第十章巴比妥類藥物的分析

TianjinMedicalUniversity天津醫(yī)科大學藥學院《藥物分析》第十章——巴比妥類藥物的分析世界衛(wèi)生組織：27%的人有睡眠問題中國睡眠研究會：中國成年人失眠發(fā)生率為38.2%

2013世界睡眠日“關(guān)注睡眠、關(guān)愛心臟”催眠藥：能促進與維持近似生理睡眠的藥物鎮(zhèn)靜藥：能緩解煩躁不安，使之安靜的藥物

鎮(zhèn)靜催眠藥（sedative-hypnoticdrugs）概述抗焦慮藥：能夠治療焦慮和焦慮癥的藥物鎮(zhèn)靜催眠藥特點鎮(zhèn)靜催眠抗驚厥抗癲癇麻醉呼吸肌麻痹劑量抗焦慮作用1.

苯二氮卓類2.

巴比妥類3.

其它類安全性較高，即使大劑量也不會出現(xiàn)中樞麻痹與苯二卓類相比安全性較差較少應(yīng)用鎮(zhèn)靜催眠藥分類4.

新型鎮(zhèn)靜催眠藥

(benzodiazepines、BZ)

中效類：艾司唑侖、阿普唑侖短效類：三唑侖、奧沙西泮長效類：地西泮、氟西泮苯二氮卓類丁螺環(huán)酮：新型的抗焦慮藥，具有顯著的抗焦慮作用，降低5-HT神經(jīng)系統(tǒng)的功能有關(guān)。褪黑素：（N-乙?；?5-甲氧基色胺）有誘發(fā)睡眠作用，可調(diào)節(jié)睡眠周期。治療生理節(jié)律紊亂引起的睡眠節(jié)律障礙，對老年人失眠效果好其他鎮(zhèn)靜催眠藥劑量中樞效應(yīng)昏迷麻醉催眠鎮(zhèn)靜巴比妥類苯二氮卓類苯二氮卓類與巴比妥類的比較

1864年，德國化學家拜耳（1905年諾貝爾獎化學家得主）合成出的一種新化合物，丙二酰脲。

1903年，德國化學家菲舍爾和梅林發(fā)現(xiàn)了巴比妥酸鹽的醫(yī)學價值。他們發(fā)現(xiàn)合成的二乙基巴比妥酸讓狗很快沉睡。巴比妥酸于是就成了睡眠的保護神。1904年拜耳公司將二乙基巴比妥投入市場，商品名定為Veronal（佛羅拿）。

1912年，苯巴比妥（Phenobarbital）由拜耳公司上市，商品名是魯米娜（Luminal）。它不僅是一個安眠藥，而且有良好的抗驚厥效果，并且沒有溴化鉀的毒性。于是巴比妥鹽很快打敗當時的溴化鹽類安眠藥。成為二十世紀初到七十年代最廣為使用的安眠藥。

隨后，拜耳公司開展了一系列的C5位取代基研究。取代基長而有分支（如異戊巴比妥）或雙鍵（如司可巴比妥），則作用強而短；C2位的O被S取代（如硫噴妥），則脂溶性增高，靜脈注射立即生效，但維持時間很短。

抗驚厥、抗癲癇苯巴比妥麻醉前給藥及麻醉

新生兒黃疸巴比妥類1.增強GABA作用：

（非麻醉劑量）

延長Cl-通道開放時間2.擬GABA作用：即在無GABA時也能直接增加Cl-內(nèi)流3.抑制電壓依賴性Ca2+,Na+通道較高濃度巴比妥類（2）排除毒物洗胃導瀉NaHCO3堿化尿液血液透析法

中毒解救措施：（3）對癥支持治療：血壓，呼吸和體溫，昏迷患者預防感染等。（1）吸O2，人工呼吸，呼吸興奮藥。巴比妥類

巴比妥類藥物是環(huán)狀酰脲類的鎮(zhèn)靜催眠藥，巴比妥類藥物劑量由小到大，中樞抑制作用相繼表現(xiàn)為鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥和麻醉作用，其中苯巴比妥還具有抗癲癇的作用。

