可見分光光度計(jì)3

實(shí)驗(yàn)一

紫外－可見分光光度計(jì)

的性能檢驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握紫外－可見分光光度計(jì)性能的檢驗(yàn)方法2、學(xué)會(huì)UV1100型紫外－可見分光光度計(jì)的使用方法

二、實(shí)驗(yàn)原理對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行性能檢查，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確。三、儀器與試劑UV－1100型紫外－可見分光光度儀石英比色皿（一對(duì)）擦鏡紙蒸餾水6mg/100mlK2Cr2O7溶液0.002mol/molKMnO4溶液

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1、比色皿的配對(duì)性注入蒸餾水兩個(gè)比色皿分別λ＝440nm以一個(gè)比色皿為空白（T1＝100％）測(cè)定另一個(gè)比色皿的T2ΔT=T1-T2ΔT<0.5%ΔT>0.5%兩個(gè)比色皿配對(duì)兩個(gè)比色不配對(duì)，應(yīng)進(jìn)行校正2、波長精度的檢查以蒸餾水為空白

測(cè)定KMnO4溶液的吸收曲線若測(cè)得的最大吸收波長在525±1nm以內(nèi)說明儀器波長精度符合使用要求5008000.40.2λ(nm)A0

3、重復(fù)性的檢查以0.02mol/L的H2SO4為空白在257nm處同一K2Cr2O7溶液的T，連續(xù)測(cè)定7次測(cè)定求出極差若極差<0.5%儀器的重復(fù)性符合使用要求

4.吸收值準(zhǔn)確度的檢查λ＝235nm、257nm分別測(cè)定K2Cr2O7溶液吸光度并計(jì)算吸收系數(shù)以0.02mol/L的H2SO4為空白(T＝100%）313nm、350nm與下表規(guī)定的吸收系數(shù)比較若相對(duì)偏差在1%以內(nèi)說明儀器符合使用要求波長/nm

吸收系數(shù)235123.0～126.0257142.8～146.231347.0～50.3350105.5～108.5五、思考題1、同種比色皿透光度的差異對(duì)測(cè)定有何影響？2、檢查分光光度計(jì)的重復(fù)性對(duì)測(cè)定有什么實(shí)際意義？實(shí)驗(yàn)二

吸收曲線的測(cè)繪及

吸收系數(shù)的測(cè)定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握測(cè)繪吸收曲線的方法

2、學(xué)會(huì)測(cè)定吸收系數(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理

1、若溶劑固定不變，化合物吸收曲線所出現(xiàn)的λmax、λmin或λ(S)為一定值，且數(shù)目也一定，為鑒別化合物提供了有力的證據(jù)。

2、百分吸收系數(shù)是指當(dāng)溶液濃度為1%，液層厚度為1cm時(shí)的吸光度。即三、儀器與試劑

UV－1100型紫外－可見分光光度計(jì)石英比色皿（一對(duì)）

95%乙醇（A.R）

0.005%丹皮酚對(duì)照品溶液四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟丹皮酚對(duì)照品10mg95％乙醇溶解定容至10ml搖勻精密吸取5ml置100ml量瓶95％乙醇定容作為母液備用母液中丹皮酚的含量為0.005%1、吸收曲線的測(cè)繪精密吸取母液1ml置10ml量瓶95％乙醇定容以95％乙醇為空白，進(jìn)行光譜掃描，得到吸收曲線圖。2、吸收曲線的測(cè)繪利用上述溶液，在274nm波長處測(cè)定其吸光度并計(jì)算百分吸收系數(shù)。實(shí)驗(yàn)三

分光光度法測(cè)定槐花中總黃酮的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定槐花中總黃酮含量的方法

2、鞏固紫外－可見分光光度計(jì)的操作方法二、實(shí)驗(yàn)原理黃酮類化合物分子中的羰基、羥基等結(jié)構(gòu)可與金屬鹽類試劑如鋁鹽、鉛鹽等生成有色配合物，可用于定量分析。三、儀器與試劑

UV－1100型紫外－可見分光光度儀石英比色皿（一對(duì)）

5%NaNO2溶液

10%Al(NO3)3溶液

NaOH試液

蘆丁對(duì)照品

槐花藥材

其余試劑均為分析純；

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1、對(duì)照品溶液的制備加甲醇，水浴使溶解蘆丁對(duì)照品50mg置25ml量瓶中放冷，加甲醇至刻度，搖勻精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，搖勻即得（每1ml中含無水蘆丁0.2mg）2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0、1、2、3、4、5ml分別置25ml量瓶中各加H2O加5%NaNO21ml搖勻放置6min10%Al(NO3)31ml搖勻放置6min加加NaOH試液

