中藥材及其制劑分析

中藥材及其制劑分析及質(zhì)量標準的建立中藥材及其制劑常用分析方法質(zhì)量標準的建立中藥材及其制劑常用分析方法

定性分析顯微鑒別理化鑒別(試管)薄層色譜(HPTLC，TLC)化學(xué)對照品對照藥材

HPTLC與普通TLCA:HPTLCSilicagel60（Merck）B:硅膠G預(yù)制板(青島海洋化工廠)

展開劑:氯仿-甲醇-水（15：5：1），10℃以下放置后的下層溶液顯色:10%硫酸：乙醇，105℃加熱約5分鐘檢視:可見光和紫外光燈（366nm）樣品：1.華重樓；2.華重樓；3.重樓皂苷I；4.重樓對照藥材；5.滇重樓；6.滇重樓；7.滇重樓AB定性分析

HPLC,HPLC-MS,HPLC-MS-MSGC,GC-MS

烏頭類藥材的HPLC分析烏頭對照品生川烏

生川烏總生物堿成分HPLC-MS圖中藥材及其制劑常用分析方法定量分析分光光度法

薄層色譜法（TLC）薄層掃描法氣相色譜法（GC）中藥材及其制劑中揮發(fā)性成分

農(nóng)藥殘留

有機溶劑殘留高效液相色譜法（HPLC）

檢查重金屬（砷，鉛，汞等）農(nóng)藥殘留（有機氯，有機磷和除蟲菊酯等）中藥材及其制劑常用分析方法

中藥材及其制劑的質(zhì)量標準

我國中藥材及制劑法定質(zhì)量標準概況

中藥材及制劑質(zhì)量標準的研究制訂藥品標準系根據(jù)藥物來源、生產(chǎn)工藝及貯運過程中的各個環(huán)節(jié)所制定的、用以檢測藥品質(zhì)量是否達到用藥要求并衡量其質(zhì)量是否穩(wěn)定均一的技術(shù)規(guī)定。由國家政府制定并頒布的藥品標準即為國家藥品標準，系國家站在公眾立場為保證藥品質(zhì)量而規(guī)定的藥品所必須達到的最基本的技術(shù)要求。國家藥品標準屬于強制性標準。不能達到國家藥品標準要求的藥品，不得作為藥品銷售或使用。

中藥材及制劑法定質(zhì)量標準概況國家標準中華人民共和國藥典《中國藥典》中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準（部頒標準）國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標準（局頒標準）地方標準現(xiàn)行中藥材及制劑法定質(zhì)量標準

中華人民共和國藥典《中國藥典》《中國藥典》是國家為保證藥品質(zhì)量所制訂的法典，是藥品生產(chǎn)、經(jīng)營、使用，檢驗和監(jiān)督管理部門共同遵循的法定依據(jù)，也是對外貿(mào)易和技術(shù)交流不可缺少的準繩。在《中國藥典》一部中，國家對常用藥材編纂制定了統(tǒng)一的標準，并對其中共性要求在附錄等部分給予統(tǒng)一的規(guī)定。

自1953年第一版中國藥典頒布以來，已連續(xù)8版收載中藥材及制劑，在品種數(shù)量、檢測方法的科學(xué)性、專屬性及合理性等方面不斷完善、發(fā)展。衛(wèi)生部藥品標準與局頒標準《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥材（簡稱《部頒藥材標準》）《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑《國家食品藥品監(jiān)管局進口藥材標準》43種

除《中國藥典》收載的品種外，凡來源清楚，療效確切，較多地區(qū)經(jīng)營使用的中藥材，本著“一名一物”原則，分期分批制訂部標準，第一批收載了101種，匯編為《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥材(第一冊)，于1991年12月10日頒布。

2004年5月8日，國家食品藥品監(jiān)管局印發(fā)了《關(guān)于頒布兒茶等43種進口藥材質(zhì)量標準的通知》（國食藥監(jiān)注[2004]144號），頒布了經(jīng)國家食品藥品監(jiān)管局修（制）訂的兒茶等43種進口藥材的質(zhì)量標準。局頒標準

包括《維藥標準》、《蒙藥標準》、《進口藥材標準》、《新藥標準》等數(shù)種地方標準

指各省、自治區(qū)，直轄市使用的中藥材，除《中國藥典》與部頒標準已收載的品種外，另行頒布的標準。如《四川省中藥材標準》、《貴州省中藥材標準》、《黑龍江省中藥材標準》等。

