穗花杉樹皮中紫杉醇提取工藝的優(yōu)化

穗花杉樹皮中紫杉醇提取工藝的優(yōu)化

2.4穗花杉醇含量測定根據(jù)掃描結(jié)果，樣品在min.228nm處有一個(gè)峰值，表明紫杉醇含有在實(shí)踐中的海水。用SPSS17.0軟件分析得回歸方程為:A=0.015C+0.024,相關(guān)系數(shù)r為0.9998。由HPLC法可見供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液在相同位置有色譜峰,進(jìn)一步證明穗花杉樹皮中有紫杉醇成分的存在,根據(jù)1.2.6.4中的公式可計(jì)算出供試品中紫杉醇的百分含量為0.0034%。穗花杉在《中國珍稀瀕危保護(hù)植物名錄》中列為瀕危物種。因其形態(tài)結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分特殊,一直受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。癌癥,已成為嚴(yán)重威脅人類健康的主要病癥之一,僅次于心血管疾病。紫杉醇最初是從太平洋短葉紅豆杉樹皮中提取出來的,是紅豆杉屬植物特有的次生代謝產(chǎn)物,它是最具抗癌活性的天然化合物之一,也是目前國際市場上最熱門的新型抗癌藥物,被廣泛用于臨床治療癌癥,取到良好效果,被認(rèn)為是最近二十年來天然抗癌領(lǐng)域的重大發(fā)現(xiàn)。1材料和方法1.1對照品、色譜檢定所U—2800型紫外分光光度掃描儀(日立公司);紫杉醇對照品(批號(hào):100382-200301,中國藥品生物制品檢定所);穗花杉樹皮(采自廣東梅州);甲醇(色譜純,西隴化工股份有限公司);其它試劑皆為分析純。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1-堿液洗滌法穗花杉→干燥→粉碎→有機(jī)溶劑提取→非極性雜質(zhì)的去除→堿液洗滌法除雜→活性炭脫色→硅膠柱層析→紫外掃描定性分的→高效液相色譜法測定含量。1.2.2水含量測定參照《中國藥典》(2010版)的干燥失重測定法。1.2.3kco3-溶出液制備將穗花杉樹皮用微波爐干燥,粉碎成粗粉,稱取8g粉末,用冷浸法提取,提取液用正己烷萃取,濃縮,用氯仿溶解,加入等體積1mol/L的K2CO3溶液,攪拌,有機(jī)相用K2CO3溶液和蒸餾水分別洗滌,加入活性炭脫色,經(jīng)無水硫酸鈉脫水后濃縮至干,備用。1.2.4供試品溶液配制將干燥提取物用硅膠柱色譜進(jìn)行分離,以甲醇∶氯仿(3∶97)洗脫液進(jìn)行洗脫,收集餾分共10份,每份10mL,作為供試品溶液。1.2.5hplc法測定了紫杉醇的含量1.2.5.1.鉻條件色譜柱為島津SHIMPACKVP-ODS250L*4.6,流動(dòng)相∶甲醇-水(58∶42),檢測波長:228nm。1.2.5.2.對照溶液的制備配制0.1mg/mL對照品甲醇溶液,備用。1.2.5.3.試溶液的制備將供試品洗脫餾分裝在10mL容量瓶中,干燥,用甲醇定容,即得。1.2.5.4-紫冷醇含量計(jì)算公式含量%=(AT×f×n供)/m×100%,f=WS/(n對×AS)。1.3單因素試驗(yàn)1.3.1供試品溶液的制備精確稱取穗花杉樹皮粉末,每份8g,共四份,分別加入乙酸乙酯∶丙酮(1∶1)、95%乙醇、75%丙酮、95%二氯甲烷這4種提取溶劑,提取時(shí)間為10h,料液比為1∶10,提取次數(shù)為2次,得供試品溶液。1.3.2提取時(shí)間的選擇提取次數(shù)分別為1、2、3、4次,其它條件同1.3.1。1.3.3材料和溶液比的選擇料液比分別為1∶4、1∶7、1∶10、1∶13,其它條件同1.3.1。1.3.4提取時(shí)間的選擇提取時(shí)間分別為2h、6h、10h、14h,其它條件同1.3.1。1.4紫杉醇提取量的測定根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,采用正交試驗(yàn)進(jìn)一步考察提取次數(shù)、提取溶劑、提取時(shí)間、料液比四個(gè)因素對紫杉醇提取量的影響,每個(gè)因素考查四個(gè)水平。因此采用L16(44)正交表進(jìn)行試驗(yàn)。2結(jié)果與分析2.1水含量測定穗花杉樹皮的平均水分含量為0.26%。2.2單因素試驗(yàn)2.2.1溶劑提取的選擇從測定數(shù)據(jù)表明95%乙醇的提取率最高,故應(yīng)選擇95%乙醇作為提取溶劑。2.2.2提取時(shí)間的選擇由測定數(shù)據(jù)表明提取次數(shù)宜選2次。2.2.3材料和溶液比的選擇料液比為1∶10時(shí),紫杉醇的提取量最高。2.2.4提取時(shí)間的選擇最佳的提取時(shí)間為10h,隨著提取時(shí)間的延長,提取量的反而減少。2.3料液比對提取量的影響最佳的實(shí)驗(yàn)條件為:提取次數(shù)為3,提取劑為75%丙酮,提取時(shí)間為2h,料液比為1∶7;影響提