福建綠茶提取物對(duì)高脂肥胖小鼠降脂功效研究

福建綠茶提取物對(duì)高脂肥胖小鼠降脂功效研究

隨著生活水平的提高和人們飲食結(jié)構(gòu)的變化，肥胖和血脂逐漸成為威脅人們健康的另一個(gè)重要問題。為了應(yīng)對(duì)這一問題,各類減肥、降血脂食品、藥品應(yīng)運(yùn)而生。但其中大部分在減肥降脂的同時(shí)存在不同程度的副作用。研發(fā)高效減肥降脂且低副作用的藥物是有待攻關(guān)的一大課題,從動(dòng)植物中提取天然成分是一個(gè)較好的選擇。茶的減肥降脂作用自古就受到關(guān)注,本草拾遺記載“茶,去人脂,久食令人瘦”。近年來,國內(nèi)外學(xué)者對(duì)不同產(chǎn)地多種品種的茶進(jìn)行了研究,對(duì)茶提取物的提取方法和功效做出了大量報(bào)道,其中報(bào)道最多的是茶多糖和茶多酚。實(shí)驗(yàn)證明茶多糖具有調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)血脂、抗氧化、抗輻射和提高機(jī)體免疫功能等作用;茶多酚具有降血壓、降血脂、預(yù)防心血管病、預(yù)防癌癥、抑制病源微生物、抗輻射損傷和防衰延壽等作用。關(guān)于茶的減肥作用,研究報(bào)道較少,提及了烏龍茶、普洱茶、湖北青磚茶和川產(chǎn)苦丁茶等,認(rèn)為產(chǎn)生減肥作用的物質(zhì)主要是茶多酚和茶色素[4~9]。由于茶的不同品種、不同的加工方法以及不同的提取方法亦導(dǎo)致研究結(jié)果出現(xiàn)不一致。本實(shí)驗(yàn)以福建綠茶為材料,以一定的提取方法將綠茶成分分離,以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別對(duì)各分離組分進(jìn)行功效驗(yàn)證,探尋具有減肥降脂的茶成分,為開發(fā)福建綠茶減肥降脂食品提供一定的參考。1材料和方法1.1材料表面1.1.1試驗(yàn)對(duì)象的樣品綠茶,購自福建仙洋洋食品科技有限公司,產(chǎn)品批號(hào):11061301001。1.1.2動(dòng)物飼養(yǎng)條件雄性昆明小鼠,48只,清潔級(jí),體重20±2g,購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)條件:屏障系統(tǒng)動(dòng)物房,溫度22±2℃,相對(duì)濕度40%~60%,控制照明時(shí)間為14h,分籠飼養(yǎng),每組2籠,自由進(jìn)食及飲水,及時(shí)更換墊料,定時(shí)清洗鼠籠及水瓶等。小鼠適應(yīng)一周后開始實(shí)驗(yàn)。1.1.3飼料基礎(chǔ)飼料,高脂飼料(85%基礎(chǔ)飼料+4%膽固醇+10%豬油+1%膽酸鈉),購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。1.1.4試劑的制備乙醇(AR)、氫氧化鈉(AR)、抗壞血酸(AR)、鹽酸(AR)、硫酸(AR)、硫酸銅(AR)、硫酸鉀(AR)、硼酸(AR)(天津江天試劑廠);總膽固醇(TC)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒、小鼠胰脂肪酶(PL)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、小鼠肝脂肪酶(HL)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。1.1.5酶標(biāo)儀冷凍切片機(jī)(LEICACM1950);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮儀器有限公司);凱氏定氮儀(上海新嘉電子有限公司);酶標(biāo)儀(美國Thermo公司);共聚焦顯微鏡(NikonECLIPSE90i);冷凍干燥機(jī)(德國KENDRO公司);真空干燥箱(上海益恒科技有限公司);紫外可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);電子分析天平(上海精天電子儀器有限公司)。