飲片按照國家或省、自治區(qū)、直轄市制定頒布的《飲片炮制規(guī)范》炮制。制定藥品質(zhì)量標準的原則和基本程序

原則確保藥品安全性與有效性密切結(jié)合實驗研究和生產(chǎn)實際的原則嚴格統(tǒng)一與協(xié)調(diào)一致的原則（規(guī)范化）先進技術(shù)與經(jīng)濟合理相結(jié)合的原則制定藥品質(zhì)量標準的原則和基本程序基本程序藥品的命名考察藥品生產(chǎn)全過程：原料，純度，中間體殘留溶劑，溫度，濕度光照收集國內(nèi)外相關(guān)資料對藥品質(zhì)量考察中發(fā)現(xiàn)的問題進行科學(xué)實驗起草藥品標準及起草說明

中藥材質(zhì)量標準內(nèi)容簡介基原：中藥材的來源。性狀：為中藥材的宏觀特征,用語以現(xiàn)代科學(xué)術(shù)語為主鑒別：經(jīng)驗鑒別、顯微鑒別、一般理化鑒別、色譜鑒別、光譜鑒別檢查：包括雜質(zhì)、水分、灰分、酸不溶性灰分、重金屬、砷鹽、農(nóng)藥殘留量、有關(guān)的毒性成分及其它必要的檢查項目。浸出物：主要針對目前尚無成熟的含量測定方法或所測成分含量低于萬分之一的品種，常用的有醚浸出物、醇浸出物和水浸出物的測定。含量測定：系指藥材中某類成分或某一成分的含量測定（已知有效成分，毒性成分或能反映內(nèi)在質(zhì)量的指標成分）含量測定書寫內(nèi)容及順序：藥材粉碎程度、提取分離、供試液配置、測定方法、含量限度重量法指采用溶劑萃取或沉淀劑沉淀等方法，對藥材提取物進行適當?shù)募兓螅M行稱量的一種測定方法。容量法指采用滴定的方法對藥材中某類成分進行測定的方法，常用于總生物堿、總有機酸等的含量測定。

色譜法包括薄層掃描法、高效液相色譜法、氣相色譜法、毛細管電泳色譜法等。光譜法常用的為可見紫外分光光度法，主要用于測定藥材及制劑中的某類成分。中藥制劑質(zhì)量標準內(nèi)容簡介處方：制劑組成制法：制劑的制備方法性狀：制劑的宏觀特征鑒別：理化鑒別、色譜鑒別、光譜鑒別含量測定：系指中藥制劑中某類成分或某一成分的含量測定

測定方法同藥材功能與主治：用法用量：規(guī)格：貯藏：中藥材質(zhì)量標準的研究制訂含量測定

對藥物中的有效或指標成分及成分類別的質(zhì)量評價進行的測定。藥效成分或成分類別指標成分或成分類別應(yīng)選擇專屬性強、靈敏度高、重現(xiàn)性好，簡便、經(jīng)濟的含量測定方法。中藥質(zhì)量標準中含量測定項要求

分析方法的驗證

準確性→回收率試驗精密度（重復(fù)性）→重復(fù)性試驗檢測限度→檢出限定量限度→測定限線性和范圍→線性范圍專屬性耐用性中藥質(zhì)量標準中含量測定項要求回收率試驗

考察測量值與真實值或認可的參考值之間的接近程度。一般采用加樣回收方法進行試驗，樣品中含有量與加入的純品量應(yīng)大致相當。

中藥質(zhì)量標準中含量測定項要求回收率計算

測得量-樣品中含量回收率%=X100%加入量

同一樣品，制備相同濃度的6份供試品（樣品取樣量減半，以1：1比例加入對照品）；同一樣品，制備3個濃度的供試品，每個濃度分別制備3份供試液，對照品的加入方式又有以下三種方式：中藥質(zhì)量標準中含量測定項要求

