獸醫(yī)健康計劃

獸醫(yī)健康計劃一、 獸醫(yī)健康計劃（VHP）適用者名稱：國聯(lián)南三島對蝦育苗養(yǎng)殖科研示范基地地址：廣東省湛江市坡頭區(qū)南三島旅游區(qū)西南部二、 病害防控病毒性疾病1.1對蝦白斑綜合癥（WSSV）1.1.1病癥發(fā)病初期出現(xiàn)厭食、攝食減少，活力下降；發(fā)病中期蝦體皮下、甲殼內(nèi)側(cè)及附肢出現(xiàn)白色斑點，部分蝦體出現(xiàn)空胃，中腸腺內(nèi)膜組織局部壞死；發(fā)病后期，對蝦停止攝食，肝胰腺呈棕黃色，病害呈暴發(fā)性，死亡率高，因此又叫暴發(fā)性白斑病。1.1.2防治方法1.1.2.11.1.2.21.1.2.11.1.2.21.1.2.3經(jīng)常在餌料中添加微生物制劑和能增強蝦體免疫能力的微量元素在疾病流行季節(jié)，每半月潑灑1次生石灰，用量10-15g/立方米水體，或每星期全池潑灑1次溴氯海因復(fù)合劑，用量0.3g/立方米水體，定期消毒和調(diào)節(jié)水質(zhì)。1.1.2.4在整個養(yǎng)殖周期里，經(jīng)常采用生物制劑改善和穩(wěn)定水質(zhì)。1.2桃拉綜合癥（TSV）1.2.1病癥該病急性病程約2-5天。發(fā)病蝦不食、昏睡，體色素擴散；部分蝦體肌肉呈暗紅色，尾部和足發(fā)紅，積累死亡率從5-100%。TSV流行后殘存的蝦在外觀上無任何癥狀或壞死。成蝦多為慢性，死亡率通常小于50%，其外殼多處有壞死區(qū)域。1.2.2防治方法1.2.2.1加強對苗種的健康檢測。1.2.2.2在疾病流行季節(jié)，每半月潑灑1次生石灰，用量10-15g/立方米水體，或每5-7天全池潑灑二溴海因復(fù)合劑防病，用量0.2g/立方米水體。發(fā)病時全池潑灑季氨鹽絡(luò)合碘，用量1g/立方米水體。1.2.2.3經(jīng)常在餌料中添加有益微生物制劑合能增強蝦體免疫能力的微量十非AjV7元等o1.2.2.4在整個養(yǎng)殖周期里，經(jīng)常采用生物制劑調(diào)節(jié)水質(zhì)。細菌性疾病2.1對蝦爛鰓病（由弧菌及一些桿菌污染引起）2.1.1病癥對蝦爛鰓呈灰色、腫脹，嚴(yán)重時鰓尖端潰爛、脫落，有的鰓絲在潰爛邊緣呈褐色，有的在潰爛組織與不潰爛組織的交接處形成黑褐色分界線。病重的蝦浮于水面、游動緩慢、反應(yīng)遲鈍，特別是在池中溶解氧不足時，病蝦逐步死亡。2.1.2防治方法2.1.2.1徹底清塘，合理放養(yǎng)密度，改善水質(zhì)，防止投餌過量，造成殘餌分解，敗壞水質(zhì)。2.1.2.2夏季高溫季節(jié)，池底呈酸性時，可適當(dāng)潑灑生石灰，每畝用量5-8kg。養(yǎng)殖期間定期投放生物制劑等調(diào)節(jié)水質(zhì)。2.1.2.3在發(fā)病季節(jié)，定期潑灑生石灰或二溴海因等消毒劑。2.2對蝦紅腿病2.2.1流行情況該病在全國養(yǎng)蝦地區(qū)都有流行，常呈急性型，發(fā)病率合死亡率都很高，達90%以上。該病多發(fā)生在7月上旬以后高溫季節(jié)。該病的流行與池底不清淤、不消毒，池水交換不良，放養(yǎng)密度過大等有關(guān)。2.2.2病癥病蝦在池邊水面緩慢游動，活力減弱或沉底不動，有時做旋轉(zhuǎn)游動或垂直游動，反應(yīng)遲鈍，食欲減退或停止；個體消瘦，甲殼與肌肉間空隙大，頭胸甲心區(qū)上方由青色透明變?yōu)榘咨僮優(yōu)榈奂t色，形狀為三角形；突出癥狀是附肢變紅，游泳足最先變紅，以后步足及尾肢也呈鮮紅色。