各種蛋白標(biāo)簽匯總

各種蛋白標(biāo)簽匯總之相禮和熱創(chuàng)作蛋白標(biāo)簽蛋白標(biāo)簽(proteintag)是指利用DNA體外重組技術(shù)，與目的蛋白一同交融表達(dá)的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達(dá)、檜測、示蹤和純化等.隨著技術(shù)的不竭進(jìn)展，研討人員相繼開發(fā)出了具有各種分歧功能的蛋白標(biāo)簽.現(xiàn)在，這些蛋白標(biāo)簽已在根底研討和商業(yè)化產(chǎn)品消費(fèi)等方面得到了廣泛的運(yùn)用.標(biāo)簽純化促進(jìn)溶解度抗體效價(jià)細(xì)胞標(biāo)識表記標(biāo)幟His6++/-+/-Flag++/-+GST+++MBP++++His-MBP++++HA+eGFP/CFP/YFP+++Myc+His-Myc++His-AviTag?++++++Sumo++++His-Sumo+++++SNAP-Tag?++++++HaloTag?++++++TrxHISHis6是指六個(gè)組氨酸殘基組成的交融標(biāo)簽，可撥出在目的蛋白的C末端或N末端.當(dāng)某一個(gè)標(biāo)簽的運(yùn)用，一是能構(gòu)成表位利于純化和檜測；二是構(gòu)成獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征(結(jié)合配體)利于純化.組氨酸殘基側(cè)鏈與固態(tài)的鎳有猛烈的吸收力，可用于固定化金屬螯合層析(1乂人0,對重組蛋白進(jìn)行分離純化.運(yùn)用His-tag有上面優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)簽的分子量小，只要~0.84KD,而GST和蛋白A分別為~26KD和~30KD,一樣平常不影響目的蛋白的功能；His標(biāo)簽交融蛋白可以在非離子型概況活性劑存在的條件下或變性條件下純化，前者在純化疏水性強(qiáng)的蛋白得到運(yùn)用，后者在純化包涵體蛋白時(shí)特別有用，用高濃度的變性劑溶解后經(jīng)過金屬螯和親和層析往除雜蛋白，使復(fù)性不受別的蛋白的干擾，或進(jìn)行金屬螯和親和層析復(fù)性；His標(biāo)簽交融蛋白也被用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA互相作用研討；His標(biāo)簽免疫原性絕對較低，可將純化的蛋白直接注射動(dòng)物進(jìn)行免疫并制備抗體.可運(yùn)用于多種表達(dá)零碎，純化的條件和氣；可以和別的的親和標(biāo)簽一同構(gòu)建雙親和標(biāo)簽.Flag標(biāo)簽蛋白Flag標(biāo)簽蛋白為編碼8個(gè)氨基酸的親水性多肽(DYKDDDDK),同時(shí)載體中構(gòu)建的Kozak序列使得帶有FLAG的交融蛋白在真核表達(dá)零碎中表達(dá)服從更高.FLAG作為標(biāo)簽蛋白，其交融表達(dá)目的蛋白后具有以下優(yōu)點(diǎn)：FLAG作為交融表達(dá)標(biāo)簽，其通常不會與目的蛋白互相作用而且通常不會影響目的蛋白的功能、性子，這樣就有利用研討人員對交融蛋白進(jìn)行卑鄙研討.交融FLAG的目的蛋白，可以直接經(jīng)過FLAG進(jìn)行親和層析，此層析為非變性純化，可以純化有活性的交融蛋白，而且純化服從高.FLAG作為標(biāo)簽蛋白，其可以被抗FLAG的抗體辨認(rèn)，這樣就方便經(jīng)過WesternBlot、ELISA等方法對含有FLAG的交融蛋白進(jìn)行檢測、鑒定.交融在N端的FLAG,其可以被腸激酶切除（DDDK）,從而得到特異的目的蛋白.因而現(xiàn)FLAG標(biāo)簽已廣泛的運(yùn)用于蛋白表達(dá)、純化、鑒定、功能研討及其蛋白互相作用等相關(guān)領(lǐng)域.MBP（麥芽糖結(jié)合蛋白）MBP（麥芽糖結(jié)合蛋白）標(biāo)簽蛋白大小為40卜口2,由大腸桿菌K12的malE基因編碼.MBP可添加在細(xì)菌中過量表達(dá)的交融蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白.MBP標(biāo)簽可經(jīng)過免疫分析很方便地檢測，）.有必要用位點(diǎn)埋頭的蛋白酶切割標(biāo)簽.