淺析淡竹葉中總黃酮提取工藝研究

淺析淡竹葉中總黃酮提取工藝研究【摘要】目的用正交試驗(yàn)法優(yōu)選淡竹葉中總黃酮的提取工藝。方法以20g原藥材的總黃酮提取量為評(píng)價(jià)指標(biāo),選擇乙醇用量(倍)、提取時(shí)間(h)、提取次數(shù)(次)為考察因素,采用正交試驗(yàn)法L9(34)確定醇提取淡竹葉中總黃酮的最佳工藝。結(jié)果最佳提取工藝條件為75%乙醇18倍量提取h,共提取1次,乙醇用量為顯著影響因素。結(jié)論首次進(jìn)行了淡竹葉總黃酮正交提取工藝的研究,結(jié)果比較可靠。

【關(guān)鍵詞】淡竹葉；總黃酮；正交試驗(yàn)

Abstract：ObjectiveTostudytheoptimumethanolextractionprocessoftotalflavonoidsinLophatherungracileBrongn.MethodsTheextractionoftotalflavonoidswaschoosenastheassessmentindex.Ethanolvolumnextractingtimeandtimeswerethestudingfactors.Theoptimumethanolextractionprocesswasselectedwiththeorthogonaldesign.ResultsTheoptimumethanolextractingprocessconditionswereasfollows：adding18foldof75%ethanol,extractingforhandoneinall.Ethanoldosagewasthepredominantinfluencingfactor.ConclusionThisoptimumextradionprocessoftotalflavonoidsinLophatherumgracleBrongnisreliable.

Keywords：LophatherumgracileBrongn；totalflavonoids；orthogonaldesign

淡竹葉為禾本科多年生草本植物淡竹葉(LophatherumgracileBrongn.)的干燥莖葉,主產(chǎn)于河南、安徽、江蘇、浙江、福建、廣東、廣西等地。該藥味甘、淡、寒,歸心、胃、小腸經(jīng),具有清熱除煩、利尿的功效,多用于熱病煩渴、口舌生瘡、小便赤色淋痛等癥[1]。淡竹葉中含有的黃酮類化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多種生理活性,因而有效地開發(fā)和利用淡竹葉中黃酮類化學(xué)成分具有重要意義。筆者選擇總黃酮提取量為評(píng)價(jià)指標(biāo),利用L9(34)正交試驗(yàn),篩選醇提取淡竹葉中總黃酮的工藝條件,可為新藥研究和充分利用淡竹葉藥材資源提供參考依據(jù)。

1儀器、試劑與材料

HH-S型水浴鍋(鞏義市英峪華儀器廠)；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市英峪華儀器廠)；754型紫外可見分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)；AY220電子天平(島津)；DZF-6050真空干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

對(duì)照品蘆丁購自中國藥品生物制品檢定所,批號(hào)為0080-9705；淡竹葉產(chǎn)地為浙江,加工單位為安徽豐原銅陵中藥飲片有限公司,經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室吳啟南教授鑒定,粉碎后備用。

醫(yī)用酒精；甲醇AR級(jí)；蒸餾水；其余所用試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取在105℃干燥下的蘆丁對(duì)照品0g,置100mL

容量瓶中,加適量甲醇溶解,定容至刻度,搖勻,即得對(duì)照品溶液(每1mL中含無水蘆丁mg)。

精密吸取上述對(duì)照品溶液、、、、、、mL,分別置25mL容量瓶中,各加水至mL,加5%亞硝酸鈉溶液1mL,混勻,放置6min,加10%硝酸鋁溶液1mL,搖勻,放置6min,加4%氫氧化鈉試液10mL,再加水至刻度,搖勻,放置15min,進(jìn)行全波長掃描,在510nm處均有最大吸收。以510nm得的吸收度A對(duì)濃度C回歸,以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程為A=5(r=4)。在8～48μg/mL的范圍內(nèi),濃度與吸收度有良好的線性關(guān)系。

總黃酮提取量的測(cè)定

按項(xiàng)下方法制備樣品。精密稱定一定量的干燥品,用甲醇定容至25mL容量瓶中,再精密吸取3mL,置25mL容量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法,自“加水至mL”起,依法測(cè)定吸光度。按照2005版《中國藥典》(一部)規(guī)定的方法測(cè)定。

醇提工藝條件的選擇

醇提濃度的選擇

將浙江產(chǎn)淡竹葉藥材粉碎,稱取20g/份,共3份,加15倍量的50%乙醇,回流提取2h(85℃),3份提取液分別進(jìn)行抽濾,將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮(80℃,Mpa),濃縮液在水浴鍋上蒸至成稠膏狀,再放置真空干燥箱中(80℃,Mpa),24h后取出,取少量醇浸膏測(cè)定總黃酮提取量。同法測(cè)定60%、75%、95%醇提液的總黃酮提取量(見表1)。結(jié)果表明,以20g原藥材中總黃酮提取量為考察指標(biāo),75%醇提液得到的總黃酮量最多,故采用75%乙醇提取的工藝。表1醇提濃度的選擇

提取工藝的正交試驗(yàn)

按照上述單因素考察結(jié)果,按表2中的因素水平進(jìn)行正交試驗(yàn)。表2因素水平表

正交試驗(yàn)方法與結(jié)果

將淡竹葉藥材粉碎后,稱取20g,用L9(34)正交表安排試驗(yàn)(見表3)。將回流提取液分別過濾,濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮(80℃,Mpa),濃縮液放置在蒸發(fā)皿中于水浴鍋上蒸至成稠膏狀后,放置真空干燥箱中(80℃,Mpa),24h后取出,于干燥器中干燥1h后稱量,再按照項(xiàng)下方法測(cè)定總黃酮的提取量,結(jié)果見表3。表3正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果

方差分析

(見表4)表4方差分析表注：(2,2)=19。

由上述直觀分析結(jié)果可知,以總黃酮提取量為考察指標(biāo),最佳提取工藝條件為A1B2C1,即18倍量75%乙醇回流提取1次,每次ｈ。方差分析結(jié)果顯示：A因素(加醇量)對(duì)總黃酮提出有顯著影響,B因素(提取時(shí)間),C因素(提取次數(shù))對(duì)總黃酮提出無顯著影響。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際,從降低生產(chǎn)成本出發(fā),對(duì)提取條件作適當(dāng)調(diào)整,確定醇提工藝條件為A1B3C1,即18倍量75%乙醇回流1h,提取1次。

驗(yàn)證試驗(yàn)

稱取20g原藥材,按照A1B3C1進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),結(jié)果見表5。表5驗(yàn)證試驗(yàn)分析表

3討論

通過L9(34)正交表試驗(yàn),最終確定淡竹葉中總黃酮醇提取工藝的條件為：75%乙醇18倍量提取h,共提取1次,其結(jié)果經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)確認(rèn)該條件可行,可以作為大生產(chǎn)的參考工藝條件。

【參考文獻(xiàn)】

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊(cè))[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版