化妝品中脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的測定

化妝品中脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的測定（BJH202205）1范圍本方法規(guī)定了化妝品中脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的測定方法。本方法適用于膏霜乳類、液體類、凝膠類、貼膜類化妝品中脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的定性和定量測定。2原理樣品經(jīng)甲醇超聲提取，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測，根據(jù)保留時間和特征離子對的相對豐度比定性，定量離子對峰面積定量，以標準曲線法計算含量。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法中所用試劑均為分析純及以上規(guī)格，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1甲醇，色譜純。3.2冰乙酸，色譜純。3.30.1%乙酸溶液：量取1mL冰乙酸（3.2），用水稀釋至1000mL，混勻。3.4標準品：脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯標準品，純度≥97%。標準品的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量、結構式詳見附錄A中的表A.1。3.5脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯標準儲備溶液：稱取脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯標準品20mg（精確到0.00001g），置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，搖勻。該標準儲備溶液的質(zhì)量濃度為400mg/L。3.6脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯標準溶液：精密量取脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯標準儲備溶液（3.5）0.20mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1）定容至刻度，搖勻。該標準溶液的質(zhì)量濃度為1.6mg/L。4儀器和設備4.1高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。4.3超聲波清洗器。4.4渦旋混合儀。4.5高速離心機，轉速不小于10000r/min。5試樣制備與保存樣品應按照標簽標示的貯存條件進行保存。取樣前，應檢查封口的完整性，觀察樣品的性狀和特征，并使樣品混勻。打開包裝后，應盡可能快地取出所要測定部分進行分析，取樣后，應將樣品進行密封保存。6分析步驟6.1篩查用標準溶液量取脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯標準溶液（3.6）適量，用甲醇（3.1）進行稀釋，配制成濃度為2μg/L的標準溶液。6.2基質(zhì)標準中間液精密量取脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯標準溶液（3.6）10mL，置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋至刻度，搖勻，制成脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯濃度為160μg/L的基質(zhì)標準中間液。6.3基質(zhì)標準系列溶液稱取空白試樣0.2g（精確到0.0001g），置于25mL具塞比色管中，精密加入基質(zhì)標準中間液（6.2）適量，加入甲醇（3.1）至約20mL，自“渦旋振蕩30s”起與樣品同法處理（6.4），配制得濃度為1、2、5、12.5、25μg/L系列濃度基質(zhì)標準系列溶液。注：基質(zhì)標準系列溶液采用的空白試樣的劑型應與待測樣品基本一致。6.4樣品處理稱取樣品0.2g（精確到0.0001g），置于25mL具塞比色管中，加入甲醇（3.1）約20mL，渦旋振蕩30s，使試樣與提取溶劑充分混勻，超聲提取20min，靜置至室溫，用甲醇（3.1）定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm聚四氟乙烯濾膜過濾（必要時可先10000r/min轉速離心10min），濾液作為供試品溶液備用。當供試品溶液中檢出脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯且濃度較高時，需適當稀釋后測定；空白試樣（6.3）也應同法稀釋。6.5儀器參考條件6.5.1色譜條件色譜柱：C18柱（100mm×2.1mm，1.8μm），或等效色譜柱；流動相：A為0.1%乙酸溶液（3.3），B為甲醇（3.1）。梯度洗脫程序見表1；流速：0.2mL/min；柱溫：35℃；進樣量：2μL。表1梯度洗脫程序時間（min）流動相A（%）流動相B（%）0.00851510.00109012.00109013.00851516.0085156.5.2質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI源）；監(jiān)測模式：負離子多反應監(jiān)測模式（MRM），監(jiān)測離子對及相關參數(shù)設定見表2。表2脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯監(jiān)測離子對及相關參數(shù)設定組分名稱母離子（m/z）子離子（m/z）CE（eV）脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯531.298.9*431.1-50-19*為推薦的定量離子。注：當采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。6.6定性判定取供試品溶液（6.4）與篩查用標準溶液（6.1）在相同分析條件下測定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰，被測成分的特征離子峰保留時間與篩查用標準溶液（6.1）對應的保留時間一致，且樣品所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與篩查用標準溶液（6.1）的監(jiān)測離子對的相對豐度比的偏差不超過表3的規(guī)定，則可以判定樣品中存在脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯。表3定性確證時相對離子豐度比的最大允許偏差相對離子豐度（k）k>50%50%≥k>20%20%≥k>10%k≤10%允許最大偏差±20%±25%±30%±50%6.7定量測定取基質(zhì)標準系列溶液（6.3）依次測定，以系列濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，繪制基質(zhì)標準曲線，其線性相關系數(shù)應大于0.99。取供試品溶液（6.4）測定，將定量離子對色譜峰面積代入基質(zhì)標準曲線。按“7”項下公式，計算樣品中脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的含量。6.8平行試驗按上述步驟，對同一樣品進行平行實驗測定。6.9空白試驗除不加試樣外，均按上述測定條件和步驟進行。7結果計算結果按式（1）計算：………………(SEQ標準自動公式\*ARABIC1)式中：ω—樣品中脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的質(zhì)量分數(shù)，μg/g；ρ—供試品溶液中脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的質(zhì)量濃度，μg/L；V—樣品定容體積，mL；m—樣品取樣量，g；D—稀釋倍數(shù)（如未稀釋則為1）。相同條件下獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。8精密度和準確度多家實驗室驗證定量下限濃度回收率為80%～110%，相對標準偏差小于10%（n=6），中、高濃度回收率為85%～110%，相對標準偏差小于10%（n=6）。9檢出限和定量限本方法中脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的檢出限、定量下限及取樣量為0.2g時檢出濃度和最低定量濃度見表4。表4脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度組分名稱檢出限（ng）定量下限（ng）檢出濃度（μg/g）最低定量濃度（μg/g）脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯0.00070.0020.040.210圖譜圖1脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯標準溶液的多反應監(jiān)測色譜圖附錄A脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯的相關信息