假如蛋白在細(xì)菌中表達(dá)，MBP可以交融在蛋白的N端或C端.純化：交融蛋白可經(jīng)過交聯(lián)淀粉親和層析一步純化.結(jié)合的交融蛋白可用10mM麥芽糖在生理緩沖液中進(jìn)行洗脫.結(jié)合親和力在微摩爾范圍.一些交融蛋白在0.2%TritonX-100或0.25%Tween20存在下不克不及無效結(jié)合，而其他交融蛋白則不受影響.緩沖條件為pH7.0到8.5,鹽濃度可高達(dá)1M,但不克不及運(yùn)用變性劑.假如要往除MBP交融部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除.檢測：可用MBP抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測.GST（谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移施）6$?。ü入赘孰膸€基轉(zhuǎn)移酶）標(biāo)簽蛋白本人是一個(gè)在解毒過程中起到緊張作用的轉(zhuǎn)移酶，它的自然大小為26KD.將它運(yùn)用在原核表達(dá)的緣故原由大致有兩個(gè)，一個(gè)是由于它是一個(gè)高度可溶的蛋白，盼看可以利用它添加外源蛋白的可溶性；另一個(gè)是它可以在大腸桿菌中大量表達(dá)，起到進(jìn)步表達(dá)量的作用,GST交融表達(dá)零碎廣泛運(yùn)用于各種交融蛋白的表達(dá)，可以在大腸桿菌和酵母菌等宿主細(xì)胞中表達(dá).結(jié)合的交融蛋白在非變性條件下用10mM還原型谷胱甘肽洗脫.在大多數(shù)狀況下，交融蛋白在水溶液中是可溶的，并構(gòu)成二體6$T標(biāo)簽可用酶學(xué)分析或免疫分析很方便的檢測.標(biāo)簽有助于呵護(hù)重組蛋白免受胞外蛋白酶的降解并進(jìn)步其波動(dòng)性.在大多數(shù)狀況下GST交融蛋白是完全或部分可溶的.純化：該表達(dá)零碎表達(dá)的GST標(biāo)簽蛋白可直接從細(xì)菌裂解液中利用含有還原型谷胱甘肽瓊脂糖凝膠（Glutathionesepharose）親和樹脂進(jìn)行純化,GST標(biāo)簽蛋白可在和氣、非變性條件下洗脫，因而保存了蛋白的抗原性和生物活性6$丁在變性條件下會失往對谷胱甘肽樹脂的結(jié)合才能，因而不克不及在純化緩沖液中加入強(qiáng)變性劑如：鹽酸胍或尿素等.假如要往除GST交融部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除.檢測：可用GST抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測.HAHA標(biāo)簽蛋白，標(biāo)簽序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的紅細(xì)胞凝集素概況抗原決定簇，9個(gè)氨基酸，對外源靶蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響小，容易構(gòu)建成標(biāo)簽蛋白交融到N端或者C端.易于用Anti—HA抗體檢測和ELISA檢測.c-MycC-Myc標(biāo)簽蛋白，是一個(gè)含11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽，標(biāo)簽序列Glu-Gln-Lys-Leu-ne-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu,這11個(gè)氨基酸作為抗原表位表達(dá)在分歧的蛋白質(zhì)框架中仍可辨認(rèn)其相應(yīng)抗體.0乂丫?tag已成功運(yùn)用在Western-blot雜交技術(shù)、免疫沉淀和流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)中，可用于檢測重組蛋白質(zhì)在靶細(xì)胞中的表達(dá).eGFPeGFP標(biāo)簽蛋白，是加強(qiáng)型綠色熒光蛋白。6尸匕激發(fā)波長為488nm,發(fā)射波長為507nm,其是由野生型綠色熒光蛋白GFP經(jīng)過氨基酸漸變和密碼子優(yōu)化而來的.絕對于GFP,eGFP熒光強(qiáng)度更強(qiáng)、熒光性子更波動(dòng).