人體組織解剖學(xué)生理實驗

一、坐骨神經(jīng)——腓腸肌標(biāo)本制備目的要求：1、學(xué)習(xí)生理學(xué)實驗基本的組織分離技術(shù)2、學(xué)習(xí)蛙類動物雙毀髓的實驗方法。3、學(xué)習(xí)蛙類坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本制備基本操作技術(shù)實驗原理：

蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳動物有近似之處，若將其離體組織器官放在任氏液中，其興奮性可以在室溫下，于一段時間內(nèi)保持不變，其實驗條件較易控制，來源也較豐富。因此，在實驗中常用坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本觀察神經(jīng)、肌肉的興奮性、刺激以及反應(yīng)的規(guī)律以及肌肉收縮的特點等。實驗動物及器材：

牛蛙、蛙板、玻璃板、粗剪刀、手術(shù)剪、探針、玻璃分針、蛙釘、鑷子、線、滴管、培養(yǎng)皿、Zn-Cu弓、任氏液實驗步驟：1、雙毀髓：枕骨大孔處，向前毀腦，向后毀脊髓。2、去皮和制作下肢標(biāo)本：于腋窩下處橫斷脊柱，并將頭及前肢連同所有內(nèi)臟一起剪去,由斷面將皮膚及肌肉分離，去皮。3、分離兩后肢：用粗剪刀沿脊柱和恥骨聯(lián)合的中線，將標(biāo)本縱剖為兩半。4、分離坐骨神經(jīng)：用玻璃分針沿脊柱游離坐骨神經(jīng)并向下分離，挑開背側(cè)梨狀肌，再循坐骨神經(jīng)溝縱向暴露并分離坐骨神經(jīng)，勿牽拉神經(jīng)。5、游離腓腸?。悍蛛x腓腸肌的跟腱，結(jié)扎跟腱，于結(jié)扎以下剪斷，剪去小腿骨和其上肌肉，再剪去股部肌肉，留長約1~2cm的股骨。6、檢驗標(biāo)本興奮性：用蘸任氏液Zn-Cu弓的兩端輕觸及坐骨神經(jīng)，若腓腸肌收縮，則此標(biāo)本的興奮性良好，說明標(biāo)本制備成功。注意事項：1、不可將剝皮的標(biāo)本與內(nèi)臟等棄物放一起。2、剝皮的后肢不可用自來水沖洗。3、凡標(biāo)本只能用玻璃分針。4、制備標(biāo)本過程中隨時用任氏液潤濕標(biāo)本。實驗結(jié)果及分析：思考題：1、剝皮的后肢能用自來水沖洗嗎？為什么？2、如何檢查脊髓是否毀徹底？二、血紅蛋白含量測定及血型的鑒定（一）血紅蛋白含量的測定目的要求：掌握測定血紅蛋白含量的基本方法——比色法實驗原理：測定血紅蛋白的方法很多，種沙里（sahli）比色法是其中一種。血紅蛋白本身的色澤，常隨所結(jié)合的氧量多少而改變，不便于比色。沙里比色法是用少許稀鹽酸加入一定量血液中，酸不僅使紅細(xì)胞膜破壞，而且使原來位于紅細(xì)胞內(nèi)亞鐵血紅素轉(zhuǎn)變成高鐵血紅素，后者呈較穩(wěn)定的棕色。將其用蒸餾水稀釋后與血紅蛋白測定計的標(biāo)準(zhǔn)色進行目測比色，即得每100ml血液所含的血紅蛋白數(shù)或百分率。實驗器材：血紅蛋白計、采血針、蒸餾水、0.1MHCL、一次性20ul定量毛細(xì)取血管、滴管、玻璃棒、75%酒精棉球、乙醚實驗方法與步驟：1、了解血紅蛋白計的構(gòu)造：

a、標(biāo)準(zhǔn)比色架

b、血紅蛋白稀釋管2、用蒸餾水將血紅蛋白（Hb）稀釋管洗凈，干燥備用。

3、用滴管加0.1MHcl于血紅蛋白稀釋管內(nèi)，到刻度“2%”或“10%”處。

4、采血：常規(guī)消毒指尖，用一次性刺血針刺破無名指尖。拭去第一滴血，待第二滴血流出一大滴時，用一次性毛細(xì)取血管吸血至刻度20ul（0.02ml即20mm3）處。

