川產(chǎn)中藥材木霉種群結(jié)構(gòu)及抑菌活性研究

川產(chǎn)中藥材木霉種群結(jié)構(gòu)及抑菌活性研究

病蟲害的嚴(yán)重影響是植物的生長、質(zhì)量和產(chǎn)量，尤其是由土壤傳統(tǒng)病引起的。如枯病、枯病、白絲病等。對于土傳病害的防治,一般化學(xué)農(nóng)藥難于有效,培育抗病品種是經(jīng)濟(jì)有效的措施。但由于中藥材品種培育及栽培的特殊性,中藥材抗多種病害品種培育尚未取得成功。目前中藥材種植技術(shù)水平普遍較低,濫用化學(xué)農(nóng)藥生產(chǎn)的中藥材不僅產(chǎn)量低、品質(zhì)差,而且農(nóng)藥殘留污染重。如半夏由于殺蟲劑、除草劑的大量施用,產(chǎn)量大幅度下降,所含有害物質(zhì)日趨加重。因此,開辟既能控病增產(chǎn)又可保護(hù)環(huán)境的病害管理新技術(shù)受到廣泛重視,利用有益微生物防治中藥材土傳病害正順應(yīng)這一潮流。本文報(bào)道了從不同生態(tài)環(huán)境的多種中藥材植物根際土壤中分離篩選得到的木霉情況,以及所獲木霉菌株的拮抗作用和控害效果。1材料和方法1.1木霉樹的分離與篩選1.1.1川產(chǎn)藥材根際采集土樣2000~2001年從峨眉、簡陽、南充等不同地區(qū)、不同生態(tài)環(huán)境的丹參、川紅花、川芎、黃連、朱砂連等10種主要川產(chǎn)中藥材根際5~10cm深度采集土樣51份。1.1.2d的培養(yǎng)土樣分離木霉用稀釋平板法和誘捕法。稀釋平板法用1/1000稀釋濃度的土壤懸浮液接種于平板后,置25℃培養(yǎng)3d,移植在試管斜面培養(yǎng)基上。誘捕法采用尼龍網(wǎng)片作載體,先將消毒的尼龍網(wǎng)片放入接有川紅花枯萎病菌的培養(yǎng)皿內(nèi),等尼龍網(wǎng)片上長滿菌株后,將尼龍網(wǎng)片接在土樣上,3~5d后,揭下尼龍網(wǎng)片放在PDA培養(yǎng)基上,選取木霉菌株純化培養(yǎng)。1.2生長情況觀察將木霉和尖孢鐮刀菌或立枯絲核菌同時(shí)接入9cm的PDA培養(yǎng)皿內(nèi),兩者相距5.0cm,設(shè)3次重復(fù),以不接木霉為對照。將培養(yǎng)皿置于25℃培養(yǎng)箱中,72h后,觀察兩者的生長情況。并挑取兩菌落交界處的氣生菌絲,在光學(xué)顯微鏡下觀察。1.3地面控制試驗(yàn)1.2.1木霉t56的制備試驗(yàn)在2000~2001年進(jìn)行,試驗(yàn)地點(diǎn)為簡陽云龍、三岔和平泉。供試菌株為T23,T56.設(shè)置木霉T23制劑5.0倍和木霉T56制劑5.0倍兩種處理,以4000mg/kg多菌靈為藥劑對照,使用劑量為150kg/hm2,并設(shè)空白對照。隨機(jī)排列,重復(fù)3次,小區(qū)面積20m2,播種時(shí)施用。調(diào)查丹參的出苗數(shù)、丹參根腐病的發(fā)病情況及產(chǎn)量。1.2.2木霉t56的添加試驗(yàn)于2000~2001年在四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物育種栽培研究所試驗(yàn)農(nóng)場內(nèi)進(jìn)行。設(shè)置木霉T23制劑2.5倍、5.0倍,木霉T56制劑2.5倍、5.0倍4種處理,按150kg/hm2的量窩施,并設(shè)空白對照。每處理重復(fù)3次,隨機(jī)排列。調(diào)查川紅花出苗率、苗齡20d時(shí)的鮮苗重、成株期的枯萎病發(fā)生情況,計(jì)算相對防效。