?；撬釋A型臂尾輪蟲種群增長和繁殖的影響

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?；撬嵋脖环Q為?；撬?，其化學名稱為2-氨基乙磺酸（hso3ch200h2nh2）。它是人體和動物體內(nèi)的一種含有硫酸的常見藥物。它通常存在于各種組織中，腦、心臟和肌肉的含量最高。牛磺酸是一種非蛋白質結構氨基酸,不參與蛋白質組成。牛磺酸由甲硫氨酸通過胱氨酸經(jīng)一系列酶促反應綜合而來,即半胱氨酸加雙氧酶和半胱亞磺酸脫羧酶,這2種酶中半胱亞磺酸脫羧酶已被證明是?；撬嵘锖铣蛇^程中的限速酶。?；撬峋哂卸喾N營養(yǎng)功能,氨基酸類是魚類攝食活動的強刺激劑,而?；撬岜旧砭褪且环N氨基酸,因而飼料中添加適量的?；撬峥梢源碳~類攝食、促進動物體生長及提高動物繁殖性能等。Conceincao等發(fā)現(xiàn)大菱鲆幼體的生長與日糧中牛磺酸的含量呈正相關,對于某些水產(chǎn)動物苗種或者特定的生長階段,?；撬峥勺鳛槠涿绶N的必需氨基酸。輪蟲是水產(chǎn)動物苗期的關鍵餌料。關于?；撬釋τ谒a(chǎn)動物的營養(yǎng)作用的研究主要集中在魚類的飼料添加劑方面,對于餌料生物影響的研究鮮見報道。筆者通過在輪蟲培養(yǎng)水體中添加不同濃度的?；撬?研究其對輪蟲種群增長及繁殖的影響,旨在為牛磺酸在生物餌料培養(yǎng)中的應用探索可行性,并提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1rotund酰沿線?；撬釣樯虾igma公司產(chǎn)品(產(chǎn)品代號T0625)。圓型臂尾輪蟲(Brachionusrotundiformis)由吉林農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院水產(chǎn)實驗室提供。用10L的廣口瓶進行預培養(yǎng),培養(yǎng)條件:溫度(30±1)℃,鹽度2%,連續(xù)充氣,自然光照,餌料為酵母溶液,每天投餌2次。酵母采用湖北安琪酵母股份有限公司生產(chǎn)的“安琪”牌高活性干面包酵母。1.2蟲強化試驗試驗設4個處理,?；撬岬膹娀荻确謩e為0、0.4、0.8、1.2g/L,每個處理4個重復。輪蟲強化試驗在水浴中進行,溫度(29±1)℃,培養(yǎng)體積為2L,初始密度約為260個/mL,鹽度3.2%,試驗期內(nèi)自然光照,不間斷充氣。牛磺酸經(jīng)準確(0.0002g)稱量后在試驗開始時一次性加入培養(yǎng)瓶中,試驗進行至各組輪蟲種群均出現(xiàn)下降趨勢時結束,試驗期間不更換輪蟲培養(yǎng)用水。1.3輪蟲酵母細胞的培養(yǎng)將酵母和一定體積的人工海水(培養(yǎng)用海水)放入攪拌機中攪拌(13000r/min,1min),以提高酵母分散度。攪拌后計數(shù)酵母溶液中單位體積的酵母細胞數(shù),以使輪蟲培養(yǎng)水體的酵母濃度達到8×106cells/mL。取相應體積的酵母溶液投喂給輪蟲,每天投喂2次,投喂時間分別為08:00和20:00。1.4浮游動物種群密度強化后0、6、12和24h進行取樣計數(shù),以后每間隔24h隨機均勻取樣,取樣時分別于各試驗組隨機取樣1mL置于浮游動物計數(shù)框,加1～2滴碘液進行固定,在解剖鏡下計數(shù)各個時間段輪蟲的種群密度、攜卵個體數(shù)及卵數(shù),計數(shù)3次,取平均值。1.5計算方法日平均增長率和懷卵率分別以文獻和的公式進行計算。1.6數(shù)據(jù)處理及分析應用單因子方差分析(One-wayANOVA)比較不同牛磺酸水平對輪蟲種群密度的影響。