白術(shù)炮制前后有效成分變化規(guī)律研究

白術(shù)炮制前后有效成分變化規(guī)律研究

中藥白術(shù)是薔薇科植物白術(shù)的干燥根莖。神農(nóng)本草經(jīng)是貢品。具有健脾益氣、除濕利尿、止汗安營(yíng)的功效。目前白術(shù)的炮制方法眾多,主要入藥品種有生術(shù)片、焦白術(shù)、麩炒白術(shù)、土炒白術(shù)、白術(shù)炭、蒸白術(shù)等,2005年版《中國(guó)藥典》收錄了土炒白術(shù)和麩炒白術(shù)2個(gè)品種,2010年版《中國(guó)藥典》僅收錄了麩炒白術(shù)。白術(shù)根莖中主要含有蒼術(shù)酮、倍半萜類等揮發(fā)油,此外,還含有多炔醇類化合物、多種氨基酸以及維生素等。目前,對(duì)白術(shù)的炮制研究主要集中在單個(gè)化學(xué)成分含量的測(cè)定上,不足以全面地評(píng)價(jià)白術(shù)的炮制原理,本實(shí)驗(yàn)采用HPLC測(cè)定白術(shù)不同炮制品中蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的含量,并且測(cè)定其總揮發(fā)油的含量,觀察白術(shù)炮制后化學(xué)成分的變化規(guī)律,探討白術(shù)的炮制原理。1藥品、藥品與藥品日本島津LC-6A高效液相色譜儀(SPD-10A檢測(cè)器,LC-10A泵)、KQ-300VDB型數(shù)控超聲波清洗器、A4DL型自動(dòng)純水蒸餾器、BS210S型電子天平、RT-01型粉碎機(jī)。蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ等對(duì)照品均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所,純度>98%;白術(shù)飲片采購(gòu)于廣州清平中藥專業(yè)市場(chǎng),經(jīng)鑒定為菊科植物白術(shù)A.macrocephala的干燥根莖;甲醇為色譜純,其他溶劑均為分析純,水為超純水。2方法和結(jié)果2.1土炒加熱煮漂生白術(shù):取大小均勻一致的白術(shù)飲片。清炒白術(shù):取白術(shù)飲片100g,置于炒制的鐵鍋內(nèi),用中火加熱,不斷翻炒,至白術(shù)呈焦黃色,逸出香氣,取出,放涼,備用。麩炒白術(shù):先將鍋用中火燒熱,撒入麥麩10g,待冒煙時(shí),投入白術(shù)飲片100g,不斷翻炒,至白術(shù)呈焦黃色,逸出香氣,取出,篩去麥麩,放涼,備用。土炒白術(shù):先將25g伏龍肝細(xì)粉置于鍋內(nèi),用中火加熱,炒至土呈靈活狀態(tài)時(shí),投入白術(shù)飲片100g,炒至白術(shù)表面均勻掛上土粉時(shí),取出,篩去土粉,放涼,備用。蜜麩炒白術(shù):將蜜炙麩皮10g撒入鍋內(nèi),待冒煙時(shí)加入白術(shù)片100g,炒至焦黃色、逸出香氣時(shí),取出,篩去蜜炙麩皮,放涼,備用。對(duì)以上所有炮制品進(jìn)行稱重,計(jì)算其收率,按照2010年版《中國(guó)藥典》附錄Ⅸ項(xiàng)甲苯法,對(duì)白術(shù)及其炮制進(jìn)行水分含量測(cè)定,見表1。2.2白術(shù)及其產(chǎn)品的含量測(cè)定2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備;流速1.0mL·min-1;柱溫30℃;蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ檢測(cè)波長(zhǎng)220nm,白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ檢測(cè)波長(zhǎng)276nm;進(jìn)樣量10μL。流動(dòng)相系統(tǒng)(Ⅰ):甲醇-水(95∶5),用于分離蒼術(shù)酮,分離度較好。流動(dòng)相系統(tǒng)(Ⅱ):甲醇-水(70∶30),用于分離白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ及白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ,分離度較好。流動(dòng)相系統(tǒng)(Ⅲ):甲醇-水(80∶30),用于分離白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ,分離度較好。精密稱取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品1.52mg,白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品1.60mg置100mL量瓶中,精密稱取蒼術(shù)酮對(duì)照品2.02mg,白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ?qū)φ掌?.44mg,分別置于20,100mL量瓶中,加入甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得15.2mg·L-1白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、16.0mg·L-1白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的混合對(duì)照品溶液,101mg·L-1L蒼術(shù)酮對(duì)照品溶液,14.4mg·L-1白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ?qū)φ掌啡芤骸Ｈ“仔g(shù)生品及其炮制品1.0g,精密稱定,置于具塞的錐形瓶中,精密加入甲醇溶液50mL,稱定,超聲30min,放冷至室溫,加甲醇溶液補(bǔ)足失重,靜置,取上清液,過0.45μm微孔濾膜,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密吸取白術(shù)內(nèi)酯的混合對(duì)照品溶液1,2,4,6,8,10,12μL,注入液相色譜儀中,按照流動(dòng)系統(tǒng)(Ⅱ)測(cè)定白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的峰面積。同樣精密吸取蒼術(shù)酮對(duì)照溶液、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ?qū)φ掌啡芤?按照上述進(jìn)樣體積,分別采用流動(dòng)系統(tǒng)(Ⅰ)和流動(dòng)系統(tǒng)(Ⅲ)測(cè)定蒼術(shù)酮和白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的峰面積。