微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)【知識(shí)專講精研】 高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

學(xué)習(xí)目標(biāo)核心素養(yǎng)1.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提。2．闡明無菌技術(shù)是在操作過程中，保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。3．概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法。1.科學(xué)思維：根據(jù)微生物的代謝類型分析培養(yǎng)基的組成。2．科學(xué)探究：討論并掌握無菌技術(shù)的實(shí)驗(yàn)操作方法；討論并掌握微生物的純培養(yǎng)的方法。第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)從社會(huì)中來

向經(jīng)過殺菌處理的牛奶中添加某些對(duì)人體有益的細(xì)菌，再經(jīng)過發(fā)酵就可以制成酸奶，由于制作工藝并不復(fù)雜，一些人會(huì)在家里自制酸奶，自制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導(dǎo)致腸胃不適的事件屢見不鮮，主要原因是在制作過程中有雜菌混入。那么，怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？

應(yīng)該先對(duì)制作用具和原料進(jìn)行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發(fā)酵條件，避免雜菌進(jìn)入。酸奶這需要應(yīng)用無菌技術(shù)和微生物的培養(yǎng)技術(shù)19世紀(jì)中期，法國釀酒業(yè)曾一度遭到毀滅性打擊，生產(chǎn)的葡萄酒出現(xiàn)了變酸變味的怪事…法國科學(xué)家巴斯德發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致生產(chǎn)失敗的根源在于發(fā)酵物中混入了微生物。一、微生物概述1.微生物的概念：_________________________的統(tǒng)稱。難以用肉眼觀察的微小生物原核生物(細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌等)原生生物(如草履蟲、衣藻等)真菌(如酵母菌、霉菌等)病毒新冠病毒細(xì)菌草履蟲酵母菌2.研究和應(yīng)用微生物的前提（也是發(fā)酵工程的重要基礎(chǔ)）是：_______________________、_______________________。防止雜菌污染獲得純凈的微生物培養(yǎng)物3.實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的條件：①要為人們需要的微生物提供合適的___________條件；②要確保__________________，并將需要的微生物分離出來。營養(yǎng)和環(huán)境其他微生物無法混入

人們按照__________________________，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，即培養(yǎng)基。二、培養(yǎng)基的配制1.概念：微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求2.作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。3.類型：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有

無

瓊脂分離、計(jì)數(shù)、鑒定等擴(kuò)大培養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)長有酵母菌菌落盛有液體培養(yǎng)基劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基延伸：培養(yǎng)基的類型及用途培養(yǎng)基中加氨芐青霉素具有抗氨芐青霉素能力的菌落沒有氨芐青霉素抗性的細(xì)菌選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基+氨芐青霉素培養(yǎng)基

沒有抗氨芐青霉素能力的菌落被淘汰怎樣選擇出抗氨芐青霉素能力的細(xì)菌?采用__________培養(yǎng)基培養(yǎng)，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)____色。伊紅美藍(lán)黑以_____為惟一_____的培養(yǎng)基對(duì)土壤中的分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行篩選。氮源尿素當(dāng)需要酵母菌和霉菌時(shí)，可以在培養(yǎng)基中加入青霉素，以抑制細(xì)菌和放線菌的生長，從而分離出酵母菌和霉菌；在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽溶液可以抑制多種細(xì)菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，可以將金黃色葡萄球菌分離出來。通常在培養(yǎng)基中加入______指示劑，培養(yǎng)分離出的細(xì)菌，若指示劑變____，可以準(zhǔn)確地鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。因?yàn)榉纸饽蛩氐募?xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，使培養(yǎng)基的pH______。酚紅紅升高鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基4、培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成:（1）基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽。①碳源：無機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-有機(jī)碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等（自養(yǎng)微生物的碳源）（異養(yǎng)微生物的碳源）②氮源：無機(jī)氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等注：含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。③無機(jī)鹽：Ca、K、Mg為大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁〤、N等元素的營養(yǎng)物質(zhì)。特殊營養(yǎng)物質(zhì)：維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等（天然物質(zhì)牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）（2）還需滿足微生物對(duì)

的需求pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣④培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)，需要提供_____的條件。①培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，需要在培養(yǎng)基中添加_______；②培養(yǎng)霉菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至_____；③培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至_____________；維生素酸性中性或弱堿性無氧表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成組分含量提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000ml水例：某種細(xì)菌培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成5.培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：不同微生物需求不同，根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的進(jìn)行配制。(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。(3)pH要適宜：不同微生物適宜生長的pH范圍不同，可在培養(yǎng)基中添加緩沖劑維持pH穩(wěn)定。【基礎(chǔ)過關(guān)】(1)所有的培養(yǎng)基中都要加入瓊脂。()(2)是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源。(

