第六章 藥物分析

第六章

芳酸類非甾體抗炎藥物的分析

2023/10/1612023/10/162第六章熟悉:

主要芳酸類非甾體抗炎藥物雜質(zhì)的結(jié)構(gòu),危害,檢查方法與限度了解:

影響芳酸類非甾體抗炎藥物穩(wěn)定性的主要因素,體內(nèi)樣品與臨床監(jiān)測掌握:

芳酸類非甾體抗炎藥的結(jié)構(gòu)和性質(zhì) 主要芳酸類藥物的鑒別,檢查和含量測定的原理與特點2023/10/163第六章

芳酸類非甾體抗炎藥物的分析

典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

鑒別試驗特殊雜質(zhì)及其檢查法含量測定4123體內(nèi)藥物分析52023/10/164概述結(jié)構(gòu)特點藥物特點理化特性分析方法作用臨床基本結(jié)構(gòu)基本性質(zhì)鑒別,檢查含量測定;體內(nèi)分析抗炎,抗風濕,

止痛,退熱關(guān)節(jié)炎,

發(fā)熱,

慢性疼痛芳基取代羧酸游離羧基和苯環(huán)酸性;水解性;

光譜特性基團(酚)/元素(硫)特性Fe3+;UV,IR,LC中間體或水解產(chǎn)物酸堿滴定;UV;HPLC體內(nèi)過程與分析非甾體抗炎藥(NSAIDs)是一類不含有甾體骨架的抗炎藥,是目前臨床使用最多的藥物種類之一Non-SteroidAnti-InflammatoryDrugs2023/10/165第一節(jié)

典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

二、主要理化性質(zhì)2023/10/166一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

苯環(huán)結(jié)構(gòu)特征(1)鄰羥基苯甲酸類:具有苯環(huán)和羧基水楊酸阿司匹林雙水楊酯二氟尼柳2023/10/167一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

苯環(huán)結(jié)構(gòu)特征（2）鄰胺基苯甲酸:甲芬那酸（3）二苯甲酮:酮洛芬2023/10/168一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

苯環(huán)結(jié)構(gòu)特征（4）羥基不飽和酮:

吡羅昔康,美洛昔康（5）雜環(huán)，特殊元素:吲哚美辛,吡羅昔康,美洛昔康吡羅昔康美洛昔康吲哚美辛2023/10/169一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

羧基狀態(tài)

（1）游離: 水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳, 甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛水楊酸阿司匹林雙水楊酯布洛芬2023/10/1610一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

羧基狀態(tài)

（2）羧基成鹽/酯:雙氯芬酸鈉,雙水楊酯雙水楊酯雙氯芬酸鈉2023/10/1611一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

羧基狀態(tài)

（3）酰胺: 吡羅昔康,美洛昔康吡羅昔康美洛昔康2023/10/1612一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

其他類

對乙酰氨基酚（撲熱息痛，泰諾，百服寧）2023/10/1613二、主要理化性質(zhì)

(一)酸性較強酸性:原料藥可在中性乙醇或甲醇,丙酮等 水溶性有機溶劑中,用氫氧化鈉直接滴定雙氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛: 羧基不與苯環(huán)直接相連,酸性較弱吡羅昔康,美洛昔康,尼美舒利,對乙酰氨基酚: 酰胺結(jié)構(gòu),無明顯酸性

3.492.95pKa=4.26鄰位效應(yīng)分子內(nèi)氫鍵2023/10/1614二、主要理化性質(zhì)

(二)水解性酯鍵:

阿司匹林/雙水楊酯酰胺鍵:

吲哚美辛,吡羅昔康,美洛昔康,尼美舒利, 對乙酰氨基酚水解反應(yīng)及其產(chǎn)物的特性反應(yīng)——鑒別水解可快速,定量——含量測定(剩余堿量法)美洛昔康——定過量的氫氧化鈉水解 剩余的氫氧化鈉用鹽酸回滴定美洛昔康2023/10/1615二、主要理化性質(zhì)

(三)吸收光譜特性紫外特征光譜:

鑒別;含量均勻度,溶出度/釋放度紅外特征光譜

:

鑒別酮洛芬酚羥基:

對乙酰氨基酚,水楊酸與Fe3+顯色——鑒別

二苯甲酮:

酮洛芬與苯肼縮合顯色——鑒別

硫: 美洛昔康熱分解后產(chǎn)生的硫化氫 與醋酸鉛生成黑色硫化鉛——鑒別(四)基團/元素特性2023/10/1616第二節(jié)

鑒別試驗一、與三氯化鐵反應(yīng)二、縮合反應(yīng)三、重氮化-偶合反應(yīng)四、氧化反應(yīng)五、水解反應(yīng)六、特征元素反應(yīng)七、光譜法八、色譜法2023/10/1617一、與三氯化鐵反應(yīng)中性或弱酸性(pH值4~6)條件下進行,強酸性溶液中配位化合物分解阿司匹林加水煮沸雙水楊酯在氫氧化鈉試液中煮沸水解生成水楊酸,與三氯化鐵試液顯紫堇色二氟尼柳于乙醇中與三氯化鐵試液呈深紫色1.水楊酸反應(yīng)2023/10/16182023/10/1619一、與三氯化鐵反應(yīng)對乙酰氨基酚:水溶液加三氯化鐵試液顯藍紫色吡羅昔康(三氯甲烷):與三氯化鐵顯玫瑰紅色美洛昔康顯淡紫紅色

烯醇式羥基具有酚羥基性質(zhì),與FeCl3生成紅色配位化合物2.酚羥基反應(yīng)2023/10/1620一、與三氯化鐵反應(yīng)2023/10/1621二、縮合反應(yīng)酮洛芬的二苯甲酮,在酸性下與二硝基苯肼縮合生成橙色偶氮化合物沉淀2023/10/1622三、重氮化-偶合反應(yīng)對乙酰氨基酚在酸中水解生成對氨基酚,游離芳伯氨基與亞硝酸鈉試液重氮化,重氮鹽再與堿性β-萘酚偶合生成紅色偶氮化合物2023/10/1623三、重氮化-偶合反應(yīng)2023/10/1624四、氧化反應(yīng)甲芬那酸:溶于硫酸,被重鉻酸鉀氧化顯深藍色→隨即變?yōu)樽鼐G色吲哚美辛:溶液在硫酸酸性下與重鉻酸鉀溶液共熱,被氧化顯紫色在鹽酸溶液中與亞硝酸鈉溶液反應(yīng)顯綠色,放置后漸變黃色2023/10/1625四、氧化反應(yīng)2023/10/1626五、水解反應(yīng)阿司匹林,水解得水楊酸鈉與醋酸鈉,酸化生成水楊酸白色沉淀;并發(fā)生醋酸的臭氣雙水楊酯水解后酸化,生成白色水楊酸沉淀;2CH3COONa+H2SO4→2CH3COOH+Na2SO42023/10/1627五、水解反應(yīng)2023/10/1628六、特征元素的反應(yīng)氯的鑒別——與堿共熱分解產(chǎn)生氯化物,顯氯化物的鑒別反應(yīng)雙氯芬酸鈉:與碳酸鈉熾灼灰化,加水煮沸,濾過,濾液顯氯化物鑒別反應(yīng)

硫的鑒別——經(jīng)高溫分解產(chǎn)生硫化氫氣體,遇醋酸鉛生成硫化鉛黑色沉淀美洛昔康:試管中熾灼,產(chǎn)生的氣體使?jié)駶櫟拇姿徙U試紙顯黑色2023/10/1629六、特征元素的反應(yīng)2023/10/1630鑒別試驗D水楊酸及其鹽在中性或弱酸性條件下與______反應(yīng)，生成紫堇色配位化合物。

FeCl3122023/10/1631鑒別試驗配伍

A與碳酸鈉試液加熱溶解，再加過量稀硫酸酸化后生成白色沉淀，并發(fā)出醋酸的臭氣B加酸水解，在酸性條件下，與亞硝酸鈉，堿性β-萘酚反應(yīng)，顯紅色C加乙醇溶解后，加二硝基苯肼，加熱煮沸，放冷即產(chǎn)生橙色沉淀D溶于硫酸后，與重鉻酸鉀反應(yīng)顯深藍色，隨即變?yōu)樽鼐G色。1甲芬那酸------（）2酮洛芬------