結(jié)果白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=34289.320X-5031.72,r=0.9996,線性范圍0.0152~0.1824μg;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=38541.502X+1809.33,r=0.9997,線性范圍0.0160~0.192μg;蒼術(shù)酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=1114190.983X+5912.023,r=0.9998,線性范圍0.101~1.212μg;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=2.66×106X-913.117,r=0.9996,線性范圍0.0144~0.1728μg。分別精密吸取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的混合對(duì)照品溶液、蒼術(shù)酮對(duì)照溶液、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ?qū)φ掌啡芤?0μL,按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定峰面積,白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯ⅡRSD分別為1.39%,1.47%,0.83%,1.17%,表明精密度好。取同一批白術(shù)藥材樣品5份,按供試品溶液制備方法操作,依上述測(cè)定條件分別進(jìn)樣10μL,白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、蒼術(shù)酮峰面積的RSD分別為1.4%,1.6%,2.0%,1.2%,表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。分別取白術(shù)同一份供試品溶液,按供試品溶液制備方法進(jìn)行提取,采用上述液相色譜條件,在0,12,24,36,48h進(jìn)樣10μL測(cè)定,白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、蒼術(shù)酮峰面積的RSD分別為1.5%,1.6%,1.8%,3.7%,表明實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性良好。取白術(shù)藥材粉末1.0g,精密稱定,按照上述含量測(cè)定方法進(jìn)行含量測(cè)定,測(cè)定的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、蒼術(shù)酮含量。另外取同批藥材粉末1.0g,精密稱定,加入4種對(duì)照品適量,測(cè)定其含量。結(jié)果白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、蒼術(shù)酮的平均回收率為99.1%,98.9%,98.4%,97.3%;RSD分別為1.3%,1.4%,1.5%,2.5%。精密稱取白術(shù)炮制品1.0g,按照供試品的制備進(jìn)行提取,采用上述液相色譜條件,對(duì)白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、蒼術(shù)酮進(jìn)行含量測(cè)定(以其干重計(jì)算各指標(biāo)成分的含量),見表2。與生品比較,不同的炮制品中蒼術(shù)酮的含量均有不同程度的降低,其含量的大小為生白術(shù)>蜜麩炒白術(shù)>麩炒白術(shù)>清炒白術(shù)>土炒白術(shù),其中土炒白術(shù)的含量降低最多,質(zhì)量分?jǐn)?shù)僅為0.33%,降低了25%;白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量則顯著升高,以麩炒白術(shù)中兩者的含量最高,分別為0.069%,0.078%,與生品比較,分別升高了103%,95%;而白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的含量變化不大,與生品比較略有升高,以土炒白術(shù)的含量最高,為0.066%。2.2.2揮發(fā)油的測(cè)定分別取白術(shù)及其炮制品150g,粉碎,過20目篩,稱取100g,置于1000mL圓底燒瓶中,加水700mL,按2010年版藥典(附錄ⅩD)揮發(fā)油測(cè)定甲法測(cè)定。讀取揮發(fā)油量,計(jì)算供試品中含揮發(fā)油的百分?jǐn)?shù)。結(jié)果表明,生白術(shù)的總揮發(fā)油含量為1.180%,經(jīng)過炮制后,揮發(fā)油的含量顯著降低,其含量的大小為:生白術(shù)>蜜麩炒白術(shù)>麩炒白術(shù)>清炒白術(shù)>土炒白術(shù),土炒白術(shù)的含量為0.642%,與生品比較降低了45.6%,清炒白術(shù)含量為0.693%,麩炒白術(shù)為0.693%,蜜麩炒白術(shù)為0.742%,見表2。3不同炮最佳制劑中主要理化指標(biāo)的變化本實(shí)驗(yàn)采用HPLC測(cè)定了白術(shù)生品及其炮制品中蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量,同時(shí)測(cè)定了其總揮發(fā)油的含量,觀察白術(shù)炮制前后化學(xué)成分的變化,為白術(shù)的炮制工藝及炮制原理提供一定的依據(jù)。白術(shù)經(jīng)炮制后蒼術(shù)酮的含量顯著降低,而白術(shù)內(nèi)酯類的含量則有不同程度的升高,可能由于蒼術(shù)酮熔點(diǎn)低,性質(zhì)不穩(wěn)定,遇熱、見光易轉(zhuǎn)化為白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ。本實(shí)驗(yàn)曾取蒼術(shù)酮純品,于60℃恒溫烘箱中放置1h后,結(jié)果發(fā)現(xiàn),樣品中含有白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ等成分,與文獻(xiàn)報(bào)道一致。綜上所述,初步推斷白術(shù)的炮制原理為蒼術(shù)酮在一定溫度下,暴露在空氣中可轉(zhuǎn)化為白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ等成分,使蒼術(shù)酮的含量降低,燥性緩和,白術(shù)內(nèi)酯類含量增加。與生