取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），設(shè)計3個濃度，按不同比例加入對照品。中間濃度一般按1：1比例加入，低、高濃度可選0.5：1，1.5：1的比例。加入的對照品的量要適當，保證供試品溶液的濃度（或量）在考察的線性范圍內(nèi)取3種不同量的樣品各3份，每個取樣量分別按1：1比例加入對照品，中間濃度應(yīng)選定在正常測定濃度，其他兩個濃度可以結(jié)合范圍測定項目選擇低、高濃度。按標示量計算的組分，可參照化學(xué)藥品測定方法，取9份樣品，按0.8：1，1：1，1：1.2的比例加入對照（樣品取樣量減半）。測定數(shù)據(jù)的精度要求，一般應(yīng)滿足以下規(guī)定：回收率計算值在95－105％范圍，相對標準偏差（RSD%）薄層掃描法＜5%，高效液相色譜法/氣相色譜法＜3%。

精密度試驗

儀器精密度薄層掃描法同板精密度異板精密度

重復(fù)性試驗

指在同樣的操作條件下，在較短的時間間隔的精密度。一般取不少于5份樣品，重復(fù)測定，以含量值計算RSD%。

重現(xiàn)性試驗

指不同試驗室之間的精密度(用于合作研究或協(xié)作標定等)。中藥質(zhì)量標準中含量測定項要求重復(fù)性：以下幾種方法可選擇使用。測定數(shù)據(jù)的精度要求，一般應(yīng)滿足以下規(guī)定：相對標準偏差（RSD%）薄層掃描法＜5%，高效液相色譜法/氣相色譜法＜3%測定同一濃度6份樣品，計算含量平均值和RSD%測定3個不同濃度9份樣品（三個不同濃度，每個不同濃度分別制備3份供試品溶液），高低濃度可以結(jié)合線性范圍測定項目考察設(shè)計。一般中間濃度為正常測定的樣品濃度。計算9份樣品的含量平均值和RSD%

線性關(guān)系考察

以分析方法的響應(yīng)值對被分析物的濃度或含量作圖，或用適當?shù)慕y(tǒng)計方法評價兩者是否呈線性關(guān)系，以及線性的程度。*至少要用5個濃度*線性關(guān)系的測試范圍一般為正常分析量的25%-150%

中藥質(zhì)量標準中含量測定項要求將苦參堿對照品稀釋至20%、50%、100%、120%、150%五個濃度，按上述色譜條件，分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，以對照品進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線計算得回歸方程：苦參堿：y=2056508.06x+36389.72r=0.9997。表明苦參堿在0.792-5.996μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

專屬性試驗

指可能存在的組分，如類似物、降解物、基質(zhì)等存在時，對被分析物準確可靠測定的能力。空白陰性對照與參照物比較保留時間

DAD吸收光譜等對照物加入試驗中藥質(zhì)量標準中含量測定項要求耐用性試驗

*

指試驗參數(shù)發(fā)生一定范圍的改變時，測量保持不受影響的能力。不同色譜柱比較流動相組成比例變化比較(不同pH值)不同柱溫比較不同檢測波長的比較

中藥質(zhì)量標準中含量測定項要求

按中藥材所含化合物的類別，選擇適當溶劑進行提取。根據(jù)提取物的性質(zhì)，選擇適當?shù)姆蛛x方法，如：正相或反相HPLC、CE等等，摸索出若干套最佳色譜條件，盡可能達到樣品中的各化學(xué)成分被分離和檢測到。結(jié)合各分離組分的性質(zhì)，選擇合適的檢測系統(tǒng)和手段，如：紫外、蒸發(fā)光散射、HPLC/MS、GC/MS等方法獲取化學(xué)成分的數(shù)據(jù)。中藥材質(zhì)量評價中的指紋圖譜方法

指紋圖譜是指采用一定的分析方法得到的中藥化學(xué)物質(zhì)或生物物質(zhì)的圖譜，包括化學(xué)指紋圖譜和生物指紋圖譜。用于中藥質(zhì)量控制的主要為化學(xué)指紋圖譜，即采用一定的分析方法得到的能夠標示該中藥主要化學(xué)成分的圖譜，簡稱指紋圖譜。中藥材質(zhì)量評價中的指紋圖譜方法

我國對黃芪、三七、黃芩等多種常用中藥材的指紋圖譜進行了系統(tǒng)研究，建立了指紋圖譜檢測標準，此方法對比較藥材質(zhì)量與鑒別物種具有較大的作用。中藥材質(zhì)量評價中的指紋圖譜方法

