高效液相色譜法測定敗醬草中齊墩果酸和熊果酸

高效液相色譜法測定敗醬草中齊墩果酸和熊果酸

如今，雜草是一種多才多藝的草本植物。它被記錄在《神農(nóng)本草經(jīng)》中。它的味道又熱又苦。具有清熱解毒、抗瘀、排膿等功效。臨床應(yīng)用廣泛，質(zhì)量差異大。為控制藥材質(zhì)量,提高臨床療效,本文采用反相高效液相色譜(HPLC)法對不同產(chǎn)地?cái)♂u草中齊墩果酸、熊果酸的含量進(jìn)行測定,為評價(jià)藥材質(zhì)量、合理選用藥材提供參考。1材料和機(jī)器1.1試劑與標(biāo)準(zhǔn)品齊墩果酸對照品(中國藥品生物制品檢定研究院,批號:110709-201206);熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定研究院,批號:110742-201220);乙腈(山東禹王試液有限公司禹成化工廠,色譜純,批號:201209060);甲醇(上海振興化工一廠,色譜純,批號:201213104);敗醬草藥材自購,其余試劑均為分析純。1.2檢測色譜注射系統(tǒng)超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司);Agilent1200高效液相色譜儀(Agilent1200色譜泵,Agilent1200自動進(jìn)樣器紫外檢測器,Agilent1200色譜工作站);AL104/01電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);TG16-WS臺式高速離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)。2方法和結(jié)果2.1色譜條件的選擇色譜柱為HypersilODS2C18色譜柱;齊墩果酸、熊果酸的色譜條件為:以乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨溶液(67∶12∶21)為流動相,檢測波長為215nm,流速為1mL/min,柱溫為室溫。2.2對照品溶液的制備精密稱定齊墩果酸、熊果酸對照品適量,均置于10mL量瓶中,加流動相溶解并定容,即得混合對照品,其中齊墩果酸的濃度為10.6μg/L,熊果酸的濃度為10.2μg/L,備用。2.3超聲提取法取敗醬草原藥材,烘干,打成細(xì)粉(過20目篩),取粉末1.0g,精密稱定,置于100mL具塞的錐形瓶中,加入甲醇30mL超聲(500W,40Hz)提取45min,放冷,補(bǔ)足減失的重量,靜置10min后濾過。精密量取續(xù)濾液1mL,置于10mL量瓶中,用甲醇適量定容,即得。2.4方法研究2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定精密吸取混合對照品溶液0.05、0.5、1、2、5mL置于10mL量瓶中,定容,吸取對照品溶液20μL,測定,以濃度(X)與峰面積(Y)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線,經(jīng)回歸得齊墩果酸曲線:Y1=1.8684X+6.3298,r=0.9993;熊果酸曲線:Y2=1.9231X+7.6523,r=0.9996。結(jié)果表明,齊墩果酸在0.053~10.6μg/L、熊果酸在0.051~10.2μg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。2.4.2峰面積峰面積測定取供試品溶液,在色譜條件下,連續(xù)進(jìn)樣5次,每次進(jìn)樣20μL,測定齊墩果酸、熊果酸的峰面積。結(jié)果顯示,齊墩果酸的RSD值為1.98%,熊果酸的RSD值為2.16%,表明該方法的精密度良好。2.4.3高效液相色譜法取供試品溶液,在色譜條件下,每隔2h精密吸取20μL注入高效液相色譜儀,連續(xù)進(jìn)樣7次,測定峰面積。結(jié)果顯示:齊墩果酸的RSD值為1.14%,熊果酸的RSD值為1.52%,表明供試品溶液中齊墩果酸、熊果酸在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.4.4高效液相色譜法取同一批樣品,按照“2.3”項(xiàng)下方法平行制備5份供試品溶液,精密吸取20μL注入高效液相色譜儀,按照色譜條件測定齊墩果酸、熊果酸的峰面積,計(jì)算含量。結(jié)果顯示,齊墩果酸的RSD值為1.42%,熊果酸的RSD值為1.19%,表明采用該方法測定敗醬草中齊墩果酸、熊果酸的含量,重現(xiàn)性良好。2.4.5加樣回收率試驗(yàn)精密稱取同一批已知含量的敗醬草藥材粉末(過20目篩)樣品6份,每份為0.2g,按比例加入齊墩果酸、熊果酸對照品,按照“2.3”項(xiàng)下方法制備溶液,溶液制備好之后,分別精密吸取20μL注入高效液相色譜儀,按照色譜條件測定齊墩果酸、熊果酸的峰面積,計(jì)算回收率。結(jié)果顯示:齊墩果酸的回收率為99.6%,RSD值為2.26%,熊果酸的回收率為99.1%,RSD值為2.11%,表明該方法的回收率符合含量測定基本要求。2.4.6不同產(chǎn)地?cái)♂u草樣品含量測定按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按照色譜條件測定6個(gè)不同產(chǎn)地?cái)♂u草樣品中齊墩果酸、熊果酸的峰面積,按照回歸方程,計(jì)算含量,結(jié)果見表1。3不同產(chǎn)地?cái)♂u草含量測定條件的確定已有文獻(xiàn)報(bào)道,敗醬草中含有白花敗醬甙、莫羅忍冬甙、番木鱉甙等化學(xué)成分,具有鎮(zhèn)靜、保肝利膽、抗病原微生物、抗癌等作用,臨床主要與其它中藥材合理配伍,用于治療肺癰、腸癰、產(chǎn)后血、腹中刺痛等疾病。因市場對敗醬草需求的日益增大,原有的資源已不能滿足臨床需求,為解決藥材資源緊缺的狀況,人工種植敗醬草的規(guī)模逐步增大,但因各地的種源、氣候、管理等不同,導(dǎo)致不同產(chǎn)地?cái)♂u草的質(zhì)量差異比較大。齊墩果酸、熊果酸屬三萜皂苷類化合物,其吸收位于紫外吸收的末端,故吸收波長采用215nm,同時(shí)