淺論感特靈膠囊中黃芩苷的HPLC測定

淺論感特靈膠囊中黃芩苷的HPLC測定【摘要】目的建立HPLC法測定感特靈膠囊中黃芩苷含量的方法。方法采用外標(biāo)一點(diǎn)法,DiamonsilODS1C18色譜柱,甲醇-水-磷酸(50∶50∶)為流動(dòng)相,流速為mL/min,檢測波長280nm。結(jié)果黃芩苷在6～8?g范圍內(nèi)呈良好線性,回歸方程為Y=95952X+8,r2=7,平均加樣回收率為%,RSD=%(n=6)。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確,專屬性強(qiáng),測定結(jié)果重復(fù)性好,為感特靈膠囊中黃芩苷的定量分析提供了科學(xué)有效的方法。

【關(guān)鍵詞】感特靈膠囊;黃芩苷;高效液相色譜法;含量測定

Abstract：ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofBaicalininGantelingJiaonangbyHPLC.MethodsUsingDiamonsilODS1C18Column,methanol-water-phosphoricacid(50∶50∶)asthemobilephase,detectionwavelengthas280nmandflowratewasmL/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearattherangeof6～8?gforBaicalinandlinearequationwasY=95952X+8,r2=7.Theaveragerecoverywas%andRSDwas%(n=6).ConclusionThismethodwassimple,accurate,proper,andthereduplicationoftheresultwasgood,whichprovidescientificquantitativeanalysismethodforthedeterminationofBaicalininGantelingJiaonang.

Keywords：GantelingJiaonang;Baicalin;HPLC;contentdetermination

感特靈膠囊收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第十三冊中,功能清熱解毒、清肺止咳,用于感冒初期引起的咳嗽、流清涕、頭痛目眩等。處方由黃芩、柴胡、貝母、細(xì)辛、大青葉、板藍(lán)根、牛黃以及對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯鈉敏、咖啡因組成[1]。原標(biāo)準(zhǔn)中只對對乙酰氨基酚進(jìn)行含量控制,而對處方中的主藥黃芩沒有含量控制,不能全面控制藥品的質(zhì)量。為了更好地控制感特靈膠囊的質(zhì)量,提高感特靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),我們采用HPLC法對黃芩的主要成分黃芩苷進(jìn)行了含量測定,并進(jìn)行了方法學(xué)研究。結(jié)果表明,方法簡便快速,穩(wěn)定可靠,專屬性強(qiáng)。

1儀器與試藥

高效液相譜儀：SPD-10A日本島津;紫外分光儀：上海康化生化儀器制造廠;超聲波清洗器：SK3200H上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司。

黃芩苷對照品(批號110715-200514,供含量測定用),由中國藥品生物制品檢定所提供;感特靈膠囊(批號200906001、200906002、200906003),河南百年康鑫藥業(yè)有限公司提供。其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水-磷酸(50∶50∶)為流動(dòng)相;流速mL/min;檢測波長為280nm,柱溫25℃。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500[2-3]。

溶液的制備

對照品溶液的制備取黃芩苷對照品10mg,精密稱定,置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取5mL,置10mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,即得(每1mL含黃芩苷50?g)。

供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本品,研細(xì),取約g,精密稱定,置100mL量瓶中,加50%甲醇適量,超聲處理(功率135W,頻率59kHz)30min,放冷,用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液經(jīng)?m微孔濾膜濾過,即得。

陰性樣品溶液的制備取缺黃芩的陰性樣品,按供試品溶液制備法制備陰性樣品溶液,即得。

專屬性考察

分別取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液,按上述色譜條件測定,結(jié)果在黃芩苷相應(yīng)位置無峰出現(xiàn)。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系的考察

精密量取黃芩苷對照品溶液(?g/mL),分別精密吸取、5、10、15、20?L注入液相色譜儀,測定峰面積。以黃芩苷對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程為：Y=95952X+8,r2=7。結(jié)果表明,黃芩苷對照品在6～8?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,每次進(jìn)樣10?L,測定黃芩苷峰面積,測定結(jié)果RSD=%,表明本法精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(批號200906001)供試品,按供試品溶液制備方法制備6份供試液。按照含量測定方法,測定每份樣品中黃芩苷的含量,結(jié)果RSD=%(n=6),表明重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(批號200906001)供試品,按供試品溶液制備方法制備供試品溶液,分別在0、2、4、6、8h測定峰面積,RSD=%(n=5)。表明制備的供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法。精密稱取已知含量的同一批號的樣品(批號200906001,含量為mg/g)g,置100mL量瓶中,共6份。分別精密加入黃芩苷對照品溶液(8mg/mL)各5mL,蒸干,按供試品溶液的制備方法制備,并照上述色譜條件測定,分別進(jìn)樣10?L,測定黃芩苷峰面積并計(jì)算黃芩苷含量(結(jié)果見表1),平均回收率為%,RSD=%。表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

樣品測定

按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液,分別對3批中試產(chǎn)品進(jìn)行測定,結(jié)果見表2。表2樣品測定結(jié)果

3討論

根據(jù)3批樣品測定結(jié)果,每粒含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì)均不少于mg?？紤]到藥材因產(chǎn)地、加工、運(yùn)輸、貯藏等因素的影響,藥材中黃芩苷含量也會有較大的差別,因此,暫規(guī)定為：本品每粒含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì),不得少于mg。

本試驗(yàn)中,取黃芩苷對照品溶液,在200～400nm波長范圍進(jìn)行掃描,結(jié)果在280nm波長處有最大吸收,故采用280nm作為檢測波長。

參照文獻(xiàn)[2-3],用50%甲醇、采用超聲處理方法制備供試品溶液,并對超聲時(shí)間進(jìn)行了考察,分別超聲處理10、20、30、50min進(jìn)行測定,測得樣品中對應(yīng)的黃芩苷含量分別為、、、mg/粒,試驗(yàn)結(jié)果表明,超聲處理30min時(shí),基本能夠提取完全。

【參考文獻(xiàn)】