5、血液與鹽酸完全反應(yīng)：使Fe2+Fe3+(置10分鐘)。6、透光比色7、加蒸餾水至顏色同標(biāo)準(zhǔn)色柱注意事項：1、吹血液入稀釋管及洗凈吸管時，應(yīng)插入液面內(nèi)，吹時不宜用力過猛，以免產(chǎn)生氣泡。2、蒸餾水逐滴加，以免過量稀釋，玻璃取出比色。3、一定要準(zhǔn)確掌握進入稀釋管內(nèi)血液量（20ul）。不可將剝皮的標(biāo)本與內(nèi)臟等棄物放一起。實驗結(jié)果及分析：附：我國成年人Hb正常值：男：120~160g/L或12~16g/100ml血液女：110~150g/L或11~15g/100ml血液新生兒含量可達(dá)20g/100ml以后減少，2~3個月最低，達(dá)9.5g.

思考題：1、測定Hb含量實際意義？Hb具有什么功能？

（二）血紅蛋白含量的測定目的要求：1、學(xué)習(xí)鑒定血型的方法2、觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，掌握ABO血型鑒定的原理實驗原理：

血型是指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)存在于紅細(xì)胞膜外表面特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上特異性糖蛋白）來確定的，這種抗原或凝集原由遺傳基因決定。血清中抗體或稱凝集素，可與紅細(xì)胞膜上不同的相應(yīng)抗原結(jié)合，產(chǎn)生凝集反應(yīng)，最后發(fā)溶血。由于這種現(xiàn)象，臨床上在輸血前必須進行鑒定血型，以確保安全輸血。人類紅細(xì)胞上已發(fā)現(xiàn)20多種血型系統(tǒng)。其中最常用最重要的是ABO血型系統(tǒng)，其次為Rh系統(tǒng)。本次實驗介紹ABO血型鑒定。

實驗器材：采血針、雙凹玻片、記號管、75%酒精棉球、牙簽、A型和B型標(biāo)準(zhǔn)血清、生理鹽水、顯微鏡實驗步驟：玻片法

1、先取雙凹玻片，標(biāo)好姓名、A、B，然后滴加抗A、抗B血清各一滴，取牙簽一支，用其兩頭蘸血分別在A、B血清中攪拌，置0~15分鐘后觀察凝血現(xiàn)象。A抗BB抗A

姓氏第一字母結(jié)果：抗A凝集抗、B不凝集A型血因紅細(xì)胞上有A抗原抗B凝集、抗A不凝集B型血因紅細(xì)胞上有B抗原抗A、抗B凝集AB型血因紅細(xì)胞上有A、B抗原抗A、抗B不凝集O型血因紅細(xì)胞上無抗原注意事項：1、注意消毒，防止穿刺部位皮膚感染。2、肉眼看不清楚凝集現(xiàn)象時，應(yīng)在低倍顯微鏡下觀察。3、紅細(xì)胞懸液和血清應(yīng)新鮮，因污染可產(chǎn)生假凝集現(xiàn)象。思考題：1、已知某人為A型（或B型）血，在無標(biāo)準(zhǔn)血清情況下，可否對其他人進行ABO血型鑒定？如何進行？2、如何區(qū)別血液中凝集與凝固，其機理是否一樣？參考：許多學(xué)者調(diào)查表明：中國人血型分別O型30.77%、A型27.07%、B型32.48%、AB型9.67%三坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制作、骨骼肌單收縮及收縮總和目的要求：1、觀察不同刺激頻率的閾上刺激引起肌肉收縮形式的改變2、觀察骨骼肌收縮總和現(xiàn)象實驗原理：蛙的坐骨神經(jīng)—肌肉標(biāo)本單收縮時程為0.11S，其中潛伏期、縮短期共占0.05S，舒張期占0.06S，若給標(biāo)本相繼兩個最適刺激，使兩次刺激間隔小于該肌肉收縮總時程時，則會出現(xiàn)一連續(xù)的收縮，稱復(fù)合收縮（或收縮總和）。若兩個Sti的時間間隔短于肌肉收縮總程，而長于肌肉收縮潛伏期和縮短期時程，使后一個刺激落于前一個Sti引起肌肉收縮的舒張期內(nèi)，則出現(xiàn)一次收縮尚未完全舒張又引起一次收縮，