由于這類藥物應(yīng)用廣泛，容易因不合理使用而引起中毒，需要對本類藥物的原料、制劑進行分析，有時也需要對生物樣品中微量巴比妥類藥物進行分析。一結(jié)構(gòu)特征與典型藥物二理化性質(zhì)三巴比妥類藥物的鑒別四雜質(zhì)檢查五含量測定內(nèi)容：一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物

巴比妥類藥物是巴比妥酸的衍生物，結(jié)構(gòu)通式如下5,5－取代的巴比妥類藥物5,5－取代的硫代巴比妥類藥物1,5,5－取代的巴比妥類藥物本類藥物的結(jié)構(gòu)可大致分為兩個部分：1.環(huán)狀丙二酰脲、1,3－二酰亞胺基團決定巴比妥類藥物的特性2.取代基部分區(qū)別各種巴比妥類藥物戊巴比妥硫噴妥鈉二、理化特征

1.性狀巴比妥類藥物通常為白色結(jié)晶或者為結(jié)晶性粉末，具有一定的熔點。在空氣穩(wěn)定，加熱都能升華。一般微溶或極微溶于水，易溶于乙醇；其鈉鹽易溶于水，難溶于有機溶劑。

2.弱酸性巴比妥類藥物的母核環(huán)狀結(jié)構(gòu)中含有1，3-二酰亞胺基團，能使其分子發(fā)生酮式-烯醇式互變異構(gòu)(Keto-EnolTautomerism)，在水溶液中發(fā)生二級電離，其反應(yīng)式為：一級電離二級電離烯醇互變

由于本類藥物具有弱酸性（pKa

值為7.3－8.4）故可與強堿反應(yīng)生成水溶性的鹽類，一般為鈉鹽。成鹽反應(yīng)為：

由弱酸與強堿形成的巴比妥鈉鹽，其水溶液呈堿性，加酸酸化后，則析出結(jié)晶性的游離巴比妥類藥物，可用有機溶劑將其提取出來。上述這些性質(zhì)可用于巴比妥類藥物的分離、鑒別、檢查和含量測定。

3.水解反應(yīng)巴比妥類藥物及其鈉鹽的六元環(huán)狀結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，遇酸、氧化劑、還原劑時，一般情況下不會破裂，但與堿共沸時則水解開環(huán)，并產(chǎn)生氨氣。(1)巴比妥類藥物的水解主要是酰亞胺基團的性質(zhì)，與堿溶液共沸就可以水解生成氨氣，生成的氨氣可使紅色石蕊試紙變藍。反應(yīng)式如下：

JP(15)采用這一反應(yīng)鑒別異戊巴比妥和巴比妥。

(2)巴比妥類藥物鈉鹽的水解本類藥物鈉鹽的水溶性比較大，在吸濕的情況下也能水解。水解的速度與溫度和pH值有關(guān)。室溫和pH10以下時水解較慢，pH11以上隨著堿度的增加水解速度也隨之加快。巴比妥鈉注射液不能預先配制進行加熱滅菌，須制成粉針劑，臨用時溶解。

4.與重金屬反應(yīng)

(1)與Ag+的反應(yīng)可溶性的白色（1）銀鹽反應(yīng)：在碳酸鈉試液

中振搖使溶解，

加入硝酸銀試液

生成白色沉淀（二銀鹽），振搖沉淀即溶解（一銀鹽）；繼續(xù)滴加硝酸銀試液，沉淀不再溶解（二銀鹽）。巴比妥類藥物的一銀鹽可溶于水，而二銀鹽不溶。(2)與Cu2+的反應(yīng)巴比妥類藥物+銅吡啶試液吡啶紫色或紫色沉淀硫噴妥鈉+銅吡啶試液吡啶綠色

(3)與Co2+的反應(yīng)這一反應(yīng)的現(xiàn)象與銅鹽反應(yīng)的現(xiàn)象相似，均生成紫堇色配位化合物。本反應(yīng)要求在無水的條件下進行，所用試劑均應(yīng)不含水分，以使反應(yīng)靈敏，而且形成的有色產(chǎn)物也比較穩(wěn)定，常用無水乙醇或甲醇；鈷鹽為醋酸鈷、硝酸鈷或氧化鈷；堿以有機堿為好，一般采用異丙胺。(4)與Hg2+的反應(yīng)白色

