蘭花組織培養(yǎng)技術(shù)

蘭花組織培育技術(shù)大綱：在合適的條件下，將蘭花植株的外植體在無菌環(huán)境中應(yīng)用人工培育基，經(jīng)過外植體的采集與辦理、培育基的制作、外植體的接種、繼代增殖以及馴化移栽等操作技術(shù)，可在短期內(nèi)獲得大批幼小的無病毒植株，從而達(dá)到增殖擴(kuò)繁的目的。組織培育技術(shù)是經(jīng)濟(jì)有效迅速生殖優(yōu)異品種的方法，也是產(chǎn)生脫毒苗的重要路子。要點(diǎn)詞：組織培育蘭花外植體試管苗花屬蘭科多年生草本植物，中國蘭花為蘭科屬中的地生蘭。其香味怡人，花色淡雅，品種豐富，素有“花中君子”之稱。擁有很強(qiáng)的賞析價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，深受人們的喜愛。其他，其也是目前生界上栽種較廣的切花資料之一，蘭花的切花生產(chǎn)，需要大批量的種苗，要獲得優(yōu)異高產(chǎn)，蘭花種苗必定具備種性一致，生長齊一，長勢旺盛的特點(diǎn)。在種苗生產(chǎn)上運(yùn)用最廣泛的是組培快繁和分株。生產(chǎn)實(shí)踐證明，運(yùn)用組織培育快繁技術(shù)生產(chǎn)種苗，其長勢旺盛，品種復(fù)壯，抗病性強(qiáng)，切花質(zhì)量好，對加快優(yōu)異品種的培育，挽救珍惜瀕危種類等起到十分重要的作用。蘭花在植物分類學(xué)上屬于單據(jù)葉植物中的一個(gè)科，為多年生草本植物，附生、地生或腐生。蘭花根呈圓柱狀，屬肉質(zhì)組織，莖很短，高度約為2～3cm，蘭葉大多葉邊全緣，有的略有鋸齒。其花屬于不整齊花范圍，總狀花序。蘭屬植物的果實(shí)為蒴果，呈三角或六角形，俗稱“蘭蓀“。一、無菌培育物的建立（一）培育容器的沖洗及培育基的制作培育容器的沖洗容器的沖洗可否干凈直接影響組織培育的成敗，為保證培育資料在瓶內(nèi)生長強(qiáng)壯，在培育先期必然要對容器進(jìn)行完整的沖洗與滅菌。以達(dá)到“瓶壁锃亮、水膜均勻，不掛水珠”為標(biāo)準(zhǔn)。沖洗時(shí)用洗衣粉水洗刷，再用清水沖洗3～4次，干燥后備用。培育基的制作培育基是植物組織培育的“血液”，血液的成分及其供應(yīng)狀況直接關(guān)系到外植體的生善于分化。組培快繁中最常用的培育基主若是MS培育基。母液要依照藥劑的化學(xué)性質(zhì)分別配置，一般配成大批元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物、激素類母液。其配置方法是先進(jìn)行大批元素的配置，稱量時(shí)應(yīng)注意節(jié)余的藥品不能夠回放在瓶中，應(yīng)做其他辦理。電子天平在使用時(shí)先對其進(jìn)行調(diào)平，爾后進(jìn)行微量元素母液、有機(jī)物母液的配制。MS母液配好今后，則可進(jìn)行培育基的制作，繼之對瓊脂和蔗糖進(jìn)行稱取、溶解，瓊脂表現(xiàn)半透明狀時(shí)將糖加入容器中溶解，再加入早先吸取好的各樣母液混雜均勻后轉(zhuǎn)入1L容量瓶中對其進(jìn)行定容，爾后依照培育基的要求對PH進(jìn)行調(diào)整（PH值控制在5.6～5.8測定不得少于3～4次）。進(jìn)行分裝時(shí)，一般以培育瓶的1/4～1/3為宜，分裝后馬上進(jìn)行滅菌。培育基采用濕熱滅菌法，把分裝后的培育瓶置入高壓鍋中進(jìn)行高溫高壓滅菌。當(dāng)壓力升至0.11MPa(溫度121℃）時(shí)，保持15～30min,即可達(dá)到滅菌的目的。（二）外植體的采集及接種外植體的采集外植體的采集是依照不同樣的培育目標(biāo)而異。平時(shí)采用一些生長強(qiáng)壯的當(dāng)年生枝條、飽滿而未萌芽的側(cè)芽作為外植體。其取材季節(jié)對于大多數(shù)植物而言，都應(yīng)在生長開始的季節(jié)采樣，對于利用莖尖培育的植物一般資料越小成活率越低，因此莖尖培育成活的臨界大小應(yīng)為一個(gè)莖尖分生組織帶1～2個(gè)葉原基，約為0.2～0.3mm,莖段長約0.5cm。