)(3)培養(yǎng)霉菌時(shí)一般需將培養(yǎng)基調(diào)至堿性。(

)(4)培養(yǎng)厭氧型微生物時(shí)，除需要提供無機(jī)碳源之外，還需要提供無氧的條件。(

)××××(5)凡碳源都提供能量。（）(6)除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽。（）(7)無機(jī)氮源也可能提供能量。（）(8)培養(yǎng)基只能用于培養(yǎng)微生物。（）××√×

提示：培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)，需要提供無氧的條件，其碳源的類型要看其同化作用類型，若為自養(yǎng)型則需要提供無機(jī)碳源，若為異養(yǎng)型則需要提供有機(jī)碳源?！镜淅肯卤硎桥Ｈ飧嗟鞍纂伺囵B(yǎng)基的配方，分析回答：注：牛肉膏和蛋白胨來源于動(dòng)物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì).材料牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水用量5g10g5g20g定容至1000mL(1)根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，理由是_____________________________________________________________。(2)該培養(yǎng)基中主要提供碳源和氮源的物質(zhì)分別是什么？屬于有機(jī)物還是無機(jī)物？________________________________________________________。(3)該培養(yǎng)基培養(yǎng)的微生物同化作用類型是_____________，理由是_________________________________________________________。固體該培養(yǎng)基的配方中含有凝固劑瓊脂牛肉膏主要提供碳源，蛋白胨主要提供氮源。二者均屬于有機(jī)物異養(yǎng)型微生物該微生物的碳源和氮源是有機(jī)物(4)試從碳源和氮源的角度分析不同類型微生物所需的培養(yǎng)基成分的特點(diǎn)：

自養(yǎng)型生物異養(yǎng)型生物碳源CO2、Na2CO3等無機(jī)物__________________________氮源______________________________________________糖類等有機(jī)物NH3、硝酸鹽等無機(jī)物尿素、蛋白質(zhì)等有機(jī)物(1)培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物，通常需要提供無機(jī)碳源，如CO2、NaHCO3等；而培養(yǎng)異養(yǎng)型微生物，則需要提供有機(jī)碳源，如糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等。(2)如果培養(yǎng)基里沒有有機(jī)碳源，則通常培養(yǎng)的是自養(yǎng)型微生物；若含有有機(jī)碳源，則通常的為異養(yǎng)型微生物。(3)微生物最常用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常用的無機(jī)氮源是銨鹽和硝酸鹽。(4)對(duì)異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源和能源。牛肉膏和蛋白胨來源于動(dòng)物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)。(5)某些微生物之所以需要補(bǔ)充生長因子，往往是由于缺乏合成生長因子所需要的酶或合成能力有限。小結(jié)：(6)培養(yǎng)基的配方中沒有瓊脂，則通常為液體培養(yǎng)基；培養(yǎng)基的配方中含有瓊脂，則通常為固體或半固體培養(yǎng)基。擴(kuò)大培養(yǎng)獲得大量菌種時(shí)常用液體培養(yǎng)基。瓊脂在培養(yǎng)基中僅作為凝固劑，不能為微生物提供能量和營養(yǎng)。(7)病毒為非細(xì)胞結(jié)構(gòu)生物，只能在活細(xì)胞中營寄生生活。目前不能利用人工培養(yǎng)基來培養(yǎng)病毒，只有接種在活細(xì)胞或組織中，病毒才能增殖。三、無菌技術(shù)1.概念：_____________的培養(yǎng)微生物的操作技術(shù)。2.防止雜菌污染手段：主要包括____和____。（1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的____、操作者的________，進(jìn)行清潔和消毒。（2）將用于微生物培養(yǎng)的____、________和______等進(jìn)行滅菌。防止雜菌污染消毒滅菌空間衣著和手器皿接種用具培養(yǎng)基思考：無菌技術(shù)除用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么作用？還能有效避免操作者被微生物感染。超凈工作臺(tái)3.消毒（1）概念：

指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。（2）常用的消毒方法①煮沸消毒法：

100℃煮沸5～6min，可以殺死微生物的營養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢。②巴氏消毒法：62～65℃下消毒30min或80～90℃處理30s～1min適合一些不耐高溫的液體，如牛奶?？梢詺⑺琅Ｄ讨械慕^大多數(shù)微生物，并且不破壞牛奶的營養(yǎng)成分。用70%酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。③化學(xué)藥劑消毒法:④紫外線消毒法：

接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)在使用前可用紫外線照射30min?？蓺⑺牢矬w表面和空氣中的微生物。在照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果。4、滅菌（1）概念：指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。①芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。

