小麥粉過氧化苯甲酰測定中的色譜柱安裝位置

小麥粉過氧化苯甲酰測定中的色譜柱安裝位置

1色譜柱填充質(zhì)量的影響1.1根據(jù)《gb.t184.01號標(biāo)準(zhǔn)偏差苯甲酰胺o2.l溶液和樣品體積的測定方法，在240c下，1.6min后，溶劑峰出現(xiàn)，但明顯是從尾排出的。1.2改用6#溶劑油飽和蒸氣進(jìn)樣0.2ml,18秒后,出現(xiàn)溶劑峰,是個很尖的峰,沒有出現(xiàn)拖尾。為什么會出現(xiàn)以上現(xiàn)象,實驗開始時懷疑可能柱子老化不完全造成的,我們對玻璃填充柱進(jìn)行了24小時老化,沒有任何改善。反復(fù)檢查安裝過程,沒發(fā)現(xiàn)任何異常。大連物化所提供的玻璃填充柱的質(zhì)量是可靠的,我們又開始分析查找可能出現(xiàn)其它原因。1.3嘗試改變有關(guān)參數(shù),逐步降低或提高柱溫,增大減小載氣流量,燃?xì)夂椭細(xì)饬髁?又分別注射2μl丙酮、石油醚,溶劑峰拖尾現(xiàn)象無明顯改善,又分別加苯甲酸的丙酮溶液,進(jìn)樣2μl,濃度分別為15μg/ml、20μg/ml時,在7分鐘后出峰,在國標(biāo)準(zhǔn)法標(biāo)準(zhǔn)曲線最小濃度5μg/ml、10μg/ml,注射2μl,基本不出峰(或峰形不明顯)。這樣的情況顯然無法滿足工作需要,基本不能工作。1.4改變進(jìn)樣量,分別以1μl,0.5μl丙酮進(jìn)樣,溶劑峰峰形明顯好看,又以同樣的進(jìn)樣量加入20μg/ml的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,溶劑與樣品峰出現(xiàn)分離,但樣品峰較小,其中進(jìn)樣1μl時,濃度為20μg/ml以上濃度的苯甲酸丙酮溶液,色譜峰有響應(yīng)值;進(jìn)樣量為0.5μl,只有40μg/ml以上濃度的苯甲酸丙酮溶液時才有響應(yīng),分離效果還可以,因此可以說明色譜柱本身填充質(zhì)量問題不大,只是由于進(jìn)樣量的減少,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(苯甲酸)要很大濃度才有響應(yīng),無法滿足工作需要,按國家標(biāo)準(zhǔn)來看,已經(jīng)沒有實際意義了,顯然必須進(jìn)行改進(jìn)。1.5經(jīng)分析,可能是樣品汽化過程有問題,會不會是汽化空間過小,出現(xiàn)類似死體積過大原因?qū)е峦衔?于是嘗試將柱子進(jìn)氣端進(jìn)行一些掏空,掏空1mm后,以2μl丙酮進(jìn)樣試驗,峰形有較大改善,筆者又繼續(xù)掏空1mm后進(jìn)行實驗,峰形完全改善,恢復(fù)正常,用石油醚實驗,情形大體相當(dāng)。于是又用苯甲酸丙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣,測試最低檢出限,完全達(dá)到工作需要,恢復(fù)正常。2色譜柱過大造成了拖尾現(xiàn)象2.1據(jù)資料介紹,拖尾峰的產(chǎn)生大致有這么幾種:即色譜柱安裝位置不正確;柱子進(jìn)樣口污染;溶劑極性不匹配;溫度過高;柱子液相流失等等。經(jīng)分析和認(rèn)真檢查,在減小進(jìn)樣量后,獲得明顯效果,于是進(jìn)行少量挖空試驗。