從寵物農(nóng)場(chǎng)到哈佛的小鼠

從寵物農(nóng)場(chǎng)到哈佛的小鼠

1小鼠基因組計(jì)劃的發(fā)展和應(yīng)用在分類(lèi)上，老鼠屬于節(jié)肢動(dòng)物門(mén)、幼齒科和甲狀腦。目前生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域通常所研究的是小家鼠(musculus),是和人類(lèi)共居的一類(lèi)小型嚙齒動(dòng)物,在地球上分布廣泛,種類(lèi)繁多。在被引進(jìn)實(shí)驗(yàn)室以前,一般認(rèn)為中國(guó)和日本早在三四年前就建立了一些當(dāng)作寵物的小鼠品系。然而一直到1902年,哈佛大學(xué)的Castle才在當(dāng)時(shí)孟德?tīng)栠z傳學(xué)研究的影響下開(kāi)始了小鼠遺傳學(xué)研究,并在其學(xué)生的幫助下對(duì)小鼠的遺傳和基因變化進(jìn)行系統(tǒng)的分析。1909年Castle實(shí)驗(yàn)室的Little得到了第一個(gè)近交系小鼠——DBA品系后,隨后在ColdSpringHarborLaboratory和TheJacksonLaboratory工作中陸續(xù)得到了C57BL/6、C3H、CBA和BALB/c等多種近交系小鼠,這些近交系構(gòu)成了目前世界上使用最廣泛的幾種品系。在這一百年里人們已經(jīng)建立了近400多個(gè)近交系,6000多個(gè)突變品系。小鼠已成為了最適于基因組改造的模式動(dòng)物。1982年,Palmiter和Brinster首先制造了攜帶外源基因的新的小鼠品系——“轉(zhuǎn)基因小鼠”。第一個(gè)轉(zhuǎn)基因小鼠品系攜帶了可表達(dá)的大鼠生長(zhǎng)激素的基因片斷,過(guò)度的生長(zhǎng)激素導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因小鼠的體型增大,第一次在整體動(dòng)物水平證明了生長(zhǎng)激素的功能。在Evans、Smithies和Capecchi等實(shí)驗(yàn)室的共同努力下,通過(guò)ES細(xì)胞內(nèi)DNA同源重組的方法,科學(xué)家于1987年得到了第一只基因剔除小鼠。基因剔除提供了研究在整體動(dòng)物水平研究基因功能的“金標(biāo)準(zhǔn)”:即分析特定基因缺失后的功能障礙來(lái)推斷基因的功能。1998年,在Dolly羊出生一年后,克隆小鼠也在夏威夷的實(shí)驗(yàn)室中誕生。由于在1990年啟動(dòng)人類(lèi)基因組計(jì)劃時(shí)小鼠就被列為五種核心模式生物之一,所以小鼠基因組計(jì)劃是最早啟動(dòng)的非人基因組計(jì)劃。到了2002年,小鼠C57BL/6j近交系基因組的研究相繼取得了成果:5月小鼠的16號(hào)染色體基因圖譜被首先被繪制出來(lái),并發(fā)現(xiàn)其與人類(lèi)的21號(hào)染色體是高度同源的;8月小鼠的全基因組圖譜完成;12月小鼠基因組測(cè)序基本完成。至此小鼠的研究進(jìn)入了一個(gè)新階段。和小鼠的分子生物學(xué)研究同步的是小鼠的生理生化數(shù)據(jù)的積累。各種專(zhuān)門(mén)用于小鼠的代謝、心血管、呼吸、骨骼、血液、行為等生理功能檢測(cè)儀器設(shè)備和方法在過(guò)去幾十年中得到的迅速發(fā)展,比較醫(yī)學(xué)的研究使得我們可以將小鼠的特定生理生化功能和人類(lèi)進(jìn)行比較分析。由于不同的小鼠近交系在許多上述指標(biāo)上有明顯的差異,因此,通過(guò)這些近交系基因組的多態(tài)性的連鎖分析,可以建立特定功能表型在基因組上的定位,發(fā)現(xiàn)和確定表型與基因型之間的關(guān)系。從最早的簡(jiǎn)單分析不同近交系的分子多態(tài)性,進(jìn)而采用微衛(wèi)星標(biāo)記,最新發(fā)展到單核苷酸多態(tài)性,在基因組中將一個(gè)特定功能或表型定位到1kb將不再是夢(mèng)想[7~9]。