5.與香草醛的反應(yīng)巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中丙二酰脲基團中氫比較活潑，可與香草醛在濃硫酸存在下發(fā)生縮合反應(yīng)，生成棕紅色產(chǎn)物。BP（2009）戊巴比妥采用此反應(yīng)進行鑒別。加乙醇后，其反應(yīng)產(chǎn)物可轉(zhuǎn)變?yōu)樽丶t色

6.紫外吸收光譜特征

主要特點：隨著電離級數(shù)的不同，巴比妥類藥物的紫外光譜會發(fā)生顯著的變化。也就是說，溶液pH值的不同以及取代基的不同會對紫外光譜產(chǎn)生影響。A.H2SO4溶液（0.05mol/L）B.pH9.9緩沖液C.NaOH溶液（0.1mol/L）巴比妥類藥物的紫外吸收光譜

在酸性溶液中，5，5-二取代和1，5，5三取代巴比妥類藥物不電離，無明顯的紫外吸收峰；在pH10的堿性溶液中，發(fā)生一級電離，形成共軛體系結(jié)構(gòu)，在240nm處出現(xiàn)最大吸收峰；在pH13的強堿性溶液中，5，5-二取代巴比妥類藥物發(fā)生二級電離，引起共軛體系延長，導致吸收峰向紅移至255nm；1，5，5-三取代巴比妥類藥物，因1位取代基的存在，故不發(fā)生二級電離，最大吸收峰仍位于240nm。硫噴妥的紫外吸收光譜HCl溶液(0.1mol/L)

-----

NaOH溶液(0.1mol/L)

硫代巴比妥類藥物的紫外吸收光譜則不同，在酸性或堿性溶液中均有較明顯的紫外吸收。在鹽酸溶液（0.1mol/L）中，兩個吸收峰分別在287nm和238nm；在氫氧化鈉溶液（0.1mol/L）中，兩個吸收峰分別移至304nm和255nm。另外，在pH13的強堿性溶液中，硫代巴比妥類藥物在255nm處的吸收峰消失，只存在304nm處的吸收峰。

7.色譜行為特征（主要用于鑒別）

（1）TLC:在硅膠60F254上點樣，氯仿-丙酮（4:1）為展開劑，顯色，在紫色背景上可觀察到白色的斑點。一般采用對照品（或標準品）比較法，要求供試品斑點的Rf值應(yīng)與對照品斑點的一致。（2）HPLC:與對照品比較保留行為，主要是比較保留時間和相對保留時間。8.顯微結(jié)晶巴比妥類藥物可根據(jù)其本身或與某種試劑的反應(yīng)產(chǎn)物的特殊晶型，進行同類或不同類藥物的鑒別。此法亦適用于生物樣品中微量巴比妥類藥物的檢驗。（1）藥物本身的晶形取藥物或從酸性溶液中，用有機溶劑提取、經(jīng)酸化、提取、純化后，即生成相應(yīng)巴比妥類藥物的特殊結(jié)晶。在顯微鏡下觀察結(jié)晶形狀：巴比妥為長方形；苯巴比妥在開始時呈球形，然后變成花瓣狀的結(jié)晶。

（2）反應(yīng)產(chǎn)物的晶形鑒于某些巴比妥類藥物可與重金屬離子反應(yīng)，生成具有特殊晶形的沉淀。因此，可利用此特性進行鑒別。例如，巴比妥可與硫酸銅-吡啶試液進行反應(yīng)，生成十字形紫色結(jié)晶；苯巴比妥反應(yīng)后，則形成淺紫色細小不規(guī)則的或類似菱形的結(jié)晶；其他巴比妥類藥物不能形成結(jié)晶，可利用這一特性來區(qū)分之。顯微結(jié)晶

藥物本身晶形反應(yīng)產(chǎn)物晶形三、鑒別試驗

1.丙二酰脲鑒別反應(yīng)這一鑒別試驗已經(jīng)收載在中國藥典附錄中的“一般鑒別試驗”項下。包括銀鹽反應(yīng)和銅鹽反應(yīng)，分別生成沉淀和呈色，反應(yīng)。

1.丙二酰脲鑒別反應(yīng)

