復(fù)旦四門課件2014藥分10第十章甾體激素

第十章甾體激素類藥物的分析基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲ABC12345678910111213141516171819D第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與分類分類：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素一、腎上腺皮質(zhì)激素氫化可的松醋酸地塞米松主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–酮UV、與羰基試劑反應(yīng)

C17

–

α–醇酮基還原性二、雄性激素及蛋白同化激素丙酸睪酮苯丙酸諾龍主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–酮UV、與羰基試劑反應(yīng)

C17–

β–羥基(可)成酯孕激素黃體酮主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–酮UV、與羰基試劑反應(yīng)C17–甲酮基與亞硝基鐵氰化納反應(yīng)C17–乙炔基與AgNO3反應(yīng)雌激素炔雌醇主要活性基團(tuán)性質(zhì)A環(huán)為3–OH苯環(huán)UV、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)C17–乙炔基與AgNO3反應(yīng)C17–羥基可成酯第二節(jié)鑒別試驗(yàn)一、物理常數(shù)的測定1、熔點(diǎn)：2、比旋光度：偏振光透過長1dm且每1ml中含有旋光物質(zhì)1g的溶液，在一定的波長和溫度下測得的旋光度。如醋酸地塞米松：二氧六環(huán)中10mg/ml下比旋度+82~88o3、吸收系數(shù)：如醋酸地塞米松在無水乙醇中240nm（15g/ml）吸收系數(shù)為343~371

（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)（母核）甾體激素類藥物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl二、化學(xué)鑒別法與硫酸顯色反應(yīng)

顯色熒光加水稀釋潑尼松龍深紅

絮狀↓灰潑尼松橙

黃→藍(lán)綠炔雌醚橙紅

黃綠

↓紅色

炔雌醇橙紅

黃綠

絮狀↓玫紅醋酸可的松黃或微褪色并澄

帶橙清(二)官能團(tuán)的反應(yīng)腎上腺皮質(zhì)激素藥物呈色

四氮唑鹽OHˉ1、C17

–

α–醇酮基還原性A.呈色反應(yīng)B.沉淀反應(yīng)腎上腺皮質(zhì)激素藥物氨制硝酸銀Ag↓黑色堿性酒石酸銅Cu2O↓橙紅色甾酮類激素藥物呈色羰基試劑2.C3–酮基和C20–酮基常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼異煙腙（黃色）睪酮黃體酮異煙雙腙（黃色）具有甲酮基或活潑亞甲基藥物呈色

亞硝基鐵氰化納間二硝基酚芳香醛3.甲酮基黃體酮其他甾體亞硝基鐵氰化鈉藍(lán)紫色淡橙色不顯色黃體酮藍(lán)紫色含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀5.乙炔基↓4.酚羥基雌激素類藥物重氮苯磺酸紅色偶氮染料炔雌醇白有機(jī)氟Fˉ有機(jī)破壞有機(jī)氯Clˉ6.有機(jī)鹵素茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀AgCl↓

呈色（藍(lán)紫色）茜素氟藍(lán)藍(lán)紫色F-7.酯的反應(yīng)

C17或C21位上羥基的酯，水解產(chǎn)生相應(yīng)的羧酸，再根據(jù)羧酸的性質(zhì)進(jìn)行鑒別。如：香特臭特臭△△三、制備衍生物測定m.p.（一）縮氨基脲的生成（二）酯的水解△４-3-酮240nm苯環(huán)280nm四、UV法結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇五、IR法六、TLC法主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別

方法：對照品法要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對照品溶液的主斑點(diǎn)相同。七、HPLC法主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）

方法：對照品法要求在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、有關(guān)物質(zhì)的檢查來源：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物特點(diǎn)：（1）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)（2）結(jié)構(gòu)類似方法（具有一定分離能力）：TLC法（高低濃度對比法）；HPLC法（主成分自身對照）（一）TLC法（高低濃度對比法）

判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色醋酸氟輕松:檢查有關(guān)物質(zhì)