近年來(lái),在基因組計(jì)劃完成的基礎(chǔ)上,通過(guò)化學(xué)誘變、DNA“基因陷阱”或轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座作用建立新的突變小鼠品系成為一種時(shí)尚,這種以新突變品系的病理表型為出發(fā)點(diǎn),然后通過(guò)突變的染色體定位最終克隆突變基因的方法已經(jīng)大大推動(dòng)了疾病模型的研究,并在短期內(nèi)提供了大量的新的小鼠品系[10~12]。經(jīng)典的小鼠遺傳學(xué)家也找到了新的思路,他們正在建立上百種通過(guò)現(xiàn)有近交系雜交而形成的新的重組近交系。通過(guò)對(duì)這些新的近交系與母本近交系在生理生化表型和基因型的連鎖比較,我們有望對(duì)一些復(fù)雜性狀(如代謝過(guò)程)的調(diào)控作深入的遺傳學(xué)分析,從而發(fā)現(xiàn)復(fù)雜疾病(包括糖尿病/肥胖癥、高血壓、免疫失調(diào)、及神經(jīng)性疾病等)的發(fā)病機(jī)理機(jī)制。從2005年起,大規(guī)模開(kāi)展基因剔除的研究計(jì)劃分別在美國(guó)、歐盟和加拿大實(shí)施,第一期總投資達(dá)1億多美元。該計(jì)劃的最終目標(biāo)是要將小鼠的3萬(wàn)多個(gè)基因逐一進(jìn)行基因剔除,建立基因剔除小鼠品系,從而分析基因的功能?？梢灶A(yù)見(jiàn),小鼠的突變品系,將在不遠(yuǎn)的將來(lái)達(dá)到4到5萬(wàn)個(gè)品系。2小鼠的生物學(xué)特性小鼠作為模式生物相對(duì)于其他物種有什么優(yōu)勢(shì)?首先,從進(jìn)化的角度上來(lái)看小鼠作為哺乳動(dòng)物的代表有其不可動(dòng)搖的地位。除了小鼠以外的四種模式動(dòng)物都至少在2.7億年前就在進(jìn)化上與人類(lèi)走到了不同的分支,而小鼠在6千萬(wàn)年前還和人類(lèi)共同擁有一個(gè)祖先。在2002年小鼠基因組的測(cè)序工作初步完成時(shí),研究者們分析了96%小鼠基因組序列。在這其中有99%的基因能在人的基因組序列中找到同源序列,證實(shí)了小鼠與人類(lèi)在基因水平上的高度同源。同樣,小鼠的生理生化指標(biāo)及其調(diào)控機(jī)制和人類(lèi)相同或相似,因此小鼠的研究成果就有很大的可能性是可以推演到人類(lèi),所以對(duì)小鼠進(jìn)行研究的有很大的應(yīng)用價(jià)值。其次,和狗、猴等大型哺乳動(dòng)物相比,小鼠的繁殖能力強(qiáng),生殖周期短。通常實(shí)驗(yàn)用的近交系小鼠一胎生育5~10只幼鼠,而遠(yuǎn)交群的小鼠的生殖能力更強(qiáng)。這些幼鼠在10周之后就能達(dá)到性成熟的狀態(tài),開(kāi)始繁殖下一代。同時(shí)小鼠沒(méi)有親子相殘的習(xí)性,這樣生產(chǎn)后的雌鼠和幼鼠仍可以和雄鼠同籠。這樣不但確保了幼鼠的成活率,同時(shí)也能提高交配的頻率,確保了繁殖的高效率。小鼠飼養(yǎng)也相對(duì)簡(jiǎn)單,由于小鼠體積小(通常成年鼠的體重在20~40g之間),所以可以在有限的空間內(nèi)進(jìn)行大規(guī)模飼養(yǎng),因而十分利于進(jìn)行大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)。再次,小鼠交配時(shí)會(huì)形成陰栓,這有助于判斷交配的時(shí)間,對(duì)研究中判斷不同發(fā)育階段十分重要。因?yàn)槠渌麆?dòng)物的受精時(shí)間通常要通過(guò)觀察交配行為來(lái)確定,而小鼠的這種特性就使研究人員不必時(shí)刻注意實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的行為,為工作提供了便利。