芽孢壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時(shí)以后才死亡。②孢子細(xì)菌、原生動(dòng)物、真菌和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖作用的無性生殖細(xì)胞(繁殖體)。能直接發(fā)育成新個(gè)體。

（2）滅菌的方法：

①灼燒滅菌：酒精燈火焰灼燒效果：最徹底原理：使微生物燃燒對(duì)象：接種工具如接種環(huán)、接種針，以及接種過程中的試管口或瓶口等易被污染部位。

原理：使微生物細(xì)胞膜破壞、蛋白質(zhì)變性和原生質(zhì)干燥等

對(duì)象：適用于耐高溫，需保持干燥的物品。

玻璃器皿(如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器)

金屬器具(如針頭、鑷子、剪刀等)的滅菌②干熱滅菌：干熱滅菌箱內(nèi)160-170℃下加熱2-3h干熱滅菌箱原理：高溫蒸汽破壞蛋白質(zhì)、核酸等結(jié)構(gòu)使其變性優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，效果可靠，可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體。基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。對(duì)象：培養(yǎng)基等。注：使用后的培養(yǎng)基必須滅菌后才能丟棄，以免污染環(huán)境。③濕熱滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100kPa、121℃下維持15-30min.高壓蒸汽滅菌鍋類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活用品100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學(xué)藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時(shí)用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h濕熱滅菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等,生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,溫度121℃,15～30min接種室、接種箱，超凈工作臺(tái)小結(jié)：消毒與滅菌

某同學(xué)將5個(gè)手指尖在貼有“洗手前”標(biāo)簽的培養(yǎng)基上輕輕按一下；然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個(gè)指尖在貼有“洗手后”標(biāo)簽的同種培養(yǎng)基上輕輕按一下；將這兩個(gè)培養(yǎng)皿放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，發(fā)現(xiàn)貼有“洗手后”標(biāo)簽的培養(yǎng)皿中菌落較少。請(qǐng)分析回答下列問題。

【應(yīng)用探究】（1）這個(gè)材料中哪些材料用具需要滅菌處理？（2）從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，洗手后我們就能進(jìn)行無菌操作了嗎？操作時(shí)，我們可以采用什么方法來避免手上的微生物的污染？培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基

不能用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒；實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在超凈工作臺(tái)并在酒精燈火焰附近進(jìn)行(1)獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。()(2)滅菌相比消毒對(duì)微生物的殺滅更徹底。(

)(3)無菌操作的對(duì)象只要是沒有生物活性的材料(如培養(yǎng)基、接種環(huán)等)都可采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。()提示：培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌，而接種環(huán)則采用灼燒滅菌。(4)培養(yǎng)基最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。(

)（5）接種環(huán)、接種針等金屬用具，直接在酒精燈火焰的內(nèi)焰部位灼燒滅菌。（）（6）在實(shí)驗(yàn)室中，切不可吃東西、喝水，離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，防止被微生物感染。（）（7）使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。（）√√×√【基礎(chǔ)過關(guān)】×√√【典例】微生物培養(yǎng)過程中，要重視無菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無菌操作，防止雜菌污染，請(qǐng)分析下列操作，正確的是(

)A.煮沸消毒法中100℃煮沸5～6min可以殺死全部微生物的細(xì)胞和芽孢、孢子B.將接種環(huán)直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌C.加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌D.家庭制作葡萄酒時(shí)要將容器和葡萄進(jìn)行滅菌B培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)消毒滅菌微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)【課堂小結(jié)】培養(yǎng)基無菌技術(shù)按物理性質(zhì)劃分按組成成分劃分按功能劃分基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽特殊需求：維生素（如乳酸桿菌）、堿基等煮沸消毒巴氏消毒紫外線消毒化學(xué)藥劑消毒濕熱滅菌干熱滅菌灼燒滅菌檢測(cè)1.下列有關(guān)以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物所需營養(yǎng)物質(zhì)的描述中，錯(cuò)誤的是(

) A.銨鹽和硝酸鹽等無機(jī)氮為該微生物提供必要的氮素 B.碳源物質(zhì)不是該微生物的能源物質(zhì) C.水、無機(jī)鹽也是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì) D.瓊脂是該微生物的營養(yǎng)要素之一

解析銨鹽和硝酸鹽等無機(jī)氮為該微生物提供必要的氮素，A正確；以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物，二氧化碳不是該微生物的能源物質(zhì)，B正確；水、無機(jī)鹽也是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)，C正確；瓊脂是凝固劑，不是該微生物的營養(yǎng)要素之一，D錯(cuò)誤。D編號(hào)成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml（1）如表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是

