產(chǎn)淀粉酶菌種的鑒定

實(shí)驗(yàn)八產(chǎn)淀粉酶菌種的鑒定實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解微生物分類與鑒定中的基本程序和常規(guī)實(shí)驗(yàn)技術(shù)與方法；2.熟悉16SrRNA基因PCR擴(kuò)增進(jìn)行細(xì)菌鑒定的基本原理并初步掌握PCR的操作技術(shù)；3.初步學(xué)會(huì)網(wǎng)上的有關(guān)網(wǎng)站的微生物資源信息和數(shù)據(jù)庫的使用并利用其進(jìn)行細(xì)菌鑒定分析。實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)菌分類鑒定的方法：形態(tài)學(xué)特征的鑒定生理生化特征的鑒定分子特征的鑒定形態(tài)學(xué)的鑒定固體平板菌落，固體斜面，半固體穿刺，液體的培養(yǎng)特征；顯微鏡下的細(xì)胞形狀，革蘭氏染色反應(yīng)，抗酸性染色，是否具有芽孢（芽孢在細(xì)胞內(nèi)的位置）、莢膜和鞭毛（鞭毛著生的位置）等。

分子鑒定16SrDNA是編碼原核生物核糖體RNA小亞基16SrRNA的基因，與細(xì)菌整個(gè)基因組的變化相比，它具有高度的保守性，其變化的概率與細(xì)菌的變異和進(jìn)化程度是一致的，所以有助于細(xì)菌的鑒定和分類。結(jié)合完善的數(shù)據(jù)庫，16SrDNA序列分析可以快速準(zhǔn)確的對(duì)細(xì)菌進(jìn)行種屬鑒定，確定細(xì)菌在進(jìn)化中的位置。16SrDNA序列包含10個(gè)可變區(qū)和與之相間的11個(gè)恒定區(qū)。根據(jù)恒定區(qū)的保守性可以設(shè)計(jì)出細(xì)菌的通用引物，并且擴(kuò)增出所有細(xì)菌的16SrDNA片段。可變區(qū)因細(xì)菌而異，能夠揭示生物物種特征核酸序列，是種屬鑒定的分子基礎(chǔ)。擴(kuò)增細(xì)菌的16SrDNA基因需要其染色體DNA作為模板進(jìn)行PCR，可以提取細(xì)菌染色體DNA作為模板，也可以直接挑取平板上經(jīng)過活化的菌落做PCR以達(dá)到快速簡便的目的。PCR的原理和步驟原理

PCR是一種由引物介導(dǎo)的選擇性體外擴(kuò)增DNA的方法。步驟變性（Denature）：目的雙鏈DNA片段在95℃下解鏈；退火（Anneal）：兩種引物在適當(dāng)溫度（59℃左右）下與模板上的互補(bǔ)序列通過氫鍵配對(duì)；延伸（Extension）：在TaqDNA聚合酶合成DNA的最適溫度下，以目的DNA為模板進(jìn)行合成。由這三個(gè)基本步驟組成一輪循環(huán)，理論上每一輪循環(huán)將使目的DNA擴(kuò)增一倍，這些合成的DNA又可作為下一輪循環(huán)的模板，所以經(jīng)25-35輪循環(huán)就可使DNA擴(kuò)增達(dá)106倍。5’5’3’3’PCRCycle1Denaturation95℃

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