黃芩HPLC圖譜12黃芩苷23漢黃芩苷25黃芩素26漢黃芩素

在中藥材指紋圖譜的相似性評價研究技術(shù)和方法方面已取得了較大進展，開發(fā)了多種計算機指紋圖譜相似度評價軟件，使指紋圖譜評價由最初的峰面積比值計算發(fā)展成為計算機模擬識別。這不僅節(jié)約了大量的時間，而且使評價更加客觀、科學(xué)。中藥材質(zhì)量評價中的指紋圖譜方法

由于中藥材大部分來源于生物體，其化學(xué)成分受產(chǎn)地、氣候、生態(tài)環(huán)境、栽培、加工技術(shù)等影響很大。選擇“地道藥材”或現(xiàn)代研究證明為優(yōu)質(zhì)的藥材樣品作為“中藥材實物對照”，用于研究中藥材質(zhì)量的變化較為可行，且可以消除一些噪音和干擾，使對質(zhì)量的評價更科學(xué)和合理。中藥材質(zhì)量評價中的指紋圖譜方法

品名所測成分測定方法含量限度人參人參皂甙Re，和人參皂甙Rg1的總量HPLC≥0.25人參葉人參皂甙Re，和人參皂甙Rg1的總量HPLC≥2.25兒茶兒茶素和表兒茶素的總量HPLC≥21.0大黃大黃素和大黃酚的總量HPLC≥0.5吳茱黃吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總量HPLC≥0.20厚樸厚樸酚與和厚樸酚的總量HPLC≥2.0穿心蓮穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量TLCS≥0.80蟾酥華蟾蜍次素與脂蟾毒配基的總量HPLC≥6.0

總量結(jié)合某一成分的含量測定是今后一段時間內(nèi)中藥材質(zhì)量標準的發(fā)展方向。川烏、草烏、附子及炮制品品質(zhì)鑒定

研究目的活性成分的分離制備及結(jié)構(gòu)鑒定草烏，川烏，附子及炮制品雙酯，單酯型生物堿成分的含量測定草烏，川烏，附子及炮制品HPLC–MS分析生、制川烏的藥效學(xué)和毒理學(xué)初步研究

小結(jié)

川烏，草烏，附子為常用有毒中藥，川烏和附子分別是毛茛科植物烏頭(Aconitumcarmichaeli

Debx.)的干燥母根和子根，草烏是毛茛科植物北烏頭

(Aconitum

kusnezoffiiReichb.)的干燥塊根，具有回陽救逆、祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛等功效，生品有大毒，其中所含的雙酯型二萜生物堿烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿等毒性很強，用藥劑量與中毒劑量接近。

概述概述

烏頭AconitumcarmichaeliDebx.

川烏概述

烏頭AconitumcarmichaeliDebx.

川烏附子概述

北烏頭AconitumkusnezoffiiReichb.

草烏概述

北烏頭AconitumkusnezoffiiReichb.草烏概述

烏頭AconitumcarmichaeliDebx.

川烏白附片

黑順片

鹽附子

經(jīng)炮制加工后雙酯型生物堿可轉(zhuǎn)化為單酯型生物堿,從而減小毒性。炮制過程中應(yīng)嚴格控制雙酯型生物堿的轉(zhuǎn)化程度,防止炮制不完全,有毒成分含量偏高,用藥不安全;或炮制太過,有效成分流失嚴重,影響療效。建立專屬的,可有效控制飲片質(zhì)量的檢測方法，一直是一項難度很大的課題

。

活性成分的提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定

StructureMesaconitine（新烏頭堿）

Benzoylmesaconine

(苯甲酰新烏頭堿)

StructureHypaconitine（次烏頭堿）

Benzoylhypaconine(苯甲酰次烏頭堿)

從制川烏中分離得到苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿2個單酯型生物堿,為制川烏炮制原理的闡明，質(zhì)量評價和質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。

烏頭類藥材的HPLC定量分析在制川烏質(zhì)量控制方面,國內(nèi)外學(xué)者在生物堿含量測定方法上作了大量研究，高效液相色譜法測定生物堿成分，選擇性較好，但目前報道的方法中多采用二乙胺或三乙胺為流動相，堿性較強，易破壞色譜柱固定相，且一般只測定雙酯型烏頭生物堿，而單酯型烏頭生物堿測定及同時測定單、雙酯型烏頭生物堿的文獻幾乎沒有報道。