若兩次Sti間隔短于肌肉收縮縮短期，使后一次Sti落在前一次刺引起收縮的縮短期內(nèi)，則出現(xiàn)一次收縮正在進行接著又產(chǎn)生一次收縮，收縮的幅度高于單收縮幅度。根據(jù)這個原理，若給予標(biāo)本一連串的最適Sti，則因Sti頻率不同會得到一連串單Sti，不完全強直收縮或完全強直收縮的復(fù)合收縮。實驗動物及器材：蛙的在體腓腸標(biāo)本，常用手術(shù)器械、BL-420E+生物機能實驗采集系統(tǒng)，張力換能器、雙針形露絲Sti電極、支架、培養(yǎng)皿、滴管、任氏液、絲線實驗步驟：1、雙毀髓：枕骨大孔處，向前毀腦，向后毀脊髓。2、腓腸肌的分離：將蛙腹位平放蛙板上，固定四肢，剪開一側(cè)下肢皮膚暴露腓腸肌，用玻鉤分離，在跟健下穿一絲線并結(jié)扎，在遠(yuǎn)端剪斷跟腱，用絲線將腓腸肌提取，將腓腸肌與脛骨分離，用任氏液經(jīng)常濕潤標(biāo)本，以保持肌肉興奮性。在股骨部，用蛙釘固定，標(biāo)本制備完備

。3、儀器及標(biāo)本連接：

將蛙板放于換能器下方，垂直提起腓腸肌上結(jié)扎線，連于換能器敏感染上，調(diào)節(jié)換能器高度，Sti電極固定于鐵架臺上與腓腸肌接觸，應(yīng)保持Sti電極與肌肉接觸良好。4、Sti頻度與反應(yīng)關(guān)系實驗現(xiàn)象：

1）將腓腸肌連在換能器上，其將機械能轉(zhuǎn)化為電信號，該信號從BL—生理機能實驗系統(tǒng)輸入計算機，該系統(tǒng)的輸出通過Sti電極對腓腸肌進行Sti，實驗開始，從BL—NEWCentury軟件菜單上選擇刺激頻度與反應(yīng)關(guān)系實驗項。

2）以波寬為1ms，從最小Sti強度開始逐漸增加刺激強度對肌肉進行Sti,找到剛剛引起肌肉最大收縮Sti強度，即為該標(biāo)本的最適強度，整個實驗過程中均固定在此Sti強度上。3）用單Sti作用于肌肉，可記錄肌肉單收縮曲線。4）用雙Sti作用于肌肉，使兩次Sti間隔為0.06~0.08S，記錄復(fù)合收縮曲線5）將刺激方式置于“連續(xù)”其余參數(shù)固定不變，用頻度為1、6、10、15、20、30HZ的連續(xù)刺激作用于肌肉，可記錄單收縮，不完全強直收縮和完全強直收縮曲線注意事項：1、經(jīng)常給標(biāo)本滴加任氏液，保持標(biāo)本良好興奮性。2、連續(xù)Sti時，每次Sti持續(xù)時間要保持一致，不得超過3~4S，每次刺激后休息30S，以免標(biāo)本疲勞。3、可根據(jù)實驗需要調(diào)整Sti頻度?！究赡艹霈F(xiàn)的問題與解釋】1、隨著刺激頻率增加，肌肉復(fù)合收縮的幅度不是逐漸升高而是下降。這是由于標(biāo)本保護不當(dāng)，肌肉受損傷或疲勞，或刺激頻率過高造成的。２、單收縮曲線忽高忽低標(biāo)本在任氏液浸泡時間不夠,興奮性不穩(wěn)定;肌肉上液體堆積過多,造成短路使刺激強度不穩(wěn)。

實驗結(jié)果及分析：思考題：1、引起組織興奮的刺激必須具備哪些條件？2、何謂閾下刺激、閾刺激、閾上刺激和最適刺激?在閾刺激和最適刺激之間為什么肌肉的收縮隨刺激強度增加而增加?