同時(shí)載體中構(gòu)建的Kozak序列使得含有eGFP的交融蛋白在真核表達(dá)零碎中表達(dá)服從更高.eGFP作為標(biāo)簽蛋白，其交融表達(dá)目的蛋白后具有以下優(yōu)點(diǎn)：不必破碎組織細(xì)胞和不加任何底物，直接經(jīng)過熒光顯微鏡就能在活細(xì)胞中發(fā)出綠色熒光，實(shí)時(shí)表現(xiàn)目的基因的表達(dá)狀況，而且熒光性子波動(dòng)，被譽(yù)為活細(xì)胞探針.其自發(fā)熒光，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細(xì)胞中的定位等狀況.同時(shí)細(xì)胞內(nèi)的別的產(chǎn)品不會干擾標(biāo)簽蛋白檢測，從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性.其低斷喪、高靈敏度檢測，非常適用于高通量的藥物施選.因而現(xiàn)eGFP表達(dá)標(biāo)簽被廣泛地運(yùn)用于基團(tuán)表達(dá)調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研討、蛋白在細(xì)胞中的功能定位、遷移變更及藥物挑選等方面.此外由我公司提供的IRES雙順反子載體，可同目的基因共表達(dá)eGFP,用于目的基因的體內(nèi)蛋白示蹤研討.eYFPeYFP標(biāo)簽蛋白為加強(qiáng)型黃綠色熒光蛋白eYFP,激發(fā)波長為513nm，發(fā)射波長為527nm,其是由野生型黃綠色熒光蛋白YFP經(jīng)過氨基酸漸變和密碼子優(yōu)化而來的.絕對于YFP,eYFP熒光強(qiáng)度更強(qiáng)、熒光性子更波動(dòng).同時(shí)載體中構(gòu)建的Kozak序列使得含有eYFP的交融蛋白在真核表達(dá)零碎中表達(dá)服從更高.eYFP作為標(biāo)簽蛋白，其交融表達(dá)目的蛋白后具有以下優(yōu)點(diǎn)：不必破碎組織細(xì)胞和不加任何底物，直接經(jīng)過熒光顯微鏡就能在活細(xì)胞中發(fā)出綠色熒光，實(shí)時(shí)表現(xiàn)目的基因的表達(dá)狀況，而且熒光性子波動(dòng)，被譽(yù)為活細(xì)胞探針.其自發(fā)熒光，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細(xì)胞中的定位等狀況.同時(shí)細(xì)胞內(nèi)的別的產(chǎn)品不會干擾標(biāo)簽蛋白檢測，從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性.其低斷喪、高靈敏度檢測，非常適用于高通量的藥物施選.因而現(xiàn)eYFP表達(dá)標(biāo)簽被廣泛的運(yùn)用與基團(tuán)表達(dá)調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研討、蛋白在細(xì)胞中的功能定位、遷移變更及藥物挑選等方面.此外由我公司提供的IRES雙順反子載體，可同目的基因共表達(dá)eYFP,用于目的基因的體內(nèi)蛋白示蹤研討.eCFPeCFP標(biāo)簽蛋白為加強(qiáng)型青色熒光蛋白eCFP,激發(fā)波長為433nm或453nm,發(fā)射波長為475nm或501nm,其是由野生型青色熒光蛋白CFP經(jīng)過氨基酸漸變和密碼子優(yōu)化而來的.絕對于CFP,eCFP熒光強(qiáng)度更強(qiáng)、熒光性子更波動(dòng).同時(shí)我體中構(gòu)建的Kozak序列使得含有eCFP的交融蛋白在真核表達(dá)零碎中表達(dá)服從更高.eCFP作為標(biāo)簽蛋白，其交融表達(dá)目的蛋白后具有以下優(yōu)點(diǎn)：不必破碎組織細(xì)胞和不加任何底物，直接經(jīng)過熒光顯微鏡就能在活細(xì)胞中發(fā)出綠色熒光，實(shí)時(shí)表現(xiàn)目的基因的表達(dá)狀況，而且熒光性子波動(dòng)，被譽(yù)為活細(xì)胞探針.其自發(fā)熒光，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細(xì)胞中的定位等狀況.同時(shí)細(xì)胞內(nèi)的別的產(chǎn)品不會干擾標(biāo)簽蛋白檢測，從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性.其低斷喪、高靈敏度檢測，非常適用于高通量的藥物施選.