。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入

.自養(yǎng)型微生物

含碳有機(jī)物

檢測(cè)2.如表是某微生物培養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答：固氮微生物

（3）若除去成分②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

。傳統(tǒng)發(fā)酵通常直接利用原材料中天然酵母菌工業(yè)生產(chǎn)通常使用人工選育的高活性釀酒酵母如何獲得純種酵母菌？四、微生物的純培養(yǎng)1.培養(yǎng)物：在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體成為培養(yǎng)物；2.純培養(yǎng)物、純培養(yǎng)：由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。（一）相關(guān)概念：微生物群分散或稀釋單個(gè)細(xì)胞單個(gè)菌落繁殖3.菌落：分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。（注：菌落屬于種群；不同菌落的大小、形狀、隆起程度、顏色等不同）（二）純培養(yǎng)的步驟包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)——酵母菌的純培養(yǎng)（1）配制培養(yǎng)基稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向?yàn)V液中加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml（定容）。1.制備培養(yǎng)基（2）滅菌將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃滅菌2h。培養(yǎng)基：用高壓蒸汽滅菌鍋濕熱滅菌培養(yǎng)皿：在干熱滅菌箱內(nèi)干熱滅菌（3）倒平板待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。①拔出錐形瓶的棉塞②將瓶口迅速通過火焰③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋倒平板的具體操作步驟：④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒轉(zhuǎn)過來放置目的：既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。思考討論：1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。2.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。4.怎么確定所倒平板未被雜菌污染？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。2.接種和分離酵母菌通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)可以分離得到單菌落。(1)原理：單個(gè)細(xì)胞微生物群單個(gè)菌落連續(xù)劃線分散或稀釋生長繁殖(2)方法：“平板劃線法”①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞③試管口通過火焰④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞⑥將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線“平板劃線法”實(shí)驗(yàn)操作第1區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第2區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第3區(qū)劃線接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌12345①接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次

②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行滅菌，劃線結(jié)束后也要滅菌④劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)（3）平板劃線法注意事項(xiàng)

分區(qū)劃線法（最常用）（4）平板劃線法中，三種灼燒接種環(huán)操作的目的連續(xù)劃線法（1）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個(gè)細(xì)胞殺死接種環(huán)上原有微生物灼燒時(shí)期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后思考討論：⑵在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？⑶在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。2023/10/203.培養(yǎng)酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h。思考1：為什么要將平板倒置？思考2：為什么要同時(shí)放入未接種的平板？既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染作對(duì)照，該培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染（2）在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了單菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小是否一致？如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？在接種酵母菌的培養(yǎng)基上可觀察到單菌落。如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特點(diǎn)，則說明純化酵母菌的操作成功；如果觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純或者無菌操作不規(guī)范等原因引起的。（3）你是如何記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的？可以在培養(yǎng)12h和24h后，觀察菌落的大小、形狀、顏色。培養(yǎng)24h后，菌落的大小、形狀是否發(fā)生變化，菌落顏色是否加深，光澤度是否增加，等等。4.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（1）在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有，說明了什么？在未接種的培養(yǎng)基表面應(yīng)該沒有菌落生長，如果有，說明培養(yǎng)基被雜菌污染或滅菌不徹底。評(píng)估論點(diǎn)的可信程度

所謂“酵素”，就是“酶”的另一種說法。“酵素”制作就是利用微生物進(jìn)行無氧呼吸的原理，進(jìn)行像制作泡菜一樣的發(fā)酵。這樣制作的“酵素”中可能有糖類(包括-些簡單的糖和膳食纖維等)、蛋白質(zhì)(包括多種酶)、有機(jī)酸等成分，不存在它獨(dú)有的、特殊的營養(yǎng)物質(zhì)，其中甚至可能含有微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，食用后可能會(huì)危害人體健康。因此，“吃水果酵素可以美容、減肥、促進(jìn)消化和提高免疫力”的論點(diǎn)值得懷疑。(1)倒平板操作中，等待平板冷卻凝固后，要將平板倒置。()(2)平板劃線操作中，劃完一個(gè)區(qū)域后要將接種環(huán)灼燒，再劃下一個(gè)區(qū)域。(

)(3)平板劃線法接種時(shí)，每一次劃線前都要蘸取菌種。()解析：平板劃線法接種時(shí)，僅在第一次劃線前蘸取菌種，不能每一次劃線前都蘸取菌種。(4)需要將一個(gè)不接種的培養(yǎng)基放在相同的條件下培養(yǎng)，以檢驗(yàn)培養(yǎng)基的滅菌是否合格。()（5）倒平板時(shí)將培養(yǎng)皿的皿蓋拿開，以便于將錐形瓶中