小鼠的大多數(shù)品系比較溫順,容易抓取和進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。最后,由于小鼠的這些特點(diǎn)使其在世界范圍內(nèi)廣泛使用,而且形成了各種實(shí)驗(yàn)用近交系,使用有基本一致遺傳背景的近交系小鼠所做出的實(shí)驗(yàn)成果容易在不同的實(shí)驗(yàn)室重復(fù),這就使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更容易被接受。這也是小鼠作為模式生物的主要優(yōu)勢(shì)之一。3小鼠細(xì)胞移植的功能小鼠在生命科學(xué)的研究中有著諸多用途。根據(jù)其對(duì)小鼠的影響,常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用可以分為三大類(lèi):第一類(lèi)是只對(duì)小鼠進(jìn)行觀察和檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用;第二類(lèi)是不改變小鼠基因,但是對(duì)小鼠施加了外界影響的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用;第三類(lèi)是改變小鼠基因組的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。第一大類(lèi)的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中使用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)是相對(duì)較為常規(guī)的。該類(lèi)包括了小鼠的解剖、形態(tài)觀察和組織學(xué)分析、基因鑒定(genometyping)、各種免疫印跡(Western,Northern,SouthernBlot)和RNA檢驗(yàn)方法(RT-PCR)等微觀實(shí)驗(yàn)。這些實(shí)驗(yàn)技術(shù)不僅僅適用于小鼠,在其他大多數(shù)生命科學(xué)的研究中都被廣泛使用著,因此本文不作詳細(xì)介紹。但是由于小鼠有其自身的特性,所以這一類(lèi)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用有其自身獨(dú)特的價(jià)值。例如小鼠的近交系通常都是高癌系,可以用于進(jìn)行自發(fā)癌癥的研究;而小鼠的生活周期短,也便于進(jìn)行老化研究。這類(lèi)實(shí)驗(yàn)由于都是自然發(fā)生的表型,所以其結(jié)果的可信度較高。只是進(jìn)行分析研究時(shí)較為復(fù)雜,并需要大量的小鼠以獲得足夠的樣本。這恰恰就是小鼠相對(duì)于其他哺乳動(dòng)物的優(yōu)勢(shì)所在。第二大類(lèi)的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用根據(jù)對(duì)小鼠施加的外界影響分為兩種,一種是非生物源性的,另一種是生物源性的。非生物源性的外界影響包括了輻射、毒素等各種環(huán)境因素以及各種化學(xué)合成藥品。在這些實(shí)驗(yàn)當(dāng)中,將小鼠暴露在特定環(huán)境中。然后通過(guò)小鼠對(duì)這些刺激的反應(yīng),可以研究動(dòng)物如何抵抗不利環(huán)境的作用,及不利環(huán)境下動(dòng)物受到什么傷害。這些結(jié)果將有助于提高人類(lèi)自身對(duì)不利環(huán)境的抵抗,同時(shí)也可以利用小鼠的反應(yīng)將其作為環(huán)境檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。另一方面的應(yīng)用是新的藥物及治療方案的安全性和有效性測(cè)試,這類(lèi)生物源性的外界刺激包括了蛋白質(zhì)、激素等試劑的注射以及細(xì)胞、組織移植等。