（）

3阿司匹林------（）

4對乙酰氨基酚------（）

ABCD2023/10/1632鑒別試驗現(xiàn)有三瓶藥物分別為水楊酸（A)，阿司匹林（B）和對乙酰氨基酚（C)，但瓶上標簽脫落，采用適當方法將三者區(qū)分開。（1）加甲醇溶解，加水與三氯化鐵，紫色-----水楊酸（2）剩下兩種藥物，加稀鹽酸，加熱煮沸，放冷后加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚，顯紅色----對乙酰氨基酚2023/10/1633七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法最大吸收波長法:

雙氯芬酸鈉溶液:276nm有最大吸收;吡羅昔康片,含量測定溶液:243與334nm最大吸收最大與最小吸收波長法:

布洛芬及制劑氫氧化鈉溶液:265,273nm最大吸收;245,271nm最小吸收;259nm肩峰吸光度法:

甲芬那酸鹽酸-甲醇溶液:279與350nm最大吸收。吸光度(20μg/ml)分別:0.69~0.74與0.56~0.60吸光度比值法:二氟尼柳鹽酸-乙醇溶液:251與315nm最大吸收吸光度比值應(yīng)為4.2~4.6

2023/10/1634七、光譜法(二)紅外分光光度法 阿司匹林

峰位(cm-1)歸屬3300~2300vO-H(羧基)1760,1690vC=O(羧酸酯和羧酸)1610,1570,1480,1460vC=C(苯環(huán))1310,1230,1180vC-O(羧酸酯和羧酸)775δAr-H(鄰位取代苯環(huán))3300~23001760,16901610~14601310~11807752023/10/1635紅外光譜法—原料藥2023/10/1636八、色譜法(一)薄層色譜個別藥物制劑采用溶劑提取法去除輔料后IR鑒別;部分藥物制劑采用TLC鑒別:二氟尼柳,美洛昔康等

2023/10/1637(二)高效液相色譜法隨著HPLC在藥物制劑含量測定中的大量應(yīng)用,更多應(yīng)用HPLC進行制劑的鑒別:阿司匹林等多種制劑均直接取含量測定項下記錄的HPLC色譜圖進行鑒別

當TLC和HPLC均有收載時:二者可任選其一。如美洛昔康片的鑒別八、色譜法2023/10/1638藥物名稱特殊雜質(zhì)游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)/FeCl3阿司匹林/雙水楊酯甲芬那酸二氟尼柳第三節(jié)

特殊雜質(zhì)及其檢查法2.3-二甲基苯胺有關(guān)物質(zhì)

6-甲氧基-2-萘乙酮

氨基酚和對氯苯乙酰胺A.TLC;B.HPLCGC萘普生對乙酰氨基酚2023/10/1639一、阿司匹林與雙水楊酯(一)阿司匹林與雙水楊酯的合成2023/10/1640一、阿司匹林與雙水楊酯(二)阿司匹林中游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)1.游離水楊酸:

酚羥基易被空氣(氧)逐漸氧化生成淡黃,紅棕至深棕色醌型化合物2023/10/16411.游離水楊酸:

ChP

用水楊酸與Fe3+生成紫堇色配離子的原理,用稀硫酸鐵銨溶液顯色法檢查

供試品溶液制備過程中阿司匹林水解ChP2010采用1%冰醋酸甲醇溶液制備供試品溶液(防阿司匹林水解);并用RP-HPLC檢查一般，制劑不再檢查原料藥下的相關(guān)雜質(zhì)，但是阿司匹林制劑過程中會水解生成水楊酸，所以藥典對阿司匹林制劑也規(guī)定檢查水楊酸的含量。2023/10/16421.游離水楊酸:2023/10/16432.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林中“有關(guān)物質(zhì)”系指除“游離水楊酸”外的合成原料(苯酚)及副產(chǎn)物2023/10/16442.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林