2.2.3防治方法2.2.3.1防治投餌過量，造成殘飼分解，敗壞水質(zhì)，保持良好的水質(zhì)。2.2.3.2養(yǎng)成期定期使用生物制劑，確保水質(zhì)良好。固著類纖毛蟲病3.1病癥患此病的蝦體，眼觀可見身體表面似絨毛狀。在低倍顯微鏡下可看到蝦體的體表有許多蟲體附著。3.2流行情況該病容易發(fā)生在池水污濁、換水量小、白對蝦發(fā)育緩慢的育苗池中。成蝦體表上有少數(shù)蟲體附著是常見的，危害性不明顯，但當(dāng)有大量蟲體附著時，可引起對蝦大量死亡。3.3防治方法3.3.1蓄水池的水用生石灰或漂白粉徹底消毒。3.3.2因目前還沒有發(fā)現(xiàn)在幼體能耐受的濃度下殺死固著類纖毛蟲的有效藥物，所有如發(fā)現(xiàn)幼體上有固著類纖毛蟲時，可加大換水量，改善水質(zhì)環(huán)境，促使幼體盡快蛻皮，就可控制病害。絲狀藻類附著病4.1病因該病是因藻類附著于蝦體引起的。常見有綠藻類、剛毛藻以及褐藻類等。4.2病癥病蝦體上呈叢附生上述絲狀藻類，呈綠色或褐色，飄飄搖搖；嚴(yán)重者在全身體表、包括眼球部長滿藻類。病蝦游動緩慢，攝食困難，生長停止。4.3流行情況各地對蝦都可發(fā)生，當(dāng)主要發(fā)生在池水中浮游生物太少，透明度太大的蝦池。絲狀藻類在蝦池的淺水處可大量繁殖，成叢的生長，妨礙蝦的行動，甚至引起缺氧浮頭或死蝦。4.4防治方法4.4.1生石灰全池潑灑，促使白對蝦蛻皮。4.4.2水較清時應(yīng)及時施肥或生物制劑，有效調(diào)控池塘水透明度小于45cm。三、藥物使用方法1?阿維菌素理化性質(zhì)：易溶于有機溶劑，不易溶于水。一般制劑為乳油。常用二甲苯、甲苯作溶劑，也可用甲醇或乙醇。含量市場常見為0.1%T.8%。水產(chǎn)用途：主要用于枝角類、橈足類、魚鲺、錨頭鳋、中華鳋、線蟲、指環(huán)蟲、三代蟲、棘頭蟲、水蜈蚣等寄生蟲的驅(qū)除與殺滅。但對絳蟲、吸蟲、原蟲無效。另外也用于蝦蟹混養(yǎng)池塘的殺蟲、驅(qū)蟲。使用劑量：蝦塘：10克青蝦24小時半致死濃度：4.44克/畝。休藥期：35天。2?伊維菌素別名：害獲滅、艾佛菌素、愛比菌素、伊力佳、百蟲殺等水產(chǎn)用途：本品為阿維菌素的衍生物，屬口服半合成的廣譜抗寄生蟲藥。對各生活史階段的大部分線蟲均有作用；基本作用用途同阿維菌素。但內(nèi)服時可用于指環(huán)蟲、三代蟲的驅(qū)除與殺滅。使用劑量：全池潑灑時魚池劑量：0.1克/畝。蝦池0.5克/畝，內(nèi)服時0.3mg/kg體重。休藥期：35天。敵百蟲成分：白色晶體。在中性或堿性溶液中發(fā)生水解，生成敵敵畏，水解進一步繼續(xù)，最終分解成無殺蟲活性的物質(zhì)。作用與用途：對于指環(huán)蟲、三代蟲，腸道內(nèi)的蠕蟲（絳蟲，棘頭蟲）和甲殼類動物（錨頭鳋、中華鳋、魚鲺）等引起的魚病。另外對于枝角類、橈足類等亦有效。用法與用量：解毒：1、換水。2、投喂解毒劑（吸附型）。3、內(nèi)服肝膽泰樂。休藥期：7天4?聚維酮碘（PV碘）成分：聚維酮碘又名聚乙烯吡咯酮碘簡稱PVP-I,為黃棕色至紅棕色無定形粉末，在水或乙醇溶液中溶解，溶液呈紅棕色，酸性。用途：主要用于蝦塘、水生動物體表消毒。PV碘在水中的穩(wěn)定性強，作用時間長，對魚、蝦無刺激性和過敏反應(yīng)，同時在水體中兼具清潔、去污、除臭等功能。其殺菌活性會受到池塘中有機物污染程度的影響，故在有機物污染嚴(yán)重的池塘中使用PVP-I時應(yīng)加大用藥量。