已經(jīng)收載在中國藥典附錄中的“一般鑒別試驗”項下。包括銀鹽反應(yīng)和銅鹽反應(yīng)，分別生成沉淀和呈色，反應(yīng)的原理前面已經(jīng)提到過，在此不再贅述。2.測定熔點

巴比妥類的鈉鹽＋酸→游離巴比妥類藥物↓→過濾→洗滌→干燥→測熔點

例如：

司可巴比妥鈉的鑒別取本品1g溶解強力攪拌加水煮沸溶解成澄清溶液放冷過濾結(jié)晶在70℃干燥后，熔點約為97℃。苯巴比妥鈉的鑒別中國藥典的方法：取本品約0.5g加水溶解加過量稀鹽酸白色結(jié)晶性沉淀過濾用水洗凈沉淀105℃干燥，熔點應(yīng)為174℃～178℃。

水稀醋酸

巴比妥的鑒別取本品0.5g，加1mol/L碳酸鈉溶液5ml使溶解，加4.5%（W/V）對硝基氯芐的乙醇溶液10ml，在水浴上加熱回流30min，放置1h后，濾過，所得沉淀用乙醇進行重結(jié)晶后，在100℃~105℃干燥，測定衍生物的熔點，應(yīng)為150℃左右。巴比妥與對硝基氯芐的衍生化反應(yīng)為：

3.利用特殊取代基或元素的鑒別試驗（1）利用不飽和取代基的鑒別試驗具有不飽和取代基的巴比妥類藥物，中國藥典收載了司可巴比妥鈉。其分子結(jié)構(gòu)中含有烯丙基，可與碘、溴或高錳酸鉀作用，發(fā)生加成或氧化反應(yīng)，而使碘、溴或高錳酸鉀褪色。①與碘試液反應(yīng)

②與高錳酸鉀的反應(yīng)含不飽和取代基的巴比妥類藥物，具有還原性，在堿性溶液中與高錳酸鉀反應(yīng)，使紫色的高錳酸鉀還原成棕色的二氧化錳。（2）利用芳環(huán)取代基的鑒別試驗①硝化反應(yīng)含芳香取代基的巴比妥類藥物，如取苯巴比妥或其鈉鹽，與硝酸鉀和硫酸共熱，可發(fā)生硝化反應(yīng)，生成黃色硝基化合物。黃色

②與硫酸-亞硝酸鈉的反應(yīng)苯巴比妥與硫酸-亞硝酸鈉反應(yīng)生成橙黃色產(chǎn)物，并隨即轉(zhuǎn)變?yōu)槌燃t色。本反應(yīng)確切的原理不清，可能為苯環(huán)上的亞硝基反應(yīng)。此鑒別試驗為中國藥典收載的方法，可用于區(qū)別苯巴比妥和其他不含苯環(huán)取代基的巴比妥類藥物。③與甲醛-硫酸的反應(yīng)苯巴比妥與甲醛-硫酸反應(yīng)，生成玫瑰紅色產(chǎn)物。此鑒別方法也為中國藥典收載，可用于區(qū)別苯巴比妥和其他巴比妥類藥物。

（3）硫元素的鑒別試驗巴比妥類分子結(jié)構(gòu)中含有硫的藥物，如硫噴妥鈉，可將其硫元素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機硫離子，而顯硫化物的反應(yīng)。如硫噴妥鈉在氫氧化鈉試液中與鉛離子反應(yīng)生成白色沉淀；加熱后，沉淀轉(zhuǎn)變成黑色的硫化鉛。此鑒別試驗可用于硫代巴比妥類與巴比妥類藥物的區(qū)別。

四、特殊雜質(zhì)檢查

特殊雜質(zhì)是指在特定藥物的生產(chǎn)和貯存過程中引入的雜質(zhì)。藥物中特殊雜質(zhì)的檢查主要是根據(jù)藥物和雜質(zhì)在物理化學性質(zhì)上的差異來進行的。我們分別以苯巴比妥和司可巴比妥鈉為例。

1.苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查

（1）酸度（指示劑法）

酸度的檢查主要是控制副產(chǎn)物苯基丙二酰脲。苯基丙二酰脲是由于中間體（Ⅱ）的乙基化反應(yīng)不完全，而與脲素縮合生成的。因其分子中5位碳原子上的氫受相鄰丙羧基的影響，致使酸性比苯巴比妥強，能使甲基橙指示劑呈紅色。