實驗過程中標(biāo)本的閾值是否會改變?為什么?

實驗二離體腸段運動的描記

實驗?zāi)康模?/p>

通過觀察各種因素對離體小腸平滑肌運動的影響，加深對平滑肌生理特性的了解。實驗原理：

本實驗將小腸平滑肌置于模擬內(nèi)環(huán)境中，觀察當(dāng)模擬內(nèi)環(huán)境因素發(fā)生變化時，離體小腸平滑肌運動的變化。

材料與設(shè)備：

兔、臺氏液、1:10000腎上腺素、1mol·L-1HCl溶液、1mol·L-1NaOH。麥?zhǔn)显∶蟆⒍喙δ苌硇畔⒉杉到y(tǒng)、手術(shù)器械、注射器、棉線、萬能支架、螺旋夾、雙凹夾、溫度計、細(xì)塑料管、縫針、手術(shù)刀

方法與步驟：

1.實驗的準(zhǔn)備

A麥?zhǔn)显∶鬁?zhǔn)備：向麥?zhǔn)显∶髢?nèi)加入臺氏液至浴皿高度的2/3處。外部容器為水浴鍋加自來水，恒溫工作點定在38℃(圖)。

B標(biāo)本制備

動物致死；取腸段，清洗；腸段的固定；實驗項目研究2.實驗項目

A觀察、記錄38℃臺氏液中的腸段節(jié)律性收縮曲線。

B觀察、記錄25℃臺氏液中的腸段節(jié)律性收縮曲線。

C加1:10000腎上腺素1～2滴于中央標(biāo)本槽中，觀察腸段收縮曲線的改變。

D加1:10000乙酰膽堿1～2滴于中央標(biāo)本槽中，觀察腸段收縮曲線的改變。

E向中央標(biāo)本槽內(nèi)加入1mol·L-1HCl溶液1～2滴，觀察腸段收縮曲線的改變。

結(jié)果與分析：

1.剪貼實驗記錄曲線，并做好標(biāo)記、注釋。

2.分析各種因素對小腸運動的影響，并簡要說明機制。實驗七家兔呼吸運動的調(diào)節(jié)一、實驗?zāi)康?/p>

1、學(xué)習(xí)和掌握哺乳類的麻醉和解剖方法。

2、學(xué)習(xí)測定家兔呼吸運動的方法。

3、觀察并分析影響呼吸運動的各種因素二、原理高等動物的呼吸運動受到神經(jīng)系統(tǒng)、體液成分變化的調(diào)節(jié)，以適應(yīng)代謝和環(huán)境的變化。肺牽張反射也參與呼吸運動的調(diào)節(jié)。三、試劑與器材

微機、生物信號處理系統(tǒng)、張力換能器、刺激輸出線、保護電極、家兔、兔體手術(shù)臺、圓頭手術(shù)鑷、手術(shù)剪、手術(shù)刀、止血鉗、彎剪、氣管插管、橡皮管（長1m以上，短10~20cm）、玻璃勾針、20mL注射器、50mL注射器、針頭、20%氨基甲酸乙酯、棉花、棉線、5％乳酸。實驗的基本程序麻醉－氣管切開術(shù)－頸部神經(jīng)分離術(shù)－連接實驗裝置－實驗觀察。四、實驗內(nèi)容講解—觀看多媒體示范—細(xì)節(jié)提醒（一）麻醉兔耳緣靜脈注射：20%氨基甲酸乙酯（1）注射液劑量5ml/kg體重，實驗用家兔<2kg，注射約10ml即可；抽吸麻醉液時先取下針頭，多吸一部分；（2）進針—注射姿勢調(diào)整選擇耳緣靜脈從遠(yuǎn)心端開始；左右耳針頭扎進1/3至1/2，并用拇