食品微生物檢驗(yàn)基本技術(shù)-菌種保藏

微生物菌種保藏技術(shù)目錄/Contents01常規(guī)保藏方法菌種保藏方法真空冷凍干燥保藏方法0201常規(guī)保藏方法

1、菌種保藏的目的存活，不丟失，不污染；防止優(yōu)良性狀喪失；隨時(shí)為生產(chǎn)、科研提供優(yōu)良菌種。01常規(guī)保藏方法

1.斜面保藏法

將菌種轉(zhuǎn)接在適宜固體斜面培養(yǎng)基上，待其充分生長(zhǎng)后，用牛皮紙將棉塞部分包扎好（棉塞換成膠塞效果更好），置4℃冰箱中保藏。保藏時(shí)間依微生物的種類(lèi)而定。霉菌、放線菌及芽孢菌保存2～4個(gè)月移種一次，酵母菌間隔兩個(gè)月，普通細(xì)菌一個(gè)月，假單胞菌兩周傳代一次。

此法優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、使用方便，缺點(diǎn)是保藏時(shí)間短、易變異、易被污染。01常規(guī)保藏方法2.液體石蠟保藏法

將無(wú)菌石蠟加在已長(zhǎng)好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕。將試管直立，置低溫或室溫下保存。此法實(shí)用且效果較好。霉菌、放線菌、芽孢菌可保藏兩年以上，酵母菌可保藏1～2年，普通細(xì)菌也可保藏1年左右。此法的優(yōu)點(diǎn)是制作簡(jiǎn)單，不需特殊設(shè)備，且不需經(jīng)常移種，還可防止干燥，缺點(diǎn)是保存時(shí)必須直立放置，所占位置較大，同時(shí)也不便攜帶。01常規(guī)保藏方法處理液體石蠟：將液體石蠟分裝于二角燒瓶?jī)?nèi)，塞上棉塞，并用牛皮紙包扎，121℃滅菌30min，接著檢查是否徹底無(wú)菌，即接入肉湯中檢查有無(wú)雜菌生長(zhǎng)。然后放在40℃溫箱中，使水分蒸發(fā)掉，備用。加石蠟油：用滅菌吸管在無(wú)菌操作下將5mL石蠟油注入到已長(zhǎng)好菌的斜面上，加入的量以超過(guò)斜面頂端1cm為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕。保藏：石蠟油封存后，將試管直立，放入4℃冰箱中保存。也可直接放在低溫干燥處保藏。01常規(guī)保藏方法

穿刺培養(yǎng)是將含0.6％～0.8％的瓊脂培養(yǎng)基裝試管滅菌后直立冷凝后，用接種針尖挑取少量菌體，垂直刺入瓊脂培養(yǎng)基中心，放在適當(dāng)溫度下培養(yǎng)，待菌長(zhǎng)好后即可放低溫保存，此法較斜面保存有利，大腸桿菌可保藏2年以上不發(fā)生明顯變異。02沙土保藏方法沙土保藏法①制作沙土管

②滅菌加壓蒸汽滅菌，直至檢測(cè)無(wú)菌為止。③制備菌液取3mL無(wú)菌水至待保藏的菌種斜面中,用接種環(huán)輕輕刮下菌苔。振蕩制成菌懸液。④加樣用1mL吸管吸取上述懸液0.1mL至沙土管,再用接種環(huán)拌勻。⑤干燥把裝好菌液的沙土管放入干燥器或同時(shí)用真空泵連續(xù)抽氣,使之干燥。⑥保藏干燥后的沙土管可直接放入冰箱中保藏；也可以用石蠟封住棉花塞后放冰箱中保藏。02真空冷凍干燥保藏方法真空冷凍干燥保藏法是兼具低溫、干燥、除氧三方面菌種保藏的主要因素，除不宜于絲狀真菌的菌絲體外，對(duì)病毒、細(xì)菌、放線菌、酵母及絲狀菌孢子等各類(lèi)微生物都適用，不宜用凍干法保存的微生物不到2%。冷凍干燥保存的菌種存活時(shí)間長(zhǎng)、效果好，一般菌種可保存5年以上，有的可保藏15年以上不發(fā)生變異。還具有體積小、不易污染、便于運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)，是一種用得最為廣泛的菌種保藏方法。

02真空冷凍干燥保藏方法操作流程準(zhǔn)備安瓶管準(zhǔn)備脫脂乳準(zhǔn)備菌種制備菌懸液分裝樣品冷凍真空干燥封管存活性檢測(cè)保藏活化02真空冷凍干燥保藏方法（1）準(zhǔn)備安瓿管

用于冷凍干燥菌種保藏的管宜采用中性玻璃制造，形狀可用長(zhǎng)頸球形底的，也稱(chēng)淚滴形管。安瓶管先用2%HCl浸泡，再水洗多次，烘干。將標(biāo)簽放入安瓿管內(nèi)，管口塞上棉花，121℃滅菌30min，備用。02真空冷凍干燥保藏方法（2）制備脫脂乳用鮮乳經(jīng)處理或使用脫脂乳粉配兌脫脂牛乳，滅菌，并做無(wú)菌試驗(yàn)后備用。（3）準(zhǔn)備菌種

所用菌種要特別注意其純度，即不能有雜菌污染，然后在最適培養(yǎng)基中用最適溫度培養(yǎng)，使培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物。細(xì)菌和酵母的菌齡要求超過(guò)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種進(jìn)行保藏，其存活率反而降低。一般，細(xì)菌要求24～48h的培養(yǎng)物；酵母需培養(yǎng)3天；放線菌與絲狀真菌則培養(yǎng)7～10天。02真空冷凍干燥保藏方法（4）制備菌懸液

將脫脂牛乳2mL左右直接加到待保藏的菌種斜面試管中，用接種環(huán)將菌種刮下，輕輕攪亂使其均勻地懸浮在牛乳內(nèi)成懸浮液。（5）分裝樣品

用無(wú)菌長(zhǎng)滴管將懸浮液分裝入安瓶管底部，每支安瓶管的裝量約為0.9mL（一般裝入量為安瓶管球部體積的1/3）。

（6）冷凍將分裝好的安瓶管放在低溫冰箱中冷凍，無(wú)低溫冰箱可用冷凍劑如干冰（固體CO2）酒精液或干冰丙酮液，溫度可達(dá)-70℃。將安瓶管插入冷凍劑，只需冷凍4～5min，即可使懸液結(jié)冰。02真空冷凍干燥保藏方法（7）真空干燥（8）封管（9）存活性檢測(cè)抽取一管進(jìn)行存活性檢查。（10）保藏一般4℃