取本品加氯仿-甲醇（9：1）制成3.0mg/ml作為供試液，精密量取適量，加氯仿-甲醇（9：1）稀釋成0.06mg/ml作為對照液；照薄層色譜法，各取5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇（97:3）為展開劑，展開后晾干，在105℃干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于2個(gè)，其顏色與對照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。特點(diǎn)：（1）簡便易行，不需特殊的儀器；（2）不需對照品；（3）只能控制單個(gè)雜質(zhì)的限量；（4）要求雜質(zhì)與主成分的顯色靈敏度接近。（二）HPLC法（高低濃度對比法）判定方法：規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積特點(diǎn)：（1）需特殊的儀器；（2）不需對照品；（3）可以控制雜質(zhì)的總量；來源：合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫原理及方法：二、硒的檢查醋酸氟輕松檢查硒

取本品50mg，照氧瓶燃燒法進(jìn)行破壞后，將吸收液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用水15ml沖洗燃燒瓶及鉑絲，并入吸收液中，用水加至刻度。取硒對照液（0.05ug/ml）和上述供試品溶液分別用氨試液調(diào)節(jié)pH值至2.00.2后，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水少量分次洗滌燒杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加鹽酸羥胺溶液（1→2）1ml，搖勻后，立即精密加二氨基萘試液5ml，搖勻，在室溫下放置100分鐘，精密加環(huán)己烷5ml，強(qiáng)烈振搖2′，靜置分層，取環(huán)己烷脫水后，測A378nm。規(guī)定A供＜A對。三、有機(jī)溶劑殘留量的檢查（甲醇和丙酮）甲醇≤0.3%

丙酮≤5.0%

GC法內(nèi)標(biāo)法定量原理及方法：供試液對照液鉬酸銨磷鉬酸銨H+還原磷鉬酸藍(lán)（鉬藍(lán)）740nmA樣A對四、游離磷酸鹽的檢查檢查游離磷酸地塞米松磷酸鈉

精密稱取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加鉬酸銨硫酸試液2.5ml與1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，搖勻，在20℃放置30～50分鐘，照分光光度法，在740nm處測定吸收度，與對照液4.0ml同法處理的吸收度比較，不得更大。一、HPLC法各國藥典多采用RP－HPLC（大多內(nèi)標(biāo)法）特點(diǎn)用樣量少，靈敏度高，分離效果好,

測定速度快.

甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計(jì)的比色法有干擾。第四節(jié)含量測定二、UV法△４-3-酮240nm腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯環(huán)280nm（±）雌激素

腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基強(qiáng)還原性1.原理OH-[還原](一)四氮唑比色法有色甲臜四氮唑鹽醇酮基???????-a-17C三、比色法三苯甲臜↓深紅氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（RT）藍(lán)四氮唑（BT）雙甲臜（暗藍(lán)）2.方法對照品法40～45′暗3.討論（1）基團(tuán)對反應(yīng)速度的影響C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯21位酯化后反應(yīng)速度減慢，酯化基團(tuán)越大反應(yīng)速度越慢（2）溶劑、水分的影響含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→幾無反應(yīng)—無醛無水乙醇醛→A↑—無水乙醇（3）堿的種類及加入順序反應(yīng)應(yīng)在強(qiáng)堿性（pH13.75）條件下進(jìn)行以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳加入順序：（4）O2與光線的影響反應(yīng)過程反應(yīng)產(chǎn)物怕光→避光、快速O2影響顏色強(qiáng)度和穩(wěn)定性→隔絕空氣、快速、充N2（5）溫度與時(shí)間t℃↑→ν↑→甲臜分解↑→%↓ChP25℃40～45′BP30℃1h腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基1.原理HCl（縮合）(二)異煙肼比色法異煙腙（黃色）2.方法：暗45′對照品法A供A對＝C供C對C供＝A供A對×C對（1）溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→甲醇、乙醇無水甲醇無水乙醇3.討論酸、異煙肼的量(2)鹽酸:異煙肼=2:1（3）水分、溫度、O2與光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時(shí)→