人工結(jié)合抗原制備

人工結(jié)合抗原制備

20130805抗原——是指能夠刺激機體產(chǎn)生（特異性）免疫應答，并能與免疫應答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細胞在體內(nèi)外結(jié)合，發(fā)生免疫效應（特異性反應）的物質(zhì)?？乖幕咎匦裕孩僬T導免疫應答的能力，即免疫原性。②與免疫應答的產(chǎn)物發(fā)生反應，即抗原性（免疫反應性）。免疫原——具有免疫原性的物質(zhì)

免疫原性的化學基礎(chǔ)化學組成

分子量

化學結(jié)構(gòu)

大分子蛋白、多糖等﹥10000具有免疫原性；4000﹤免疫原﹤10000呈弱免疫原性

；4000﹤一般不具有免疫原性。一般而言，分子結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)愈復雜的物質(zhì)免疫原性愈強人工抗原人工抗原：用化學合成法或基因重組法制備含有已知化學結(jié)構(gòu)決定簇的抗原，稱之為人工抗原。①人工結(jié)合抗原：將無免疫原性的簡單化學基團與蛋白質(zhì)載體偶聯(lián)，或?qū)o免疫原性的有機分子如二硝基苯（DNP）或三硝基苯（TNP）與蛋白質(zhì)載體結(jié)合，形成載體-半抗原結(jié)合物，均屬人工結(jié)合抗原。②人工合成抗原：用化學方法將活化氨基酸聚合，使之成為合成多肽。只由一種氨基酸形成的聚合體稱為同聚多肽，如由左旋賴氨酸形成的共同聚多肽（PLL）。③基因工程抗原：將編碼免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并與適當載體（如細菌?；虿《荆〥NA分子相結(jié)合，然后引入受體細胞中（如原核細胞的大腸桿菌或真核細胞酵母菌及哺乳類動物細胞）使之表達，即能獲得免疫原性之融合蛋白，經(jīng)純化后可做為疫苗，此即基因工程疫苗。人工結(jié)合抗原半抗原：能與對應抗體結(jié)合出現(xiàn)抗原-抗體反應、又不能單獨激發(fā)人或動物體產(chǎn)生抗體的抗原。它只有反應原性，不具免疫原性，又稱不完全抗原。一些比一般半抗原分子量小，但有特異結(jié)構(gòu)的化學活性基團物質(zhì)（如青霉素、磺胺劑等），稱為簡單半抗原。載體蛋白：制作人工結(jié)合抗原時與半抗原進行偶聯(lián)的具有免疫原性的生物大分子，主要為大分子的蛋白質(zhì)。如：牛血清白蛋白(BSA)。載體蛋白半抗原偶聯(lián)橋

半抗原選擇合適的多肽序列，蛋白質(zhì)的抗原決定簇一般由6-12個氨基酸構(gòu)成，呈連續(xù)性或者非連續(xù)性序列。抗原決定簇大部分為親水性基團，暴露在外側(cè)，抗原決定簇柔韌性比較高。制備性抗原地多肽有效長度一般是10-20個氨基；334Da﹤

半抗原的分子量﹤374Da制備的單克隆抗體具有很高的親和系數(shù)。

﹤300Da產(chǎn)生具有良好靈敏度和特異性單克隆抗體的可能性下降。確定抗原性區(qū)域親水性、表露性、

柔韌性確定多肽的長度半抗原人工抗原合成常用的載體

載體表面應首先應具有化學活性基團。

載體應具備一定的容量，可以偶聯(lián)足夠的分子。

載體應該是惰性的，不應干擾偶聯(lián)分子的功能。

載體應具有足夠的穩(wěn)定性，且應該是廉價易得的。

牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、鑰孔血藍蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚賴氨酸(PLL)等是常用的載體蛋白。載體的特點蛋白偶聯(lián)方法

一般是由半抗原上的活性基團決定偶聯(lián)合成的方法。

所有的偶聯(lián)方法都應該是通過羧基或氨基端殘基將多肽耦聯(lián)到載體蛋白上。緩沖液成分及其純度和離子強度、PH偶聯(lián)劑的有效濃度偶聯(lián)物的濃度偶聯(lián)劑相對量偶聯(lián)物相對比例半抗原的穩(wěn)定性、可溶性、理化特性偶聯(lián)效果通常是在條件溫和的水溶液中將半抗原與載體蛋白共價結(jié)合，不宜在高溫、低溫、強堿、強酸條件下進行。蛋白偶聯(lián)方法分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶聯(lián)①混合酸酐法（mixedanhydridemethod），又稱氯甲酸異丁酯法

正丁胺

-COOH-中間體+NH3+