1.2方法1.2.1綠茶提取物的制備和成分的檢測(cè)1.2.1.綠茶粗多糖的提取綠茶,按固液比1:5加入去離子水,70℃浸提過夜;抽濾,收集濾液,殘?jiān)孟嗤椒ㄔ俳醿纱?合并濾液,減壓濃縮;濃縮液用75%乙醇沉淀多糖,3500r/min離心,沉淀冷凍干燥,得綠茶粗多糖。收集沉淀多糖后的上清液,收集茶渣。1.2.1.2茶脫糖提取物的制備將沉淀多糖后的上清液,減壓濃縮,冷凍干燥,得茶脫糖浸提物。下文簡稱上清液。1.2.1.乙醇浸提液組茶渣粉碎后,添加5‰抗壞血酸,按固液比1:5加入70%乙醇,常溫浸提10h;抽濾,收集濾液,殘?jiān)孟嗤椒ㄔ俳醿纱?合并濾液,減壓濃縮,冷凍干燥,得茶渣醇提物。1.2.1.浸提液制備液茶渣粉碎,0.06mol/LNaOH,固液比1:40,90℃浸提30min;浸提液過濾,調(diào)節(jié)濾液pH至4.5,靜置15min后,3500r/min離心15min;收集沉淀,調(diào)節(jié)pH至7.0,干燥得粗蛋白。1.2.1.糖、多酚和蛋白含量的測(cè)定分別測(cè)定粗多糖、上清液和醇提物、粗蛋白中多糖、多酚和蛋白含量,方法分別采用蒽酮-硫酸法、GBT8313-2002茶多酚測(cè)定、GB5009.5-2010食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定。1.2.2醇提物和給藥組48只小鼠隨機(jī)分為六組,每組8只;分別為正常對(duì)照組、高脂模型組、粗多糖給藥組、粗蛋白給藥組、上清液給藥組和醇提物給藥組。正常對(duì)照組喂食基礎(chǔ)飼料,其余各組喂食高脂飼料;正常對(duì)照組和高脂模型組每天早九點(diǎn)灌胃生理鹽水,粗多糖給藥組、粗蛋白給藥組、上清液給藥組和醇提物給藥組在每天早九點(diǎn)分別以15mg/只的劑量灌胃粗多糖、粗蛋白、上清液和醇提物。1.2.3綠茶提取物、降血脂、瘦體重的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)1.2.3.平均攝食量測(cè)定實(shí)驗(yàn)期間每天測(cè)定各組小鼠的進(jìn)食量,每天每組小鼠初始給糧100g,24h后稱各組剩余鼠糧重,二者差值即為各組小鼠每天進(jìn)食量。實(shí)驗(yàn)期間每天測(cè)定各組小鼠的飲水量,每天每組小鼠初始給水200mL,24h后量取各組剩余水體積數(shù),二者差值即為各組小鼠每日飲水量。1.2.3.實(shí)驗(yàn)給藥、飼養(yǎng)各組小鼠均以基礎(chǔ)飼料喂食一周,適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。之后開始按照給藥計(jì)劃,各組喂食相應(yīng)飼料。實(shí)驗(yàn)為期四周,每周一、周四稱量小鼠體重。記錄并分析體重?cái)?shù)據(jù)。1.2.3.血脂指標(biāo)檢測(cè)在小鼠飼養(yǎng)第4周末,禁食不禁水12h,摘除眼球取血,全血4℃靜置1.5h,4℃離心15min,分離血清,酶法測(cè)定血清TC、TG、HDL-C和LDL-C,酶聯(lián)免疫測(cè)定血清HL和PL活力。1.2.3.小鼠肝臟功能測(cè)定取血后小鼠頸椎脫臼處死,取出肝臟,用生理鹽水洗滌,濾紙吸干表面殘留的生理鹽水,立即稱量,記錄每只小鼠的肝臟重量。用殺鼠前稱得小鼠體重,以肝重比體重,計(jì)算小鼠肝指數(shù)。取出肝臟后,將小鼠的腹腔脂肪小心剝離出來,包括腹部脂肪、腎周脂肪和附睪周脂。用生理鹽水洗滌濾紙吸干,立即準(zhǔn)確稱量。以腹腔總脂重比體重,計(jì)算每只小鼠的脂肪指數(shù)。1.2.3.5脂肪組織剖面取小鼠新鮮的腹部脂肪組織制作冷凍切片,顯微鏡物鏡20x下觀察脂肪細(xì)胞形態(tài)。1.2.4統(tǒng)計(jì)處理所有數(shù)據(jù)采用SAS進(jìn)行分析,結(jié)果用(x±s)表示,比較組間差異。