10ml加水至刻度搖勻，放置15min至5mlλ=500nm以相應(yīng)試劑為空白測(cè)定吸光度（A）以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度濃度（mg/ml）3、供試品溶液的制備槐花粗粉1g精密稱定置索氏提取器中加乙醚加熱回流至提取液無色放冷棄乙醚液加甲醇90ml加熱回流至提取液無色移至100ml量瓶中甲醇少量多次洗滌容器洗液并入量瓶中加甲醇至刻度搖勻精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，搖勻即得4、樣品的測(cè)定精密吸取供試品溶液3ml置25ml量瓶中照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法自“加水至5ml”起從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出供試品溶液中蘆丁的重量，即得依法測(cè)定吸光度槐花中含總黃酮以無水蘆?。–27H30O16）計(jì)，不得少于8.0%。五、注意事項(xiàng)

1、對(duì)照品和樣品應(yīng)同時(shí)顯色

2、顯色劑加入的順序、加入量和顯色時(shí)間要正確六、思考題

1.分光光度法有哪些影響因素？

2.試述標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)四、薄層板的制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆毡影宓闹瓢宸椒?。二、儀器與試劑天平（0.1g）研缽玻璃板10cm×20cmCMC-Na水溶液（3‰）蒸餾水薄層層析用硅膠GF254（青島海洋化工廠）三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟

1.洗板選取板面平整的玻璃板，洗凈后放置在干凈、平整的臺(tái)面上，陰干備用。2．勻漿將吸附劑1份（3.0g）和水3份在研缽中向同一方向研磨混合均勻。

3．鋪制將已調(diào)制好的吸附劑勻漿倒至玻璃板的一端，用研棒將勻漿引到玻板的各個(gè)邊緣，輕輕震動(dòng)，使吸附劑均勻鋪開成一薄層。置水平臺(tái)上陰干。4．活化將陰干的薄層板至于110℃烘箱中活化30分鐘，置于有干燥器中備用。四、思考題

1．薄層板的鋪制過程中應(yīng)注意哪些問題？

實(shí)驗(yàn)五薄層色譜定性分析

（五味子的定性鑒別）

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握薄層色譜的定性分析方法。2.熟悉薄層板的點(diǎn)樣方法。二、實(shí)驗(yàn)原理

中藥五味子中，五味子甲素為其主要有效成分之一，為了更好的進(jìn)行定性鑒別，選用五味子甲素對(duì)照品和五味子對(duì)照藥材進(jìn)行對(duì)照，根據(jù)相同的組分在相同的條件下，應(yīng)該有相同的顏色和比移值來作為定性鑒別的依據(jù)。五味子植株五味子藥材三、儀器與試劑定量毛細(xì)管已制備好的薄層板（硅膠GF254）展開缸所用試劑均為分析純五味子粉末定量毛細(xì)管雙槽展開缸對(duì)照品四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1.供試品液的制備：取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品液。2.對(duì)照藥材溶液的制備：取五味子對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。3.對(duì)照品溶液的制備：取五味子甲素對(duì)照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液。

4.吸取上述三種溶液各2μl，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。五、思考題

1．如何克服薄層展開過程中的邊緣效應(yīng)？引起邊緣效應(yīng)的因素有哪些？

實(shí)驗(yàn)六、高效液相色譜儀的使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆崭咝б合嗌V儀的使用方法了解高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)高效液相流程圖1溶劑貯器,2泵,3流量與速度檢測(cè)裝置,4進(jìn)樣閥,5預(yù)柱(保護(hù)柱),6分離柱(色譜柱),7檢測(cè)器,8數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng),9廢液瓶二、儀器與試劑

L-2000液相色譜儀（L-2400紫外檢測(cè)器）C18反相鍵合色譜柱（250mm×4.6mm）微量進(jìn)樣器（25μl）過濾器（0.45μm）及脫氣裝置苯、甲苯、萘甲醇（色譜純）重蒸餾水三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟

（一）流動(dòng)相的預(yù)處理1．過濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。2．對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。（二）安裝色譜柱按色譜柱標(biāo)示意流液方向安裝好色譜