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文檔簡介

實驗三細菌的染色技術(shù)及微生物大小的測定第一部分

細菌的染色技術(shù)目的要求染色劑和染色的原理實驗材料實驗程序目的要求掌握微生物的染色原理掌握染色的基本操作技術(shù)掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法染色劑和染色原理Ⅰ微生物染色的基本原理：細菌機體無色透明，與背景反差小，可將細菌染色，增加其反差；細菌在通常培養(yǎng)狀態(tài)下總帶負電荷，故可用帶正電荷的堿性染料染色。染色劑染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類型：1.酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。2.堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細菌易被堿性染料染色。3.中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細胞核染色）。4.單純?nèi)玖希哼@類染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類的染料。染色劑和染色原理Ⅱ微生物染色常用染料如下表：實驗材料顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。石炭酸復(fù)紅染液、草酸銨結(jié)晶紫染液、革氏碘液、95％乙醇、蕃紅染液菌種：枯草桿菌、大腸桿菌實驗程序Ⅰ

（細菌染色的方法和步驟）細菌染色的方法:

1.簡單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以觀察微生物的大小、形狀和細胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。2.復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、細胞染色法等。染色技術(shù)的一般過程

涂片干燥固定染色媒染脫色復(fù)染水洗干燥鏡檢實驗程序Ⅱ

（簡單染色的方法和步驟）簡單染色法(一般染色法)1.涂片2.干燥：自然晾干或酒精燈高處微微加熱。3.固定4.染色：在整個涂面上滴加染色液，染色１min。

5.水洗：傾去染液，用自來水細流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。6.吸干7.鏡檢實驗程序Ⅲ

（革蘭氏染色的方法和步驟）革蘭氏（Gram）染色法1.涂片、干燥、固定2.初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液染1min，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：加革氏碘液媒染1min，水洗。4.脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進行脫色約30s～45s，接著立即用流水沖洗。

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