2結(jié)果與討論2.1上清液和醇提物中多酚、粗蛋白的含量經(jīng)測(cè)定,綠茶粗多糖中多糖含量為51.39%,上清液和醇提物中多酚含量分別為43.25%、38.41%,粗蛋白中蛋白含量為52.45%。2.2綠茶提取物、降血脂、瘦體重的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)2.2.1灌胃不同綠茶提取物對(duì)小鼠攝食量的影響實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠進(jìn)食情況如圖1所示,結(jié)果顯示:各給藥組與模型組小鼠進(jìn)食量無顯著性差異(P>0.05),說明灌胃四種綠茶提取物對(duì)小鼠的進(jìn)食量沒有顯著影響。實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠飲水情況如圖2所示,結(jié)果顯示:各給藥組與模型組小鼠飲水量無顯著性差異(P>0.05),說明灌胃四種綠茶提取物對(duì)小鼠的飲水量沒有顯著影響。2.2.2各組小鼠體重的增長情況實(shí)驗(yàn)為期四周,每周一周四稱量小鼠體重,共記錄了八組體重?cái)?shù)據(jù),數(shù)據(jù)如圖3所示,隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行,各組小鼠體重逐步增大,模型組、粗蛋白組和粗多糖組體重增長速度高于正常對(duì)照組,醇提物組和上清液組體重增長速度低于正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)?zāi)└鹘M小鼠體重情況如圖4,正常對(duì)照組小鼠體重顯著低于模型組、粗蛋白組和粗多糖組,顯著高于醇提物組和上清液組(P<0.01)。說明醇提物和上清液有顯著的控制體重增加的功效。2.2.3各組tc、ldl-c、tg、hdl-c含量的比較由表1可知,與正常對(duì)照組相比模型組TC、TG、LDL-C升高,HDL-C降低(P<0.01)。與模型組相比粗蛋白組和粗多糖組TC、LDL-C顯著降低(P<0.01),TG、HDL-C變化不明顯;醇提物組和上清液組TG顯著降低(P<0.01),HDL-C升高,但差異不顯著。2.2.4給藥前后血清pl含量比較各組小鼠的血清HL、PL含量如圖5、6所示,結(jié)果顯示血清HL含量醇提物組顯著高于模型組和其它各給藥組,血清PL含量上清液組顯著低于模型組和其它各給藥組(P<0.01)。由此可知醇提物組和上清液組小鼠血清甘油三酯含量低于其它給藥組的原因可能是:醇提物可以提高HL活力加速小鼠體內(nèi)甘油三酯的分解,上清液可抑制PL活力抑制小鼠腸道內(nèi)脂肪酸的吸收,從而抑制甘油三酯合成。2.2.5各給藥組各組織肝重、肝臟指數(shù)和肝臟功能指標(biāo)對(duì)比由表2可知,模型組肝重、腹腔總脂重、脂肪指數(shù)顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05),肝臟指數(shù)模型組也高于正常對(duì)照組,但差異不顯著(P>0.05)。各給藥組與模型組相比,醇提物組和上清液組肝重、腹腔總脂重、脂肪指數(shù)顯著低于模型組(P<0.05),肝臟指數(shù)也低于模型組,但差異不顯著(P>0.05);粗蛋白組和粗多糖組肝重、肝臟指數(shù)、腹腔總脂重、脂肪指數(shù)也普遍低于模型組,但差異沒有顯著性(P>0.05)。說明醇提物和上清液有很好的降低體脂含量、抑制脂肪積累的作用。2.2.6各組小鼠脂肪細(xì)胞直徑的比較各組小鼠脂肪組織切片如圖7,模型組、粗多糖組、粗蛋白組小鼠脂肪細(xì)胞直徑大于正常對(duì)照組,醇提物組和上清液組小鼠脂肪細(xì)胞直徑略小于正常對(duì)照組。說明醇提物和上清液可以抑制脂肪細(xì)胞增大,減少脂肪堆積。3脂肪細(xì)胞直徑實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,綠茶四種提取物中降脂減肥效果最好的是醇提物和上清液,與模型組相比,醇提物組和上清液組可顯著降低小鼠血脂TG(分別下降37.50%、