烏頭類藥材的HPLC定量分析HPLC色譜條件

儀器:島津10AD,島津2010/SPD-M,Waters2690

色譜柱:DiamonsilTMC185μm,4.6mmX250mm

流動相:流動相A:乙腈-四氫呋喃流動相B:0.1M醋酸銨梯度洗脫流速：0.8mL?min-1

檢測波長：235nm

柱溫：室溫

烏頭類藥材的HPLC定量分析烏頭對照品生川烏

制川烏對照品制川烏

生川烏制川烏

方法學(xué)考察線性范圍的考察

精密度試驗

穩(wěn)定性試驗

重復(fù)性試驗

加樣回收率試驗

耐受性試驗—流動相不同pH對含量的影響

烏頭堿

(aconitine)

Y=1.820×106X-2.591×105

0.32-5.16

0.9999Y=2.620×106X-6.301×103

0.01-0.360.9996次烏頭堿(hypaconitine）Y=1.791×106X-5.409×105

1.29-20.600.9999Y=2.022×106X-2.591×105

0.05-1.320.9999Y=1.366×106X+2.604×102

0.01-1.060.9999

新烏頭堿（mesaconitine）Y=1.832×106X-1.727×105

0.22-3.590.9999苯甲酰新烏頭堿（Benzoylmesaconine）Y=1.110×106X+2.374×104

0.13-2.040.9998

Y=1.033×106X+1.326×103

0.02-0.100.9997苯甲酰次烏頭堿（benzoylhypaconine）Y=1.318×106X+3.571×104

0.15-2.410.9999Y=1.613×106X+1.127×1030.02-0.120.9996線性范圍

精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液(四川江油1)10μL，按上述色譜條件重復(fù)進樣5次，測定峰面積積分值，結(jié)果生川烏中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿峰面積的RSD（n=5）分別為0.51%，0.18%和0.21%，制川烏中苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿和次烏頭堿峰面積的RSD（n=5）分別為1.1%，1.5%和0.32%。

重復(fù)性試驗

取同一批生川烏藥材樣品（四川江油1）5份，按供試品溶液制備方法操作，依上述測定條件分別進樣10μL測定含量，結(jié)果烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿平均含量分別為0.011%，0.138%，0.024%，RSD分別為2.1%，1.1%和2.5%。同法測得制川烏中苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿和次烏頭堿平均含量分別為0.050%，0.059%和0.016%，RSD分別為1.8%，2.5%和1.6%。

加樣回收率試驗精密稱取已測知含量的生川烏藥材樣品（四川江油1）0.5g，共9份，平均分為3組，分別精密加入烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿混合對照品適量（分別約相當于樣品中含量的50%，100%，150%），照供試品溶液制備方法操作，并按上述測定條件測定，每份進樣2次，進樣量10μL，計算回收率，結(jié)果低、中、高3個加入量的平均回收率（n=3）分別為新烏頭堿112.2%（RSD=3.2%），106.3%(RSD=1.5%），103.5%（RSD=2.3%）；次烏頭堿107.6%（RSD=3.3%），104.2%（RSD=1.5%），102.9%（RSD=1.9%）；烏頭堿105.0%（RSD=4.4%），104.9%（RSD=1.8%），新烏頭堿100.4%（RSD=3.0%）。精密稱取已測知含量的制川烏樣品0.5g，共5份，分別精密加入苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿混合對照品適量，同法測得制川烏中苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿的平均回收率（n=5）分別為104.1%（RSD=2.2%），100.8%（RSD=2.9%）。

耐受性試驗—流動相不同pH對含量的影響

由于烏頭中所含生物堿成分結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，對酸堿較敏感，因此考察了流動相不同pH（5.50，5.75，6.00）對含量的影響，實驗結(jié)果表明，流動相pH在5.5-6.0范圍內(nèi)苯甲酰新頭堿、苯甲酰次烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿含量基本穩(wěn)定。

穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液(四川江油1)，在0，4，8，14，20h進樣10μL測定，結(jié)果生川烏中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿峰面積的RSD分別為0.89%，0.94%，0.71%；制川烏中苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿和次烏頭堿峰面積的RSD分別為0.45%，0.50%，0.99%。表明供試品溶液在20h內(nèi)測得峰面積值基本不變。

烏頭類藥材的