用法用量：3ppm全池潑灑停藥期：消毒劑，無。5?漂白粉成分：漂白粉為次氯酸鈣、氯化鈣和氫氧化鈣的混合物，灰白色顆粒性粉末，有氯臭味，微溶于水，受陽光照射或吸潮后易失效，應(yīng)密封儲存于陰涼干燥處。有效氯含量不得少于25.0%。用途：漂白粉發(fā)揮更佳的殺菌效果必須在偏酸的環(huán)境中進行，而魚蝦一般都在中性偏堿性的環(huán)境中生長，故漂白粉一般不用于魚、蝦養(yǎng)殖過程中的水體消毒，而是用于池塘的清塘消毒。用法用量：帶水清塘每畝每米水深用量為12?15Kg。停藥期：消毒劑，無。高錳酸鉀成分：高錳酸鉀別名為灰錳氧、錳酸鉀、錳強灰，黑紫色結(jié)晶體，具有藍色的金屬光澤，無臭、易溶于水，液體為玫瑰色，是一種極不穩(wěn)定的強氧化劑。用途：用高錳酸鉀進行魚體消毒可防治錨頭鳋病、指環(huán)蟲病、三代蟲病、細菌性病等許多魚類疾病，并具有解毒、除臭作用。用法用量：高錳酸鉀的殺菌效力與水中有機物含量及水溫有關(guān)：在有機物含量高時，本品易分解失效，此時可適當(dāng)調(diào)整其用量。水溫高時，高錳酸鉀的氧化作用增強。以高錳酸鉀作消毒劑時，其用量要根據(jù)水質(zhì)和水溫條件而靈活掌握。停藥期：消毒劑，無。生石灰成分：生石灰別名氧化鈣，為白色或灰白色硬塊；無臭；易吸收水份，水溶液呈強堿性。在空氣中吸收二氧化碳，逐漸變成碳酸鈣而失效。生石灰是無機鹽類中最常用的一種消毒藥物，即可作為消毒劑，又可作為水質(zhì)改良劑。用途：生石灰能提高水體堿度，調(diào)節(jié)池水pH,能與銅、鋅、鐵等結(jié)合而減輕水體毒性，中和池內(nèi)酸度，增加CO2，提高水生植物對鈣、磷的利用率，促進池底厭氧菌群對有機質(zhì)的礦化和腐殖質(zhì)分解，使水中懸浮的膠體顆粒沉淀，透明度增加，水質(zhì)變肥，有利于浮游生物繁殖，保持水體良好的生態(tài)環(huán)境；可改良底質(zhì)，提高池水的透明度，增加鈣肥，為動植物提供相應(yīng)的營養(yǎng)物質(zhì)。用法用量：干法消毒時，每畝用量60~80Kg，帶水清塘?xí)r每畝每米水深用量100~150Kg，使塘水pH值保持11以上兩個小時，可有效清除池塘中的野雜魚、蝦、螺和病原體；作為水質(zhì)改良時每畝每米水深用量15—20Kg。停藥期：消毒劑，無。四、生物安全程序目的及時發(fā)現(xiàn)和糾正生產(chǎn)工作中不符合生物安全要求的行為活動，保證生產(chǎn)過程中的生物安全。適用范圍養(yǎng)殖場中所有不符合生物安全要求的活動。3?職責(zé)生物安全負責(zé)人負責(zé)控制生物安全體系活動中的不符合項，提出并組織實施糾正活動或糾正措施。過程要求4.1養(yǎng)殖場的管理人員、工作人員應(yīng)從以下場合和環(huán)節(jié)中來識別生產(chǎn)工作的任何方面的偏離或該工作的結(jié)果不符合工作程序:人員差錯;方法和方法確認的缺陷；環(huán)境條件失控；儀器設(shè)備差錯；消耗材料（含試劑）的差錯；消毒方法和試劑溯源失控；原始記錄差錯；數(shù)據(jù)處理差錯；報告差錯；存在的改進機會；委托方的抱怨。