NDM-1分子生物學(xué)檢測(cè)方法課件

產(chǎn)NDM-1泛耐藥腸桿菌科

細(xì)菌感染診療指南

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法解讀徐英春北京協(xié)和醫(yī)院

產(chǎn)NDM-1泛耐藥腸桿菌科

細(xì)菌感染診療指南

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細(xì)菌特征

阿米卡星 R氨芐西林 R氨芐西林-舒巴坦 R氨曲南 R頭孢唑林 R頭孢匹肟 R頭孢西丁 R頭孢他啶 R頭孢曲松 R氯霉素 R

環(huán)丙沙星 R厄他培南 R或I慶大霉素 R亞胺培南 R或I左氧氟沙星 R美羅培南R或I哌拉西林-他唑巴坦R四環(huán)素 R妥布霉素 R復(fù)方磺胺RMIC(μg/ml)MIC(μg/ml)39產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細(xì)菌特征

阿米卡星 R環(huán)丙沙星KPC

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細(xì)菌耐藥特點(diǎn)所有的b-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥青霉素類(lèi)廣譜頭孢菌素單環(huán)B內(nèi)酰胺類(lèi)碳青霉烯類(lèi)質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因有的菌株同時(shí)ESBL（+）,氟喹諾酮類(lèi)耐藥、氨基糖苷類(lèi)耐藥35KPC

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細(xì)菌耐藥特點(diǎn)所有的b-內(nèi)酰胺

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細(xì)菌耐藥特點(diǎn)黏菌素/多粘菌素敏感MIC≤2μg/mlS替加環(huán)素可能敏感（MIC≤2μg/mlS;4μg/mlI;≥8μg/mlR）52

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細(xì)菌耐藥特點(diǎn)黏菌素/多粘菌素敏感NDM-1的檢測(cè)方法NDM-1，即新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶-1型，是由細(xì)菌質(zhì)粒上攜帶的blaNDM-1基因編碼的。目前，國(guó)際上已有十余篇關(guān)于NDM-1的研究性文章或相關(guān)部門(mén)報(bào)告發(fā)表。

由blaNDM-1編碼產(chǎn)生的碳青霉烯酶及因此產(chǎn)生的對(duì)碳青霉烯類(lèi)耐藥性可以通過(guò)現(xiàn)有推薦使用的表型鑒定方法準(zhǔn)確、可靠的鑒定出來(lái)[1][1]USCDC.MMWRMorbMortalWklyRep.2010Jun25;59(24):750.[2]YongDetal.AntimicrobAgentsChemother.2009Dec;53(12):5046-54.NDM-1的檢測(cè)方法NDM-1，即新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶-CLSIM100-S20及CLSIM100-S20-U中碳青霉烯類(lèi)的折點(diǎn)抗菌藥物紙片擴(kuò)散法(mm)

稀釋法(mg/L)M100-S20M100-S20-UM100-S20M100-S20-USRSR

SRSR多利培南-≥23≤19-≤1≥4厄他培南≥19≤15≥23≤19≤2≥8≤0.25≥1亞胺培南≥16≤13≥23≤19≤4≥16≤1≥4美羅培南≥16≤13≥23≤19≤4≥16≤1≥4CLSIM100-S20及CLSIM100-S20-U中（一）表型篩查試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法：美羅培南（10ug）或亞胺培南（10ug）：抑菌圈直徑≤22mm肉湯稀釋法或Etest法美羅培南或亞胺培南:MIC≥2ug/ml亞胺培南適合于大腸埃希菌，克雷伯菌屬，沙門(mén)菌屬，腸桿菌屬變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬對(duì)亞胺培南敏感性下降是由產(chǎn)碳青霉烯酶外的其他機(jī)制引起，因此對(duì)這些菌株尚未建立用亞胺培南MIC法進(jìn)行篩選和確認(rèn)碳青霉烯酶，并且亞胺培南紙片法對(duì)所有腸桿菌科碳青霉烯酶的篩查效果都不好[1]YongDetal.AntimicrobAgentsChemother.2009Dec;53(12):5046-54.[2]KumarasamyKKetal.LancetInfectDis.2010Sep;10(9):597-602.（一）表型篩查試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法：[1]YongDet（二）表型確證試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法：Etest法：雙紙片協(xié)同法：改良霍奇試驗(yàn)(modifiedHodgetest)自動(dòng)化鑒定與藥敏儀器[1]YongDetal.AntimicrobAgentsChemother.2009Dec;53(12):5046-54.[2]KumarasamyKKetal.LancetInfectDis.2010Sep;10(9):597-602.（二）表型確證試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法：[1]YongDet（二）表型確證試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法：亞胺培南(10ug)/亞胺培南(10ug)+EDTA(500mM10ul)復(fù)合紙片結(jié)果判讀：復(fù)合紙片比單藥紙片抑菌環(huán)直徑增大≥5mm圖：復(fù)合紙片法判定金屬β-內(nèi)酰胺酶示意圖

(左紙片：亞胺培南/EDTA,右紙片：亞胺培南)

[1]YongDetal.JClinMicrobiol.2002Oct;40(10):3798-801.（二）表型確證試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法：亞胺培南(10ug)/亞胺培南（二）表型確證試驗(yàn)Etest法：Etest?MBL(IP/IPI、MP/MPI)結(jié)果判讀：?jiǎn)嗡幣c復(fù)合制劑的MIC比值≥8圖：EtestMBL(IP/IPI)

[1]/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_CLN_PRD_G_PRD_CLN_60（二）表型確證試驗(yàn)Etest法：Etest?MBL(IP圖：EtestMBL試驗(yàn)示意圖

(亞胺培南/亞胺培南+抑制劑[EDTA])

[1]LeeKetal.JClinMicrobiol.2005Feb;43(2):942-4.圖：EtestMBL試驗(yàn)示意圖[1]LeeKet（二）表型確證試驗(yàn)雙紙片協(xié)同法：

亞胺培南(10ug)、EDTA(0.5Mx10μl約0.5mg/片)，間距10mm(0.5McF）圖：亞胺培南-EDTA雙紙片協(xié)同試驗(yàn)示意圖(圖中菌種為銅綠假單胞菌)[1]LeeKetal.JClinMicrobiol.JClinMicrobiol.2003Oct;41(10):4623-9.（二）表型確證試驗(yàn)雙紙片協(xié)同法：亞胺培南(10ug)、EDE.coli

ATCC25922厄他培南抑制E.coli

ATCC25922有豐富菌的E.coliATCC25922生長(zhǎng)

#1pos制備0.5McF的E.coliATCC25922菌懸液.1:10稀釋用棉簽均勻涂布MHA平皿、約5分鐘，中心貼厄他培南或美羅培南紙片用1ul接種環(huán)挑取2-3個(gè)菌落，從紙片邊緣向外劃線過(guò)夜培養(yǎng)（16-20h）.出現(xiàn)向內(nèi)生長(zhǎng)的菌株薇碳青霉烯酶陽(yáng)性（如圖1，2）.（二）表型確證試驗(yàn)

#2

pos

#3negCLSIM1