注射各種生物制劑的目的和注射化學(xué)合成藥品的目的相仿,都是希望通過(guò)小鼠來(lái)研究這些制劑的作用效果。而細(xì)胞或者組織的移植則在醫(yī)學(xué)上有較為重要的意義。小鼠便于獲取、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好、與人類(lèi)的反應(yīng)性相似等特性使其成為一種較好的藥物和治療方案的測(cè)試用動(dòng)物。選擇小鼠來(lái)做移植實(shí)驗(yàn)有許多優(yōu)勢(shì)。近交系小鼠中由于個(gè)體之間的遺傳背景基本相同,所以同品系的異體移植的組織排異反應(yīng)十分輕微,為研究這類(lèi)技術(shù)和需要使用這項(xiàng)技術(shù)的研究提供了便利。而且小鼠中免疫缺陷的品系,如裸鼠等對(duì)異體移植物無(wú)排異反應(yīng),所以經(jīng)常用來(lái)做人類(lèi)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)模型的載體。由于實(shí)驗(yàn)用小鼠是小家鼠來(lái)源,具有與人類(lèi)基本相近一致的居住環(huán)境適應(yīng)性,所以易感病原體在很大程度上和人類(lèi)相同,因而小鼠對(duì)許多種類(lèi)傳染病的研究也非常重要。第三大類(lèi)是經(jīng)典的小鼠突變模型大多是通過(guò)對(duì)自發(fā)突變的篩選與培育得到的,但是小鼠發(fā)生自然突變的概率大約只有20萬(wàn)分之一,所以期待運(yùn)用自然突變進(jìn)行飽和突變篩選完全不可能實(shí)現(xiàn)。在眾多科學(xué)家的努力下,小鼠基因組改造技術(shù)已經(jīng)非常成熟,成為功能基因組研究的最主要手段之一。證明一個(gè)特定基因的在某個(gè)器官或發(fā)育過(guò)程中的功能不外乎要給出三個(gè)證據(jù):首先,要確證該基因在此器官或發(fā)育過(guò)程中特異性表達(dá);其次,證明運(yùn)用分子生物學(xué)手段“剔除”或“敲落”該基因?qū)е缕鞴俟δ芑虬l(fā)育調(diào)控的異常;最后,改變?cè)摶虻谋磉_(dá)特異性也可能導(dǎo)致器官功能或發(fā)育調(diào)控的異常。前一個(gè)問(wèn)題涉及RNA和蛋白水平的分析,而后兩個(gè)證據(jù)則主要依賴(lài)于基因剔除和轉(zhuǎn)基因的手段。運(yùn)用基因組改造技術(shù)建立起來(lái)的疾病模型,不僅僅對(duì)生物醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)研究至關(guān)重要,而且對(duì)發(fā)現(xiàn)新的藥物靶標(biāo)、新藥篩選等有重大意義。目前基因組改造技術(shù)又可以分為三類(lèi):一是通過(guò)物理或化學(xué)方法在小鼠生殖細(xì)胞DNA中隨機(jī)誘導(dǎo)單個(gè)或多個(gè)堿基的突變形成,然后通過(guò)與野生型小鼠交配,將突變傳給后代;二是通過(guò)ES細(xì)胞或受精卵原核顯微注射,在基因組中隨機(jī)插入特定的堿基序列,轉(zhuǎn)基因技術(shù)、“基因陷阱”技術(shù)及轉(zhuǎn)座子技術(shù)可以歸到此類(lèi);三是在基因組的特定位置插入或者刪除特定的堿基序列,即基因定位突變,基因剔除(knock-out)和基因敲入(knock-in)屬于此類(lèi)。第一類(lèi)技術(shù)中又可以分為輻射誘變和用化學(xué)藥品誘變兩種。這兩種方法在制造突變體上的應(yīng)用都已經(jīng)有很久的歷史,果蠅突變體的篩選最初就是使用X射線(xiàn)誘變的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)的。一般來(lái)說(shuō),小鼠配子基因組中輻射誘變的概率是2000到8000細(xì)胞中有一個(gè)基因會(huì)發(fā)生突變,常規(guī)化學(xué)藥品誘變的概率與輻射誘變概率差不多。