2結(jié)果與分析2.1生境有木霉的土樣率和基因型鑒定木霉廣泛存在于川產(chǎn)中藥材的根際土壤中。通過對土樣分析表明,來自不同生態(tài)環(huán)境的土壤中的木霉的陽性率差異較大,農(nóng)田生態(tài)環(huán)境下的木霉出現(xiàn)幾率高于野生環(huán)境:農(nóng)田平壩地區(qū)有木霉的土樣率為71.0%,而采自于峨眉山等野生生境有木霉的土樣率為45.0%.從51份土樣中共得到62個(gè)木霉菌株。其中,采用稀釋平板法分離的木霉陽性土樣率為60.8%,分離到了56個(gè)木霉菌株;采用誘捕法分離的木霉陽性土樣率9.8%,分離到6個(gè)木霉菌株。62個(gè)菌株經(jīng)鑒定表明,哈茨木霉有36個(gè),占58.1%,桔綠木霉11個(gè),占17.7%,擬康氏木霉7個(gè),占11.3%,其它木霉占12.9%;哈茨木霉(T.harzianum)、桔綠木霉(T.citrinoriride)、擬康氏木霉(T.pseudokoningii)為其主要種群。用誘捕法獲得的6個(gè)木霉菌株全部為哈茨木霉。通過室內(nèi)初步篩選,獲得對土傳病害控制作用較好的菌株有哈茨木霉T23,T45,T120和桔綠木霉T56等。2.2川紅豆苗病對立枯絲核菌生長的影響不同菌株對病原菌的拮抗作用不同。對引起川紅花枯萎病的尖孢鐮刀菌,以T23的拮抗作用最強(qiáng),生長抑制率高達(dá)72.7%,其次是T56,抑制率為70.0%,T120和T45略低,分別為60.3%和55.8%.對引起川紅花苗病的立枯絲核菌,以T56的拮抗作用最強(qiáng),對立枯絲核菌的生長抑制率高達(dá)75.1%,T23次之,為71.1%,T45為67.3%.取兩菌落交界處的氣生菌絲,在光學(xué)顯微鏡下觀察可見:立枯絲核菌菌絲被木霉菌絲纏繞、寄生,病菌菌絲細(xì)胞變短,且病菌的孢子含量很少,而木霉的孢子量很大。2.3不同制劑對人參木霉病防治效果木霉處理對丹參出苗有一定促進(jìn)作用,T56制劑處理的出苗率顯著最高,為83.8%;T23制劑處理與多菌靈處理相當(dāng),且均略高于空白對照(64.4%)。木霉處理對丹參根腐病具有較好的防治作用,T23制劑、T56制劑處理的防效分別為52.3%和55.7%,二者均與多菌靈相當(dāng)。試驗(yàn)結(jié)果還表明,木霉處理對丹參略有增產(chǎn)作用,T23和T56處理的產(chǎn)量分別為8630.4kg/hm2和8425.4kg/hm2.2.4對川紅豆的影響T56制劑對川紅花出苗及幼苗生長有促進(jìn)作用,兩種劑量的出苗率均顯著高于空白對照,川紅花苗鮮重和干重均高于空白對照。T23制劑對川紅花出苗略有影響,5.0倍處理的出苗率顯著低于空白對照,但處理后的川紅花苗鮮重和干重均略有增加。木霉處理能有效控制川紅花枯萎病的發(fā)生,4種處理的防效均在50%以上。其中,T23制劑2.5倍、T56制劑5.0倍處理的防效最高,均為60.3%,其次是T23制劑5.0倍處理,防效為54.5%(見表1).3木霉的抗病作用木霉屬的某些種用于防治尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、整齊小核菌等病原菌引起的農(nóng)作物病害已有報(bào)道,但用于中藥材的土傳病害的防治研究較少。本研究利用川產(chǎn)中藥材為研究對象,采用室內(nèi)拮抗試驗(yàn)與田間試驗(yàn)相結(jié)合,明確了木霉廣泛存在于川產(chǎn)中藥材的根際土壤中,篩選的木霉菌株T23,T45,T120,T56對尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌均有較強(qiáng)的拮抗作用;T23,T56