在小鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞中用發(fā)夾寡核苷酸調(diào)控由細(xì)胞因子誘導(dǎo)的iNOS的表達(dá)

發(fā)夾寡核苷酸調(diào)控MCEC中iNOS的表達(dá)馬酉初|2016.9.19|中南林業(yè)科技大學(xué)本文主要內(nèi)容在MCEC中，TNF-α和IFN-γ的組合可增強(qiáng)iNOS的表達(dá)；在MCEC中，NF-κB對(duì)由TNF-α及IFN-γ誘導(dǎo)iNOS的表達(dá)起介導(dǎo)作用；設(shè)計(jì)了一個(gè)攜帶NF-κB基序的雙鏈發(fā)夾寡核苷酸，并證明該核苷酸可以抑制上述作用。背景資料一氧化氮合酶（NOS）的三種同工酶：神經(jīng)元型一氧化氮合酶（Neuronalnitricoxidesynthase，nNOS或NOS1）內(nèi)皮型一氧化氮合酶（Endothelialnitricoxidesynthase，eNOS或NOS3）誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（Induciblenitricoxidesynthase，iNOS或NOS2）促炎性細(xì)胞因子：腫瘤壞死因子-α（Tumornecrosisfactoralpha，TNF-α）干擾素-γ(Interferongamma，IFN-γ)背景資料細(xì)胞因子可通過核轉(zhuǎn)錄因子-κB（Nuclearfactorkappa-B，NF-κB）的發(fā)揮它們的作用，以改變基因表達(dá)。在小鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞（MCECs）中，IFN-γ與TNF-α的共同作用能增加的NF-kB（與DNA）的結(jié)合力（binding），進(jìn)一步增加iNOS的表達(dá)。轉(zhuǎn)錄因子活性可以通過反義寡核苷酸（Antisenseoligonucleotides）或雙鏈啞鈴寡核苷酸（Double-strandeddumbbelloligonucleotides）來調(diào)節(jié)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康臏y(cè)試含有NF-κB結(jié)合位點(diǎn)（bindingsite）共有序列的雙鏈發(fā)夾（Hairpin，HP）寡核苷酸的功效（有效抑制細(xì)胞因子誘導(dǎo)的iNOS表達(dá)）。實(shí)驗(yàn)材料化學(xué)試劑（CHX等，分子級(jí)）核酸實(shí)驗(yàn)材料（引物、dCTP、32P-ATP等）蛋白印跡（顯色系統(tǒng)、iNOS標(biāo)準(zhǔn)樣及其抗體等）細(xì)胞（MCEC及其培養(yǎng)基、血清等）技術(shù)路線實(shí)驗(yàn)方法對(duì)iNOS表達(dá)的誘導(dǎo)含TNF-α(20ng/ml)、IFN-γ(1,000units/ml)的培養(yǎng)基時(shí)間梯度對(duì)iNOS表達(dá)的調(diào)節(jié)NF-kB發(fā)夾核苷酸(1μM)或突變型NF-kB發(fā)夾核苷酸(1μM)TNF-α、IFN-γ誘導(dǎo)前3