因而現(xiàn)eCFP表達(dá)標(biāo)簽被廣泛的運(yùn)用與基團(tuán)表達(dá)調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研討、蛋白在細(xì)胞中的功能定位、遷移變更及藥物挑選等方面.AviTagAviTag標(biāo)簽蛋白是一個(gè)15個(gè)氨基酸的短肽，具有一個(gè)單生物素化賴氨酸位點(diǎn)，與已知自然可生物素化序列完全分歧，可以加在目的蛋白的N端和C端.交融表達(dá)后，可被生物素連接酶生物素化，為了純化重組蛋白選用低親和性的單體抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白質(zhì)分離純化，還用于蛋白質(zhì)互相作用研討.AviTag標(biāo)簽零碎具有以下幾大優(yōu)點(diǎn)：無論在體外或者體內(nèi)，幾乎全部的蛋白都可以在一個(gè)獨(dú)特的AviTag位點(diǎn)隨便且無效地被生物素化；生物素化是經(jīng)過酶和底物的反應(yīng)來完成，反應(yīng)條件相當(dāng)和氣而且標(biāo)識表記標(biāo)幟的埋頭性極高；生物素AviTag只要15個(gè)氨基酸，對蛋白空間結(jié)構(gòu)的影響非常小.SNAP-TagSNAP-Tag是新一代的蛋白標(biāo)簽技術(shù)，不但埋頭性極高而且波動(dòng)，最大的優(yōu)點(diǎn)是適用于多種環(huán)境下的蛋白質(zhì)檢測與純化，如活細(xì)胞內(nèi)、溶液中、或固態(tài)相（如SDSgels）等.SNAP-Tag是從人的O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移（O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase）獲得.無論體內(nèi)還是體外，SNAP-Tag都能與底物高特異性地共價(jià)結(jié)合，使蛋白標(biāo)識表記標(biāo)幟上生物素或熒光基團(tuán)（如熒光素和若丹明）.SNAP所帶的活性巰基位點(diǎn)接受了苯甲基鳥嘌呤所攜帶的側(cè)鏈苯甲基基團(tuán)，釋放出了鳥嘌呤.這種新的硫醚鍵共價(jià)結(jié)合使SNAP所帶的目的蛋白攜帶上了苯甲基基團(tuán)所帶的標(biāo)識表記標(biāo)幟物.苯甲基鳥嘌呤在生化條件下波動(dòng)，而且沒有其他蛋白會和這類物質(zhì)作用，以是SNAP標(biāo)簽反應(yīng)是高特異的.檢測：生物素或各種顏色熒光的底物（如熒光素、若丹明）可滲出進(jìn)入細(xì)胞，方便快捷地進(jìn)行活細(xì)胞內(nèi)SNAP-Tag交融蛋白的標(biāo)識表記標(biāo)幟與檢測.它們也可特異性地標(biāo)識表記標(biāo)幟大腸桿菌，酵母和哺乳動(dòng)物等細(xì)胞抽提液或曾經(jīng)純化的蛋白液中的SNAP-tag交融蛋白.將純化的或未純化的SNAP-Tag交融蛋白與概況固定了苯甲基鳥嘌呤的基質(zhì)混合，蛋白即可特異與底物作用，構(gòu)成共價(jià)鍵，交融蛋白間接被固定在了基質(zhì)概況上，可以達(dá)到更方便快捷地研討蛋白功能或純化蛋白的目的.HaloTagHaloTagT?標(biāo)簽蛋白是一種脫鹵素酶的遺傳修飾衍生物，可與多種合成的HaloTagTM配基無效地共價(jià)結(jié)合.這個(gè)分子量為33KDa的單體蛋白能交融在重組蛋白的N端或C端，并在原核和真核零碎中表達(dá).HaloTagTM配基是小分子化學(xué)物，可以在體外或體內(nèi)與HaloTagTM蛋白共價(jià)結(jié)合.這些配基由兩個(gè)關(guān)鍵組分組成：⑴一個(gè)通用的HaloTagTM反應(yīng)聯(lián)合子，結(jié)合HaloTagT?蛋白；(2)一個(gè)功能基團(tuán),例如熒光染料或親和媒介.可以共價(jià)和特異性結(jié)合多種合成的陳述基團(tuán)和親和配基的特性，使得HaloTagTM蛋白可以用于檢測和親和結(jié)合或固相化固定目的蛋白.SUMOSUMO標(biāo)簽蛋白是一種小分子泛素樣修飾蛋白(Smallubiquitin-likemodifier)，是泛素(ubiquitin)類多肽鏈超家族的緊張成員之一.在一級結(jié)構(gòu)上，SUMO與泛素只要18%的同源性，但是兩者的三級結(jié)構(gòu)及其生