毛果蕓香堿脂質(zhì)體滴眼劑的制備及質(zhì)量評(píng)定

毛果蕓香堿脂質(zhì)體滴眼劑的制備及質(zhì)量評(píng)定

硝酸鈉是m-膽堿的受體激動(dòng)劑，能減少瞳孔體積和眼睛壓力。它是抗高血壓藥物，歷史悠久，治療效果準(zhǔn)確。目前市場(chǎng)上的常用劑型為其水溶液,作用時(shí)間短暫,需一日多次給藥,給患者帶來(lái)很大的不便,且增加了局部和全身性的不良反應(yīng)。脂質(zhì)體技術(shù)是國(guó)內(nèi)外迅速發(fā)展起來(lái)的新型藥物傳遞技術(shù),用于眼部給藥,不但能增加藥物對(duì)角膜的穿透性,延長(zhǎng)藥物在眼部的停留時(shí)間,還能緩慢釋放藥物,顯著降低不良反應(yīng)。因此,為了增加毛果蕓香堿滴眼劑的順應(yīng)性,進(jìn)一步提高對(duì)青光眼的治療效果,降低不良反應(yīng),本研究將其制成脂質(zhì)體,考察并優(yōu)化了脂質(zhì)體的處方,并對(duì)其各種理化性質(zhì)進(jìn)行了測(cè)定。1藥品、試劑與儀器LC-10AT型高效液相儀(日本島津公司);JEM-1200EX電子透射鏡(日本電子公司);激光粒度測(cè)定儀(美國(guó)PSS公司);硝酸毛果蕓香堿(BioehrigerIngelheim制藥公司,批號(hào)101554);蛋黃卵磷脂(德國(guó)Lipoid公司,批號(hào)108006-1);膽固醇(進(jìn)口分裝,批號(hào)031220);其他試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1色譜柱、粒度流動(dòng)相:甲醇-0.1mol·L-1醋酸鈉-稀醋酸緩沖液(pH4.5)(25∶75);色譜柱:AlltimaODS-C18;粒度:5μm;流速:1mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):230nm;進(jìn)樣量:20μL。在該色譜條件下,毛果蕓香堿的保留時(shí)間為5.0min。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線方程精密稱取50mg左右的毛果蕓香堿,置25mL量瓶中,加流動(dòng)相至刻度,震搖溶解。精密移取1,2,4,6,8,10mL置于25mL量瓶中,加流動(dòng)相至刻度,搖勻,取20μL進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,以峰面積對(duì)濃度作圖,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=5567C-154234,r=0.9996。說(shuō)明在0.08～0.8g·L-1范圍內(nèi),藥物質(zhì)量濃度和峰面積線性良好。2.3包封率正交試驗(yàn)結(jié)果根據(jù)文獻(xiàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選擇對(duì)包封率影響較大的藥物/脂質(zhì)比、磷脂/膽固醇比、有機(jī)相/水相體積比3個(gè)因素,各取3個(gè)水平,選用L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn),以包封率為指標(biāo),確定最佳處方。處方因素與水平見(jiàn)表1,正交試驗(yàn)結(jié)果和直觀分析結(jié)果見(jiàn)表2。從表2中可看出,有機(jī)相和水相的體積比對(duì)包封率的影響最大,磷脂和膽固醇比例的影響最小。根據(jù)該結(jié)果確定毛果蕓香堿脂質(zhì)體的最佳處方組成為2.5%硝酸毛果蕓香堿4mL,卵磷脂0.2g,膽固醇0.07g,氯化鈉0.08g,羥苯乙酯適量,pH7.4磷酸緩沖液加至10mL。2.4蒸發(fā)、制備采用逆相蒸發(fā)法。稱取處方量的卵磷脂和膽固醇,加入20mL乙醚溶解,置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)成膜。再加入20mL乙醚使膜重新溶解,加入毛果蕓香堿水溶液,短時(shí)超聲形成穩(wěn)定的W/O型乳狀液。減壓蒸發(fā)除去乙醚,達(dá)到膠態(tài)后,滴加pH7.4的磷酸緩沖液,劇烈振搖使瓶壁上的凝膠脫落,繼續(xù)旋轉(zhuǎn)水化2h,即得。2.5游離藥物包封率測(cè)定采用超速離心法。取脂質(zhì)體適量置超速離心管中,以70000r·min-1離心2h,取上清液適當(dāng)稀釋后進(jìn)樣,按“2.1”所述的HPLC法測(cè)定游離的藥物質(zhì)量濃度,按下式計(jì)算包封率:包封率=(1-游離藥物/總藥物)×100%。各個(gè)處方所得的包封率如表2所示。利用最佳處方制得脂質(zhì)體的藥物包封率為47.42%。2.6脂質(zhì)體形態(tài)檢測(cè)脂質(zhì)體適當(dāng)稀釋后,用2%的磷鎢酸負(fù)染,自然風(fēng)干后,用透射電子顯微鏡觀察并拍照,結(jié)果如圖1所示。從圖1中可看出,所得的脂質(zhì)體形態(tài)歸整,呈球形。另取樣品適量用激光粒徑測(cè)定儀測(cè)其粒徑及分布,測(cè)得數(shù)均粒徑為69.5nm,50%小于81.8nm,90%小于168.9nm,99%小于334.8nm。2.7累積釋放百分率測(cè)定取1mL載藥脂質(zhì)體于透析袋中,放入裝有100mL生理鹽水的錐形瓶中,37℃的恒溫振蕩器中振蕩(100r·min-1),分別在10,30min,1,2,4,8h取1mL釋放液(同時(shí)補(bǔ)加1mL生理鹽水),用2.1所述的HPLC法測(cè)定藥物含量,計(jì)算累積釋放百分率。同時(shí)以相同濃度的毛果蕓香堿水溶液作平行對(duì)照,評(píng)價(jià)脂質(zhì)體的緩釋性能,結(jié)果如圖2所示。3最佳配方的確定自從1981年Smolin等首次采用脂質(zhì)體包封碘苷用于治療實(shí)驗(yàn)性單純皰疹病毒性角膜炎取得良好的結(jié)果后,脂質(zhì)體在眼部給藥系統(tǒng)中的應(yīng)用受到了廣泛的重視。作為眼部給藥載體,其具有以下優(yōu)點(diǎn):1)增加藥物在眼部的停留時(shí)間,延長(zhǎng)藥物的作用;2)緩慢釋放藥物,降低藥物的毒性;3)增加藥物對(duì)角膜的通透性,提高藥物的療效;4)制備特殊性能的脂質(zhì)體(如熱敏脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體等),具有特定的靶向作用。因此,近年來(lái)有關(guān)脂質(zhì)體眼部給藥系統(tǒng)的報(bào)道日益增多。脂質(zhì)體的制備方法很多,主要有薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、注入法、復(fù)乳法、熔融法等,其中逆相蒸發(fā)法對(duì)水溶性藥物具有較高的包封率,故本實(shí)驗(yàn)采用逆相蒸發(fā)法,最佳處方制得脂質(zhì)體的藥物包封率為47.42%,相對(duì)較高,但與80%的要求還有一定距離,需要進(jìn)一步的探索。從表2中可看出,有機(jī)相和水相的比例對(duì)毛果蕓香堿的包封率的影響最大,隨著水相比例的增加,藥物包封率的包封率也增加,這可能是與本藥的水溶性較高有關(guān)。按照該趨勢(shì),當(dāng)有機(jī)相和水相的比例為3∶1時(shí),可能包封率更高,但在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)該比例不能制得穩(wěn)定的初乳,故本實(shí)驗(yàn)最終未采用該比例作考