酮康唑?qū)Υ笫蟾渭毎豴450及其主要亞型的影響

酮康唑?qū)Υ笫蟾渭毎豴450及其主要亞型的影響

丙酮醇是第一種可以口服的抗真菌藥物。它對淺表性和全身真菌感染也有很好的治療效果，尤其是對懷疑可能性性全身真菌感染的無病部位的患者。然而,隨著該藥的廣泛應(yīng)用,肝毒性以及其與經(jīng)微粒體細胞色素P450酶系(CYP450)代謝藥物間的相互作用也日益凸現(xiàn)出來。臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn),酮康唑與一些經(jīng)CYP3A4代謝的藥物聯(lián)合應(yīng)用時,可以改變這些藥物在體內(nèi)的代謝過程,引起毒性反應(yīng)。目前酮康唑?qū)YP450其他主要藥物代謝亞型的影響尚未見文獻報道。本研究觀察大鼠經(jīng)酮康唑處理后肝臟CYP450及其亞型CYP1A1,1A2,1B1,2B1/2,3A和2E1活性的變化,以評價酮康唑?qū)Ω闻KCYP450及其亞型是否有抑制或誘導(dǎo)效應(yīng),為指導(dǎo)臨床合理聯(lián)合用藥提供實驗依據(jù)。材料和方法1g/g劑量試驗雄性Sprague-Dawley大鼠(由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供,動物合格證號:SCXK-(軍)-2002-001),體重180~220g,常規(guī)條件飼養(yǎng),自由進食飲水,動物房定時通風(fēng)消毒,室溫23~25℃,濕度30%~70%。試驗前禁食12h。酮康唑(Ketoconazole,酮康唑)原料藥(批號041204)由南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司提供?？捡R斯亮蘭蛋白檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所);P450-GloTM檢測試劑盒(1A1,1A2,1B1,美國Promega公司);resorufin(Acros公司);紅霉素(Amresco公司)。2d-1的給藥與肝勻漿的制備大鼠20只按體重由計算機隨機分為4組,分別為溶劑對照組,酮康唑低、中、高劑量組,每組5只大鼠。酮康唑低、中、高劑量組分別灌胃給予酮康唑140,280,420μmol·kg-1·d-1(酮康唑用聚乙二醇200溶解,此劑量分別相當(dāng)于臨床用藥劑量的11,22,33倍),溶劑對照組灌胃等容積的聚乙二醇200,各組均給藥或溶劑7d。d8處死,處死前動物禁食12h。給藥結(jié)束,大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉,取出肝臟稱重,以0.15mol·L-1KCl-0.2mol·L-1蔗糖為勻漿介質(zhì),按1∶3的比例在冰浴中制成肝勻漿,4℃下9000g離心20min。取上清4℃下105000g離心60min制備微粒體,0.05mol·L-1Tris-0.25mol·L-1蔗糖(pH7.6)混懸,干冰速凍后-70℃保存。3酶活的測定用考馬斯亮蘭蛋白檢測試劑盒進行微粒體蛋白定量;總CYP450含量用CO吹泡法在450和490nm差示光譜測定;CYP2B1/2(7-戊氧基試鹵靈O-脫烷基化酶,7-penzyloxyresorufin-O-dealkylase)用熒光比色法測定;CYP1A1,1A2,1B1用P450-GloTM檢測試劑盒測定;CYP3A(紅霉素N-脫甲基酶,erythromycinN-demethylase,EMND)和CYP2E1(苯胺羥化酶,anilinehydroxylase,ANH)用化學(xué)比色法測定。4處理數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件包進行方差分析和相關(guān)性檢驗。結(jié)果1組肝臟臟器系數(shù)表1酮康唑給藥后,低劑量組肝臟臟器系數(shù)為(37.2±2.1)mg·g-1,與溶劑對照組(38.4±2.3)mg·g-1比較無統(tǒng)計學(xué)差異,中、高劑量組肝臟臟器系數(shù)分別為(45.9±2.6)和(49.7±2.9)mg·g-1,與溶劑對照組比較均顯著升高(P<0.01)。