外植體的沖洗待外植體采回后，先用流水沖洗半小時(shí)左右，使其表面吸附物除掉，在轉(zhuǎn)入其他容器中加上沖洗劑進(jìn)行清洗；在將易感染的各部分剝?nèi)?、洗凈，再切去上部幼葉。消毒與接種接種是組織培育可否成功的要點(diǎn)因素。接種前必定對接種室、接種人員，接種資料進(jìn)行完整的消毒與滅菌。針對外植體的滅菌辦理，則先將外植體在75%的酒精中浸10s，再用蒸餾水沖洗三次。再剝?nèi)?～3片葉，放入5%次氯酸鈉水溶液5min，再用無菌水沖洗3～4次，剝至留下最后一枚葉片，以生長點(diǎn)為中心切去0.3～0.4cm的方塊，將切下的外植體接入準(zhǔn)備好的培育瓶中進(jìn)行培育。外植體經(jīng)消毒接入啟動培育基也許引誘培育基中引誘出花芽，再轉(zhuǎn)入繼代培育基中，則引誘產(chǎn)生簇生的原球莖。培育培育溫度為20～25℃，每天12～16h，光照強(qiáng)度為1000～2000Lx。二、繼代增殖經(jīng)合適培育后，約4～6周后可在外植體周圍形成好多球狀物，即原球莖，將其切割接入培育基中，以促使嫩莖長出更多的原球莖，從而分化培育成苗。切取莖尖時(shí)要帶兩個(gè)左右葉原基，莖尖大小對增值速率也有影響，同時(shí)，繼代周期對原球莖增殖也有影響原球莖隨繼代周期的延長而增加。（一）試管苗生根壯苗培育在生根培育基中，轉(zhuǎn)入單株生長或單株叢生的無根小苗培育其生根。生根培育基多采用1/2MS培育基，加入合適生長素。當(dāng)小植株生出3～5條水平根，每根長2～3cm時(shí)為最合適的出瓶煉苗階段。平時(shí)將其從根狀莖基部切下轉(zhuǎn)入壯苗培育基中培育，培育溫度提升至28℃，當(dāng)苗長至12cm高，擁有3～4片真葉時(shí)就可以移栽。（二）試管苗的馴化移植試管苗馴化移植是組培快繁的重要環(huán)節(jié)。移植前可將培育瓶在自然光下煉苗15～20d，以使其感覺溫差現(xiàn)象，此后再開瓶移植。移植時(shí)洗去根部的瓊脂，置于陰涼處，待苗木陰干后，就可以移植到通氣、透水，保濕基質(zhì)中。移栽基質(zhì)對成活率的影響很大，采用蛭石、珍珠巖和木屑混雜物加入少量腐殖質(zhì)含量高的土壤作為基質(zhì)栽種建蘭試管苗，成活率高，能夠達(dá)到98%以上，植物生長強(qiáng)壯。若是只用蛭石和珍珠巖作為蘭花栽種基質(zhì)，成活率雖高，但植物生長一般。其他移栽后2周內(nèi)要采用必然的保溫措施。三、影響蘭花生根和移栽成活的因素（一）生長調(diào)治物質(zhì)的不同樣種類及濃度比率的影響生長調(diào)治物質(zhì)主要有生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等，其中生長素對引誘芽、生根和提升移栽成活率有著很大的影響。生長素/細(xì)胞分裂素大于1促使生根，生長素/細(xì)胞分裂素小于1引誘芽，生長素/細(xì)胞分裂素等于即能促使生根又能引誘芽。（二）無機(jī)鹽濃度培育基內(nèi)無機(jī)鹽濃度高時(shí)有利于發(fā)生莖、葉，而較低時(shí)有利于生根，因此生根培育基多采用1/2MS培育基，加入合適的生長素。因此，降低無機(jī)鹽濃度對植物生根收效較好，有利于馴化成功。（三）環(huán)境因子環(huán)境條件也影響試管苗馴化成活率，要點(diǎn)是控制好移植前10d的光、溫、濕條件。合適遮陽，防備太陽光直射造成試管苗迅速失水而死亡。溫度一般保持在25～30℃為好，相對空氣濕度保持在80%～90%。四、蘭花組培的應(yīng)用（一）迅速生殖優(yōu)異品種實(shí)踐證明，植物組織培育是迅速生殖培育優(yōu)異品種的有效手段，并在戰(zhàn)勝遠(yuǎn)緣雜交不親和性、種質(zhì)資源的保護(hù)、雜種胚發(fā)育不良等都擁有重要價(jià)值。同樣蘭花在組培快繁中也有很高的應(yīng)用價(jià)值。蘭花是最早睜開組織培養(yǎng)研究的植物之一，也是研究最多發(fā)展最快的科屬之一。（二）建立無病毒株系