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文檔簡介

實驗九

葉綠體的分離與熒光觀察

【實驗?zāi)康摹?/p>

1、通過植物細胞葉綠體的分離,了解細胞器分離的原理和方法。

2、掌握熒光顯微鏡的原理及使用方法。

【實驗原理】

細胞或組織經(jīng)過破碎后制成勻漿，在等滲介質(zhì)中進行差速離心，利用細胞各組分質(zhì)量大小、形狀和密度的不同，選擇不同的離心力和離心時間，即可分離得到所需要的細胞器或大分子組分。分離葉綠體在等滲的緩沖溶液中進行,最好在0～4℃溫度下進行,要迅速分離和觀察。

熒光顯微術(shù)是利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質(zhì)進行觀測的一種技術(shù)。熒光是某些物質(zhì)在一定短波長的光(如紫外光)的照射下吸收光能進入激發(fā)態(tài)，從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時，就能在極短的時間內(nèi)放射出比照射光波長更長的光(如可見光)，若停止供能熒光現(xiàn)象立即停止。直接熒光:如葉綠素的火紅色熒光間接熒光:如葉綠體吸附吖啶橙后可發(fā)桔紅色熒光

【實驗用品】1、器材

：普通離心機、組織搗碎機、粗天平、熒光顯微鏡。研缽、燒杯,10ml刻度離心管，滴管，紗布，載片和蓋玻片等。

2、材料：新鮮菠菜。3、試劑：0.35mol/L氯化鈉溶液，0.01%吖啶橙(acridineorange)?！緦嶒灧椒ā浚ㄒ唬┤~綠體的分離1、選用生長健壯，最好是連續(xù)幾個晴天下生長的菠菜葉片洗凈后去除中脈，然后放入0～4℃冰箱或冰瓶中預(yù)冷。

2、取葉片經(jīng)濾紙吸干水后，稱取3g剪成碎片，于45mL0.35mol/L氯化鈉溶液中，置于研缽中，用手工快速研磨，

(注意不要用力過猛，也不必研磨過細)。3、研磨后將勻漿用6層新紗布過濾，濾液盛于燒杯中。

4、將5mL濾液裝入預(yù)冷過的離心管，經(jīng)天平平衡后，以1000rpm，4℃離心2min，棄去沉淀。

5、上清液再經(jīng)3000rpm，4℃離心5min，傾去上清液，沉淀即為葉綠體。6、沉淀用2mL0.35mol/L氯化鈉溶液懸浮，放入冰箱中備用。（二）葉綠體的觀察1、用滴管吸取少量葉綠體懸浮液于載玻片上，加蓋玻片后，吸水紙吸去玻片周圍多余的溶液，分別置普通光學(xué)顯微鏡和熒光顯微鏡下鏡檢觀察。

2、用滴管吸取1滴葉綠體懸浮液于載玻片上，再滴加一滴0.01%吖啶橙染液，蓋好蓋玻片后，吸水紙吸去玻片周圍多余的溶液，在熒光顯微鏡下觀察.

【實驗報告】1、繪制普通光學(xué)顯微鏡下觀察的葉綠體的形態(tài)示意圖。2、記錄熒光顯微鏡觀察的現(xiàn)象，

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