但由于小鼠的生殖能力并沒(méi)有果蠅那么強(qiáng),所以用輻射誘變和如苯丁酸氮芥(chlorambucil)等常規(guī)化學(xué)藥品的效率相對(duì)于小鼠來(lái)說(shuō)是比較低的,也較難實(shí)現(xiàn)。目前小鼠誘變研究中主要使用突變劑是Ethylnitrosourea(ENU)。ENU主要誘導(dǎo)產(chǎn)生點(diǎn)突變,誘導(dǎo)效率為每700個(gè)后代中就有1個(gè)基因發(fā)生突變。由于ENU的高效性、突變隨機(jī)性好、方法相對(duì)簡(jiǎn)單,加上人類(lèi)遺傳疾病大多由點(diǎn)突變?cè)斐?因而目前ENU誘變?nèi)允墙⒓膊∧Ｐ偷囊粋€(gè)重要途徑,受到許多實(shí)驗(yàn)室青睞。但是,這一方法獲得的突變小鼠由于突變位點(diǎn)沒(méi)有標(biāo)志,后期的突變基因染色體定位需要花費(fèi)較多時(shí)間。第二類(lèi)技術(shù)是利用ES細(xì)胞或受精卵有絲分裂時(shí)會(huì)發(fā)生外源DNA整合進(jìn)基因組的現(xiàn)象導(dǎo)入外源基因或DNA片段。當(dāng)有意識(shí)將表達(dá)載體插入基因組時(shí),外源基因會(huì)在特定啟動(dòng)子的作用下在特定組織或器官表達(dá),我們稱(chēng)此外源基因?yàn)椤稗D(zhuǎn)基因”。由于“轉(zhuǎn)基因”是隨機(jī)插入基因組,有5%~10%的機(jī)會(huì)“轉(zhuǎn)基因”將插入功能基因結(jié)構(gòu)區(qū),導(dǎo)致基因突變。借助相似思路,基因陷阱(genetrap)就是將一個(gè)不完整的表達(dá)載體插入基因組,和基因組結(jié)構(gòu)整合形成新的基因表達(dá)單元?；蛳葳灏ㄔ鰪?qiáng)子陷阱(enhancertrap)、啟動(dòng)子陷阱(promotertrap)和基因陷阱等,通過(guò)這些方法插入的報(bào)告基因(如β-半乳糖苷酶LacZ,綠色熒光蛋白GFP等)的表達(dá)情況,可以提供增強(qiáng)子、啟動(dòng)子和基因的相關(guān)表達(dá)信息。同時(shí),插入片段破壞基因產(chǎn)生的異常表型,又反映了該基因的功能。由于這種方法在突變位點(diǎn)引進(jìn)了特定DNA分子標(biāo)志,所以突變基因可以通過(guò)簡(jiǎn)單的分子生物學(xué)分析迅速找到。但是,由于DNA分子體積大,在基因組上的插入有“熱點(diǎn)”和“冷點(diǎn)”,一般認(rèn)為基因陷阱不能用于飽和誘變[11~12]。第三類(lèi)技術(shù)利用了ES細(xì)胞內(nèi)DNA的同源重組過(guò)程,導(dǎo)入的DNA片斷上含有與基因組某段序列相同的堿基序列。這些序列會(huì)與基因組上的相同序列發(fā)生同源重組后,結(jié)果導(dǎo)致兩段DNA同源臂之間的序列發(fā)生了置換。雖然同源重組的概率只有百萬(wàn)分之一,但如果在置換區(qū)帶上可篩選標(biāo)記基因(如新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶neo,胸苷激酶TK等),我們可以特異性篩選重組取代原有基因序列的細(xì)胞克隆,實(shí)驗(yàn)的結(jié)果通?？梢垣@得幾乎100%的基因突變后代。這種方法的實(shí)際應(yīng)用有兩種形式:一是序列置換導(dǎo)致基因的失活,這被稱(chēng)為基因打靶或是基因剔除;二是取代的序列中只引進(jìn)特定突變(特別是點(diǎn)突變),這被稱(chēng)為基因敲入?；蚯贸悄壳把芯磕撤N基因功能最直接的方法,到2002年6月已報(bào)道的基因敲除小鼠品系已達(dá)到了3000種以上。在進(jìn)化過(guò)程中,同一基因常常在不同的發(fā)育階段及不同的器官發(fā)揮不同的功能,這也是人類(lèi)僅有3萬(wàn)個(gè)基因但能控制高度有序的復(fù)雜結(jié)構(gòu)模式及穩(wěn)態(tài)的基礎(chǔ)。