2中劑量組cyp450含量比較酮康唑不同劑量給藥后,高、低劑量組肝臟CYP450含量與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異,中劑量組引起肝臟CYP450含量顯著降低(P<0.01),結(jié)果見表1。與溶劑對照組比較,a:P<0.013不同劑量對酮康唑cyp2b1/2活性的影響不同劑量酮康唑給藥后,大鼠肝臟CYP1A1活性明顯升高,各劑量組與對照組比較均存在非常顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01);1A2活性在低劑量組明顯下降,在高劑量組卻明顯升高(P<0.05);各劑量組均使1B1的活性明顯升高(P<0.01),結(jié)果見表2。低劑量組酮康唑抑制了CYP2B1/2的活性,中、高劑量組卻誘導(dǎo)2B1/2活性顯著升高(P<0.05,P<0.01)。不同劑量組酮康唑均未引起CYP2E1活性顯著變化,但中高劑量組酮康唑引起CYP3A活性顯著下降(P<0.05或P<0.01),結(jié)果見表3。與溶劑對照組比較,a:P<0.05,b:P<0.01(下同)c:CYP2B1/2的活性以1mg蛋白1min生成試鹵靈的量表示,單位是pmol·min-1·mg-1;d:CYP2E1和3A的活性均以1mg蛋白1min生成甲醛的量表示,單位是nmol·min-1·mg-1cyp450酶系統(tǒng)的藥物誘導(dǎo)或抑制作用酮康唑通過競爭性抑制CYP45014DM(羊毛甾醇脫甲基酶)使羊毛甾醇蓄積,導(dǎo)致真菌細胞膜結(jié)構(gòu)功能組成成分麥角甾醇生物合成缺乏,引起質(zhì)膜完整性破壞,通透性增高,進而發(fā)生細胞壞死而起藥效作用。通過對真菌和哺乳動物體內(nèi)克隆出的P45014DM基因進行分析,發(fā)現(xiàn)兩者都含500至560個氨基酸殘基,并有35%~42%的序列等同率。由于真菌和哺乳類動物的CYP450具有交叉重復(fù)性,酮康唑在對真菌起作用的同時也會對哺乳類動物CYP450產(chǎn)生影響。細胞色素P450酶系參與催化體內(nèi)許多內(nèi)、外源性化學(xué)物的氧化反應(yīng),其中CYP1A1,1A2,1B1,2B1/2,2E1和3A在藥物和致癌物代謝活化過程中發(fā)揮非常重要的作用。由于藥物對CYP450的誘導(dǎo)或抑制是臨床發(fā)生藥物間相互作用的一種重要原因和方式。因此,了解藥物對CYP450酶系的誘導(dǎo)或抑制作用,有助于評價藥物安全性,指導(dǎo)臨床合理聯(lián)合用藥。本研究觀察了酮康唑?qū)⑴c藥物和致癌物代謝的主要CYP450亞型活性的影響。結(jié)果表明,在本研究所用劑量下,酮康唑?qū)Υ笫蟾闻KCYP2E1活性沒有影響,對CYP1B1活性有明顯誘導(dǎo)作用,有明確的劑量反應(yīng)關(guān)系。低劑量組酮康唑?qū)YP2B1/2的活性有較弱的抑制作用,高劑量卻明顯誘導(dǎo)CYP2B1/2的活性。而CYP3A活性則隨酮康唑劑量升高,逐漸下降,表明酮康唑?qū)YP3A活性有明確抑制作用。已知CYP1B1,2B1/2和3A是參與藥物代謝的主要亞型,因此臨床上酮康唑與通過CYP450代謝的藥物聯(lián)合應(yīng)用時,應(yīng)注意監(jiān)測血藥濃度,防止藥物蓄積中毒或藥物代謝加快降低藥效。由于酮康唑自身也由CYP450代謝,長期用藥可能導(dǎo)致自身代謝的抑制,體內(nèi)藥物蓄積,應(yīng)予注意。另外,各劑量組酮康唑均對CYP1A1有明顯誘導(dǎo)作用,有明確的劑量反應(yīng)關(guān)系。低劑量組酮康唑?qū)YP1A2的活性有較弱的抑制作用,高劑量組卻明顯誘導(dǎo)CYP1A2的活性。由于CYP1A1/2參與90%前致癌物的活化,如苯并(a)芘等,因此長期應(yīng)用酮康唑時應(yīng)予以重視。低劑量酮康唑抑制CYP1A2和2B1/2活性,高劑量卻出現(xiàn)誘導(dǎo)效應(yīng),造成這種現(xiàn)象的原因可能是低劑量酮康唑給藥后,CYP1A2