水楊酸

乙酰水楊酰水楊酸a:阿司匹林供試品(10mg/ml)；b:0.5%自身對照(50

g/ml)；c:0.05%自身對照(靈敏度試驗5g/ml)；d:水楊酸對照(10

g/ml)；e:空白2023/10/16452.有關(guān)物質(zhì):2023/10/1646一、阿司匹林與雙水楊酯(三)雙水楊酯中游離水楊酸利用水楊酸與三價鐵生成有色配離子的原理,用硝酸鐵溶液顯色,在530nm的波長處測定吸光度,限度為0.5%;雙水楊酯片同法檢查,限度為1.5%

2023/10/1647雙水楊酯中游離水楊酸2023/10/1648二、甲芬那酸(一)合成工藝甲芬那酸主要以鄰-氯苯甲酸(o-chloroben-zoicacid)和2,3-二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)為原料,在銅的催化下縮合而成2023/10/1649二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺的檢查ChP曾采用HPLC法檢查: 單1雜質(zhì)的限量為0.1% 雜質(zhì)總量為0.5%ChP2010規(guī)定

HPLC法檢查:“有關(guān)物質(zhì)”

GC檢查:2,3-二甲基苯胺(0.01%)2023/10/1650三、二氟尼柳(一)合成工藝原料(I)

:2,4-二氟苯胺中間體(II):2,4-二氟聯(lián)苯中間體(III)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮中間體(IV)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯酚乙酯中間體(V):4-(2‘,4’-二氟苯基)苯酚產(chǎn)品(VI):二氟尼柳2023/10/1651三、二氟尼柳(二)有關(guān)物質(zhì)A和B的檢查1.有關(guān)物質(zhì)A的檢查——TLC(正相): 極性較小的雜質(zhì) 單1雜質(zhì)的限量為0.5%2.有關(guān)物質(zhì)B的檢查——HPLC(反相): 極性較大的雜質(zhì) 各面積的和為0.5%2023/10/1652四、萘普生

(一)合成工藝原料(I)

:2-萘甲醚中間體(II):6-甲氧基-2-乙酰萘(6-甲氧基-2-萘乙酮)中間體(III):2-羥基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸產(chǎn)品(IV):萘普生

2023/10/1653四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有關(guān)物質(zhì)1.溶液制備供試品溶液:0.5mg/ml流動相溶液對照品溶液:6-甲氧基-2-萘乙酮(雜質(zhì)I),

50μg/ml對照溶液:供試品溶液1ml+對照品溶液2ml→200ml2.限度

雜質(zhì)I:

不得大于雜質(zhì)I峰面積(0.1%)

其他單個雜質(zhì):

不得大于雜質(zhì)I峰面積的2倍(0.2%)各雜質(zhì)總量:

不得大于對照溶液中萘普生峰面積(0.5%)

2023/10/1654五、對乙酰氨基酚

(一)合成工藝(二)有關(guān)雜質(zhì):

對硝基酚,對氨基酚,對氯苯胺,對氯苯乙酰胺,o-乙酰 基對乙酰氨基酚,偶氮苯,氧化偶氮苯,苯醌和醌亞胺1.對氨基酚及(其它)有關(guān)物質(zhì)——HPLC對氨基酚:0.005%有關(guān)物質(zhì):單個0.1%;總量0.5%2.

對氯苯乙酰胺(極性較小)——HPLC(0.005%)

2023/10/1655有關(guān)物質(zhì)檢查檢查阿司匹林中水楊酸是利用雜質(zhì)與藥物的（） A．溶解行為的差異

B．化學性質(zhì)的差異

C．熔點差異

D．旋光性差異B2023/10/1656有關(guān)物質(zhì)檢查BCE多選2023/10/1657第四節(jié)

含量測定一、酸堿滴定法二、紫外-可見分光光度法三、高效液相色譜法2023/10/1658一、酸堿滴定法酸堿滴定法水解后剩余量滴定法阿司匹林

USP,BP,JP非水溶液滴定法吡羅昔康具有吡啶環(huán),顯堿性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定

剩余量滴定法美洛昔康水及與水混溶的有機溶劑中難溶,溶于氫氧化鈉滴定液后鹽酸回滴定

直接滴定法水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,尼美舒利2023/10/1659(一)直接滴定法1.測定法本品約0.4g,精