應用LSD多重比較檢驗比較各處理間的均值,差異顯著性水平(P)值設在0.01,所有統(tǒng)計分析均采用SPSS17.0軟件進行。誤差和置信區(qū)間用mean±SE表示。2結果與分析2.1種群增長趨勢由圖1可看出:在試驗周期內(nèi),各處理組種群均呈現(xiàn)先增長達到峰值后再下降的趨勢。0～24h內(nèi),各處理組處于平衡階段;試驗進行至24h時,0.8g/L處理組和0.4g/L處理組種群密度顯著高于對照組(P<0.01);24～144h內(nèi),各處理組均呈種群增長趨勢,試驗進行至144h時,0.8g/L處理組和0.4g/L處理組與對照組差異顯著,而1.2g/L處理組與對照組差異不顯著;0.8g/L處理組種群密度顯著高于其他各處理組,此時對照組出現(xiàn)種群最高峰。144～192h內(nèi),各處理組種群增長處于平衡階段,0.4g/L處理組、0.8g/L處理組和1.2g/L處理組在試驗進行至168h時分別達到種群最高密度,且0.8g/L處理組種群最高密度最大;試驗進行至192h時,各處理組與對照組差異顯著。192～264h階段內(nèi),各處理組均出現(xiàn)下降的趨勢,對照組種群密度顯著低于其他各處理組。2.2平均增長率從圖2可以看出:各試驗組在0～24h時呈現(xiàn)不同增長速率后趨于平衡。6h時,0.8g/L處理組的日平均增長率顯著高于對照組和1.2g/L處理組;12h時,1.2g/L處理組日平均增長率與對照組差異顯著,而0.8g/L處理組和0.4g/L處理組差異不顯著;24h時,各處理組與對照組差異顯著。24～72h內(nèi),0.4g/L處理組和0.8g/L處理組在48h時出現(xiàn)最大日平均增長率,對照組和1.2g/L處理組在72h時達到最大日平均增長率。48h時,各處理組與對照組差異顯著,0.8g/L處理組日平均增長率顯著大于對照組;72h時,1.2g/L處理組與對照組差異不顯著。72～264h階段內(nèi),各試驗組日平均增長率趨于相同趨勢。日平均增長率以對照組最高(0.2530),出現(xiàn)在試驗的144h,但其他各處理組的種群最高密度較對照組高,出現(xiàn)峰值的時間較對照組晚,其中0.8g/L處理組的種群最高密度最大。2.3單次給藥后7h間懷卵率的變化由圖3看出:6～72h階段內(nèi),各試驗組懷卵率均呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,且各試驗組懷卵率均在24h達到此時間段的最大值。試驗進行至12h時,對照組懷卵率顯著高于各處理組,但各處理組間差異不顯著;24h時,1.2g/L處理組懷卵率顯著高于對照組,0.4g/L處理組、0.8g/L處理組與對照組差異顯著。72～168h階段內(nèi),各組懷卵率出現(xiàn)不規(guī)律變化。72h時,對照組與1.2g/L處理組差異不顯著,對照組與0.4g/L處理組、0.8g/L處理組差異顯著,0.4g/L處理組與0.8g/L處理組差異不顯著;168h時對照組與0.8g/L處理組差異不顯著,與0.4g/L處理組和1.2g/L處理組差異顯著,0.8g/L處理組與0.4g/L處理組差異不顯著,與1.2g/L處理組則差異顯著。168～264h階段內(nèi),各試驗組懷卵率出現(xiàn)下降趨勢,264h時各試驗組差異顯著。3討論3.1對輪蟲種群的影響牛磺酸作為動物的條件性半必需氨基酸,參與維持機體免疫功能,提高機體的特異性和非特異性免疫。魏智清等通過試驗證明0.005g/L牛磺酸溶液增強泥鰍抗缺氧效果明顯,而對于麥穗魚以0.005、0.1g/L質量濃度的?；撬嵝Ч顬槊黠@。加入適當濃度的牛磺酸,能增強麥穗魚抗缺氧的能力,延長其在缺氧環(huán)境下的存活時間。王秋榮等通過牛磺酸強化后的輪蟲投喂眼斑擬石首魚仔魚,證明添加0.8g/L?