另一方面,腫瘤等復(fù)雜疾病的主要發(fā)病機(jī)制是發(fā)生于不同組織與器官的體細(xì)胞突變。因此,要真正闡明基因在特定組織的功能,真實(shí)模擬特定腫瘤突變,建立合適的疾病模型,必須采用組織特異性基因剔除小鼠的方法。目前建立組織特異性基因剔除小鼠的方法是首先通過(guò)同源重組建立基因“flox”小鼠和通過(guò)受精卵原核注射建立組織特異性表達(dá)Cre重組酶的轉(zhuǎn)基因小鼠?！癴lox”小鼠基因組中靶基因的編碼區(qū)兩端通過(guò)同源重組插入了可被Cre重組酶識(shí)別的LoxP位點(diǎn)。在沒(méi)有Cre表達(dá)時(shí),該基因的表達(dá)和功能不受影響。但是,在表達(dá)Cre的細(xì)胞內(nèi),Cre將刪除兩個(gè)LoxP位點(diǎn)之間的序列,從而導(dǎo)致該基因在此細(xì)胞內(nèi)失活。所以,通過(guò)“flox”的小鼠與組織特異性表達(dá)Cre轉(zhuǎn)基因小鼠的交配,可以得到在特定組織剔除該基因的小鼠模型?；蚬δ艿难芯靠梢栽谌齻€(gè)層次展開(kāi),分子層次主要從結(jié)構(gòu)域和位點(diǎn)分析到分子間相互作用,細(xì)胞層次研究探討細(xì)胞分化、增殖、凋亡等行為的機(jī)制。但是,對(duì)于復(fù)雜生物,特別是包括人類(lèi)在內(nèi)的脊椎動(dòng)物,整體動(dòng)物研究層次才能徹底和全面的闡明基因的生理功能及其在疾病發(fā)生過(guò)程中的作用。以血糖的穩(wěn)態(tài)調(diào)控為例,多個(gè)器官和基因的相互作用只有在整體水平才能得以說(shuō)明。胰島素、瘦素和GLP1等關(guān)鍵內(nèi)分泌分子的靶器官包括肝臟、肌肉、大腦等多個(gè)組織,其分泌和代謝過(guò)程也涉及多器官和細(xì)胞類(lèi)型,因此其作用的效果只有在整體動(dòng)物水平才能得到系統(tǒng)說(shuō)明。通過(guò)在特定組織剔除特定基因,分析其對(duì)整體動(dòng)物生理生化過(guò)程的影響,是最準(zhǔn)確、也是最明確的基因功能研究手段。目前,只有小鼠具有成熟的基因剔除技術(shù),充分反映了小鼠在基因改造領(lǐng)域的得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)。4小鼠基因組改造技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀由于種種原因,我國(guó)小鼠基因組改造相關(guān)工作研究起步晚、規(guī)模小,制約了我國(guó)功能基因組研究,相關(guān)疾病的動(dòng)物模型研究也因此成為致病機(jī)理研究和生物醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)的瓶頸。但近年來(lái),在國(guó)家科技部、國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)、中國(guó)科學(xué)院及有關(guān)地方政府的資助下,我國(guó)科技工作者利用多種模式生物開(kāi)展了生物技術(shù)、基因識(shí)別、基因表達(dá)譜、基因功能、個(gè)體發(fā)育、疾病發(fā)病機(jī)制及藥理、毒理方面的研究,取得了一系列重要科研成果。2001年,科技部啟動(dòng)了“十五”攻關(guān)重點(diǎn)項(xiàng)目“國(guó)家遺傳工程小鼠資源庫(kù)的建立”,該項(xiàng)目于2005年順利結(jié)題。資源庫(kù)建立了完善的轉(zhuǎn)基因、基因剔除和化學(xué)誘變等小鼠基因組改造技術(shù)服務(wù)平臺(tái),三年多來(lái)已為國(guó)內(nèi)外研發(fā)機(jī)構(gòu)建立了遺傳工程小鼠品系100余種,其中基因剔除品系30余種,這些小鼠品系中包括糖