2.2樣品進(jìn)入色譜柱之前,樣品有一個汽化過程,在240℃條件下迅速汽化,由于色譜柱汽化空間較小,在較短時間內(nèi)樣品汽化后體積較大,不能及時隨載氣完全進(jìn)入色譜柱,造成一部分死體積過大,樣品進(jìn)入柱子時間無法保持一致,分離過程不能同時進(jìn)行,是一段一段地進(jìn)入柱子進(jìn)行分離,即使填充物完全合格也不會清晰的分離,最后就是出現(xiàn)大拖尾峰形。2.3使用6#溶油氣體進(jìn)樣正是由于體積相對小得多就表現(xiàn)出正常狀態(tài),進(jìn)一步說明了實驗所用溶劑是由于汽化不完全,無法正常隨載氣進(jìn)入到色譜柱,形成較大的死體積造成了拖尾現(xiàn)象的出現(xiàn)。2.4由于樣品隨溶劑進(jìn)入色譜柱,按一定比例保留一部分在過大的死體積內(nèi),所以在出峰部位(樣品保留時間)的樣品量過少,響應(yīng)值就很低,而且沒有辦法保證重復(fù)性。這樣的結(jié)果既降低檢出限,又不能保證準(zhǔn)確定量。因此會出現(xiàn)大濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品注入會出峰,而小濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品卻不能出峰或出峰很小的情況。2.5通常情況下,每提高柱溫30度,可以使分配系數(shù)減少一半,這樣是可以使前述實驗中的溶劑峰形稍顯好看一些,但卻不能改善柱效,溫度過高,一些液相會流失,因此在工作中不能過大隨意改變溫度,一定要在最高和最低溫度之間進(jìn)行測試。降低柱溫可以改善分離效果,但不會改變拖尾現(xiàn)象,通過實驗,溫度改變和氣流改變確實對溶劑峰拖尾情況沒有改善。3重新分離條件下的優(yōu)化3.1根據(jù)氣色譜的塔板理論,塔板數(shù)越高分離效果越好,色譜柱一旦裝好,柱的塔板數(shù)在一定條件下是不會變化的,通過改變進(jìn)樣量,不能提高柱效,相反過多的進(jìn)樣量,可能對色譜柱有污染,從而降低柱效,我們在開始出現(xiàn)的現(xiàn)象,在客觀上就相對地“加大”了進(jìn)樣量,從而造成原有的塔板無法滿足對樣品成分的分離作用,造成進(jìn)樣口樣品堆積,就相當(dāng)于反復(fù)注入樣品,一次次從頭層析,重新分離,無法實現(xiàn)干凈的環(huán)境和準(zhǔn)確的進(jìn)樣量,不能如實地反映出一組樣品組分在柱子中的行進(jìn)情況。3.2根據(jù)氣相色譜的條件和國家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定,我們的進(jìn)樣量應(yīng)控制在一定的范圍內(nèi),一般液體樣品要在0.1-5μl,氣體在0.1-10ml之間,太低或太高的進(jìn)樣量都可能改變標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出限,是不可取的。因此采用減少進(jìn)樣時來改變圖形效果沒意義。3.3分析本實驗出現(xiàn)的現(xiàn)象,我認(rèn)為,正是色譜進(jìn)樣端汽化腔過小,樣品來不及完全汽化或者汽化后無法一次進(jìn)入柱子,造成溶劑峰的假拖尾現(xiàn)象,改變柱溫,無論增高或降低都沒有改善效果,是因為沒有解決問題的實質(zhì),通過減小進(jìn)樣量,能夠改善峰形恰恰說明了這一問題,由于增大進(jìn)樣端汽化腔,滿足了全部汽化所需空間條件,而明顯改善了圖形效果。根據(jù)塔板理論,我們所用的柱子塔板數(shù)在2000-3000以上,進(jìn)樣前端少量掏空,對塔板影響不是很大,實驗結(jié)果也能體現(xiàn)出保證分離能力,是可行的。3.4將色譜柱的進(jìn)樣少量掏空實驗,這