；撬峥捎绊懽恤~的生長與抗應激能力。日本沼蝦的飼料中添加適量的?；撬峥梢源龠M沼蝦體內(nèi)的酚氧化酶活性,進而提高其免疫能力。日糧中的?；撬峥梢源龠M黃條鰤幼魚和歐洲鱸生長;Conceincao等發(fā)現(xiàn)大菱鲆幼體的生長與日糧中?；撬岬暮砍收嚓P,進而說明?；撬釋τ隰~類生長有促進作用。研究結果顯示,在試驗周期內(nèi),0.4g/L處理組和0.8g/L處理組輪蟲種群增長及其日平均增長率皆顯著高于對照組(P<0.01),這說明添加適宜濃度的牛磺酸可能促進輪蟲的種群生長。?；撬崽砑拥剿w后對輪蟲的種群增長產(chǎn)生影響的原因主要有兩方面,一方面牛磺酸可能直接作用于輪蟲,有相關學者研究證實在輪蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了淀粉酶、纖維素酶、胃蛋白酶等酶類,而?；撬嵩谀承l件下可以促進與消化相關的激素分泌。試驗過程中0.4g/L處理組和0.8g/L處理組輪蟲種群增長顯著高于對照組,可能由于添加?；撬岷?促進了輪蟲體內(nèi)消化酶(胃蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶等)的活性,進而促進輪蟲的攝食強度,促進種群的增長。另一方面試驗水體中存在大量微生物,這些微生物中包括部分細菌,細菌多是單細胞生物,?；撬釁⑴c細胞膜主要成分磷脂的代謝,具有直接膜穩(wěn)定作用,并可抑制溶酶體內(nèi)組織蛋白酶的漏出,試驗添加的?；撬峥赡芡ㄟ^對細胞膜的作用影響了某些細菌的生長及繁殖,為輪蟲提供了更豐富的餌料,從而促進輪蟲的種群增長。在試驗的0～24h,0.4g/L處理組和0.8g/L處理組種群幅增長趨勢較對照組平緩,這應該是由于添加適量的?；撬崮軌驕p少輪蟲種群產(chǎn)生的應激現(xiàn)象。1.2g/L處理組在試驗初期種群增長低于對照組,很可能是由于?；撬岬倪^量添加引起輪蟲應激死亡現(xiàn)象,進而抑制其種群增長。在試驗的24～144h階段,1.2g/L處理組輪蟲種群數(shù)量及種群日平均增長率低于0.4g/L處理組和0.8g/L處理組,但與對照組差異不顯著,而在試驗進行至144h后,1.2g/L處理組輪蟲種群數(shù)量及種群日平均增長率皆高于0.4g/L處理組和對照組,其原因可能是?；撬犭S著時間的變化在水體中的濃度逐漸變化,高濃度的?；撬嵩谒w中保留時間長,能夠繼續(xù)維持對輪蟲種群的作用。0.8g/L處理組在試驗進行至168h后,其種群下降過程中種群密度及日平均增長率仍高于各組,原因是該組在試驗期內(nèi)種群密度基數(shù)高于其他各組。3.2輪蟲對帶牛磺酸水體的斷裂率試驗進行至6～24h,各處理組懷卵率均呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢,對照組輪蟲懷卵率與各處理組懷卵率差異顯著,此試驗結果顯示,添加適量的?；撬釋τ谳喯x的懷卵率有影響。?；撬嶙鳛橐环N含硫氨基酸添加至水體時,可能引起了水體環(huán)境因子變化,導致輪蟲繁殖產(chǎn)生應激現(xiàn)象,因而接種初期添加牛磺酸后,對照組懷卵率較其他各組高,但是試驗后期對照組懷卵率低于各處理組,可能由于輪蟲對于添加?；撬岬乃w表現(xiàn)出了適應。試驗進行至24～96h時,1.2g/L處理組輪蟲懷卵率呈現(xiàn)整體高于各處理組的趨勢,這與此時1.2g/L處理組輪蟲的種群密度增長迅速的趨勢是一致的,可能是由于牛磺酸隨著在水體中作用時間而逐漸減少,由較高濃度轉變?yōu)檫m宜輪蟲生長的促生長狀態(tài)的濃度。而在試驗進行至48h時,各處理組懷卵率均大于對照組,可能由于輪蟲適應了?；撬崽砑铀w的環(huán)境,進而促進其繁