1.酸度中間體Ⅱ乙?；煌耆珪r，Ⅱ與尿素縮合產(chǎn)生的雜質(zhì)Ⅱ苯基丙二酰脲酸性較強檢查方法取本品0.20g，加水10ml，煮沸攪拌1min，放冷，濾過后，取濾液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得顯紅色（2）溶液的澄清度

本項檢查主要是控制苯巴比妥中乙醇不溶性雜質(zhì)，利用苯巴比妥酸這些雜質(zhì)在乙醇溶液中的溶解度比苯巴比妥小的特性進行檢查。

（3）中性或堿性物質(zhì)

中性或堿性物質(zhì)是由中間體（Ⅰ）形成的酰胺、酰脲或分解產(chǎn)物等雜質(zhì)，不溶于氫氧化鈉試液但溶于乙醚；而苯巴比妥具有酸性，溶于氫氧化鈉試液，故采用提取重量法測定其含量。檢測方法為：取本品1.0g置分液漏斗中加氫氧化鈉試液10ml溶解加水5ml與乙醚25ml分取醚層用水振搖洗滌3次（每次5ml）取醚液過濾濾液于105℃蒸干，在105℃干燥1h，遺留殘渣不得過3mg。

2.司可巴比妥鈉的特殊雜質(zhì)檢查

（1）溶液的澄清度此項檢查主要是控制水不溶性雜質(zhì)，巴比妥類藥物的鈉鹽極易溶于水，因此本品的水溶液應(yīng)澄清，否則表明含有水不溶性雜質(zhì)。

需注意的是，因本品的水溶液易與空氣中的二氧化碳作用，而析出司可巴比妥，故進行該項目檢查時，溶解樣品的水應(yīng)新沸放冷以消除水中二氧化碳的干擾。

（2）中性或堿性物質(zhì)檢查的雜質(zhì)是合成過程中產(chǎn)生的中性或堿性副產(chǎn)物以及司可巴比妥鈉的分解產(chǎn)物，如酰脲（Ⅰ）、酰胺（Ⅱ）類化合物。(Ⅰ)(Ⅱ)五、含量測定

銀量法溴量法巴比妥類藥物的含酸堿滴定法量測定方法紫外分光光度提取重量法

HPLC法、GC法

（一）銀量法基于巴比妥類藥物在合適的堿性溶液中，可與銀離子定量成鹽，可采用銀量法測定本類藥物及其制劑的含量。如苯巴比妥及其鈉鹽、異戊巴比妥及其鈉鹽以及它們的制劑，中國藥典均采用銀量法測定其含量。

優(yōu)點：操作簡便，專屬性較強。

缺點：受溫度影響較大；滴定終點以溶液出現(xiàn)渾濁為終點指示難以觀察。

1.原理反應(yīng)摩爾比：1:1

溶劑系統(tǒng)：甲醇＋3％無水碳酸鈉終點指示：電位法指示（Ag－玻璃電極系統(tǒng)）自身指示法

2.測定方法與計算例如:異戊巴比妥及其鈉鹽的測定：取本品約0.2g，加甲醇40ml使溶解，再加新鮮配制的3%無水碳酸鈉溶液15ml，照電位法，用硝酸銀滴定液（0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當于22.63mg的C11H18N2O3（或24.83mg的C11H17N2NaO3）。原料藥：直接滴定法（容量分析法）

(一)銀量法

(Argentometry)0.2g甲醇

40ml異戊巴比妥測定3%無水碳酸鈉電位滴定法(AgNO3)指示電極(Ag)參比電極(玻璃/甘汞)

3.注意事項（1）無水碳酸鈉應(yīng)新鮮配制（2）硝酸銀滴定液應(yīng)新鮮配制

（二）溴量法凡在5位取代基含有不飽和鍵的巴比妥類藥物，其不飽和鍵能與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)，故可采用溴量法測定其含量。中國藥典收載的司可巴比妥鈉采用本法測定。其測定原理可用下列反應(yīng)式表示：（定量過量）Br2+2KI2KBr+I2（剩余）I2+2Na2S2O3→2NaI+Na2S4O6

