在超凈工作臺(tái)上，先用75%的酒精對幼葉處理30s；再用0.1%的升汞溶液對幼葉滅菌8min，無菌水浸洗5次，每次1min～2min；消毒后用濾紙將幼葉表面的水分吸干，然后放到培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)。5.2培養(yǎng)基配置以MS（誘導(dǎo)培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)）作基本培養(yǎng)基附加不同激素組合：a)誘導(dǎo)幼葉愈傷組織最適培養(yǎng)基：MS+2,4-D（2.0mg/L）+6-BA（0.1mg/L）；b)幼葉愈傷組織分化培養(yǎng)基：MS+6-BA（2.0mg/L）+IBA（0.5mg/L）；c)生根培養(yǎng)基：MS+NAA（0.5mg/L）。5.3滅菌將分裝好的培養(yǎng)基放入滅菌鍋內(nèi)消毒。消毒過程應(yīng)按滅菌鍋的使用技術(shù)規(guī)程操作，滅菌氣壓采用0.1MPa，溫度采用121℃,消毒時(shí)間20min。5.4接種在超凈工作臺(tái)中完成接種，接種于誘導(dǎo)幼葉愈傷組織中，葉片需背面朝上放置。每瓶接種4個(gè)幼葉外植體，接種后置于培養(yǎng)室內(nèi)暗培養(yǎng)7d～10d，培養(yǎng)溫度為22℃~26℃,光照強(qiáng)度為2000lx～25005.5轉(zhuǎn)接誘導(dǎo)培養(yǎng)25d～30d后，轉(zhuǎn)接到幼葉愈傷組織分化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。5.6生根培