溴滴定液的配制：取溴酸鉀3.0g與溴化鉀15g，加水適量使之溶解成1000ml，搖勻。反應(yīng)的摩爾比：1:2

司可巴比妥鈉的測定方法：取本品約0.1g,精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10ml振搖使溶解精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min加KI試液10ml，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相當于13.01mg的C12H17N2NaO3。

原料藥剩余滴定法

注意事項：（1）操作中要防止溴和碘的逸失。（2）平行條件進行空白試驗可以減少溴和碘逸失帶來的誤差。

（三）酸堿滴定法（酸量法）巴比妥類藥物呈弱酸性，可作為一元酸以標準堿液直接滴定，或在非水溶液中用強堿溶液直接滴定。常用的方法如下：

1.在水－乙醇混合溶劑中滴定

基于本類藥物在水中的溶解度較小，滴定時多在醇溶液或含水的醇溶液中進行，這樣可避免反應(yīng)中產(chǎn)生的弱酸鹽易于水解而影響滴定終點。常以麝香草酚酞為指示劑，滴定至淡藍色為終點。

例如：異戊巴比妥的含量測定取本品約0.5g，精密稱定，加乙醇20ml溶解后，加麝香草酚酞指示劑6滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正，即得。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當于22.63mg的C11H18N2O3。異戊巴比妥水—醇溶解麝香草酚酞NaOH淡藍色1.水-乙醇混合溶液原料藥直接滴定法（有空白校正）T－滴定度，每1ml滴定液相當于被測組分的mg數(shù)

V－滴定時，供試品消耗滴定液的體積（ml）VO－滴定時，空白消耗滴定液的體積（ml）F－濃度校正因子

2.在膠束水溶液中滴定

表面活性劑是一種所謂“兩親”分子，即其分子是由親水基團和親脂基團兩部分組成。當表面活性劑在水溶液中濃度很低時，基本上呈單分子狀態(tài)存在，但當超過某一濃度時（臨界膠束濃度），多余的表面活性劑分子在溶液中不再分散，而是聚集成有一定分子組成數(shù)的聚集物，稱為膠束或膠團。膠束具有增溶作用，水溶液中膠束的存在能使不溶或微溶于水的有機化合物的溶解度增加，并顯著改變?nèi)跛?、弱堿性物質(zhì)的解離，使其酸堿性增強。

本法是在有機表面活性劑的膠束水溶液中進行滴定，用指示劑或電位法指示終點。常用的有機表面活性劑有：溴化十六烷基三甲基芐銨(CTMA)和氯化四癸基二甲基芐銨(TDBA)。采用本法測定巴比妥和苯巴比妥的結(jié)果的相對標準差（RSD）均小于0.3%，并優(yōu)于在水-乙醇混合溶液中的滴定方法。2.膠束水溶液正膠束反膠束H2O溴化十六烷基三甲基芐銨Cetyltrimethylbenzylammoniumbromide，CTMA氯化四癸基二甲基芐銨Tetradecyldimethylbenzylammoniumchloride，TDBA巴比妥類表面活性劑溶解麝香草酚酞指示劑NaOH滴定

3.非水滴定法巴比妥類藥物在非水溶液中的酸性增強，用堿性標準溶液滴定時，終點較為明顯，可獲得比較滿意的結(jié)果。測定時常用的有機溶劑有二甲基甲酰胺、甲醇、氯仿、丙酮、無水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯（15?85）、乙醇-氯仿（1?10）等；常用的滴定劑有甲醇鉀（鈉）的甲醇（或乙醇）溶液、氫氧化四丁基銨的氯苯溶液等；常用的指示劑為麝香草酚藍等，也可用玻璃-甘汞電極系統(tǒng)，以電位法指示終點。

（四）紫外分光光度法巴比妥類藥物在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無明顯的紫外吸收。但在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)，因而可采用紫外分光光度法測定其含量。本法靈敏度高，專屬性強，廣泛應(yīng)用于巴比妥類藥物的原料及其制劑的含量測定，以及固體制劑的溶出度和含量均勻度檢查，也常用于體內(nèi)巴比妥類藥物的檢測。

1.直接測定的紫外分光光度法

本法是將供試品溶解