4.2當(dāng)養(yǎng)殖場全體工作人員發(fā)現(xiàn)或識別偏離生物安全程序和不符合生物安全工作己經(jīng)形成時，應(yīng)立即向檢驗負責(zé)人報告，檢驗負責(zé)人向生物安全負責(zé)人報告，米取以下措施：4.2.1提出并判斷偏離或差錯的嚴(yán)重程度；4.2.2立即采取糾正措施（包括責(zé)令操作人員中止偏離活動、暫停工作、通知停發(fā)實驗報告等）；4.2.3根據(jù)偏離生物安全的程度和不符合生物安全工作可能造成后果的嚴(yán)重性以及是否可能還會繼續(xù)發(fā)生，及時向生物安全負責(zé)人報告，同時填寫《糾正和預(yù)防措施報告》4.2.4對于一般性的偏離，則只需實施暫停生產(chǎn)或?qū)嵤┘m正偏離，填寫《糾正和預(yù)防措施報告》4.2.5生物安全負責(zé)人判斷不符合生物安全工作可能再度發(fā)生時，應(yīng)制定糾正措施實施計劃，責(zé)成有關(guān)技術(shù)小組人員立即實施糾正措施。4.2.6生物安全負責(zé)人負責(zé)糾正措施的驗證。4.2.7對一般不符合工作，糾正后即可恢復(fù)工作，對嚴(yán)重不符合工作由生物安全負責(zé)人視糾正措施的有效性決定是否恢復(fù)試驗工作。4.3生物安全負責(zé)人在日常工作中發(fā)現(xiàn)生物安全體系活動不符合規(guī)定程序或管理制度時應(yīng)采取如下行動：4.3.1提出并判定偏離或差錯的嚴(yán)重性；4.3.2立即采取糾正活動；4.3.3視偏離的嚴(yán)重程度和可能造成后果的嚴(yán)重性及時向管理負責(zé)人報告，同時填寫《糾正和預(yù)防措施報告》4.3.4生物安全負責(zé)人判斷不符合生物安全工作可能再度發(fā)生時，應(yīng)制定糾正措施實施計劃，責(zé)成相關(guān)人員立即實施糾正措施，并驗證糾正措施實施的有效性。4.4不符合生物安全生產(chǎn)工作責(zé)任者的處理：4.4.1對一般不符合工作責(zé)任者，由生物安全負責(zé)人視情節(jié)給予批評或警告，并指定專人對其進行相應(yīng)的教育和培訓(xùn)。4.4.2對嚴(yán)重不符合工作責(zé)任者，由生物安全負責(zé)人視情節(jié)嚴(yán)重程度、本人工作能力、工作態(tài)度和造成的影響和后果，可以暫停責(zé)任者的工作。五、病原體篩選計劃寄生蟲類病原體將懷疑患病的蝦取一小片段的器官，如鰓或肝胰臟，加上一小滴蒸餾水或潔凈的海水，并用蓋玻片輕輕的壓下，然后放在200-400倍的顯微鏡下觀察。則可看出是寄生蟲（如鐘形蟲）還是細菌的感染癥狀，根據(jù)此觀察結(jié)果則可迅速進行各項必要的處理步驟。如若是寄生蟲類的病原體，則根據(jù)寄生蟲的生物學(xué)特征進行鑒定。細菌性病原體2.1.病料采集病料的種類主要決定于疫病的性質(zhì)，一般方法為：全身感染一血液及內(nèi)臟；局部感染f病患部位；特殊病例一特殊處理。特殊情況的正確處理與操作者的專業(yè)知識有很大關(guān)系。無論全身或局部感染，均應(yīng)采含菌最多或病變明顯的組織病料的采集時間也應(yīng)特別注意：活體病料一應(yīng)考慮病原在疾病發(fā)展過程中部位的變化；患畜死后f應(yīng)立即米集病料，越早越好。?無菌操作無菌操作是指在微生物研究過程中，既要避免各種外界的微生物進入操作對象又要杜絕操作對象污染周圍環(huán)境的操作技術(shù)。無菌操作是對微生物學(xué)工作者最基本的要求，必須經(jīng)過嚴(yán)格訓(xùn)練才能形成無菌操作素養(yǎng)。不論何種情況下，頭腦中都應(yīng)該有這個概念。無菌操作貫穿于整個分離過程，例如：病料的采集、器材的準(zhǔn)備、具體的操作。所用器械及物品均應(yīng)事先滅菌備用，金屬器具包裝后高壓滅菌或煮沸30min,玻璃器皿可高壓滅菌也可干熱滅菌，膠皮塞、培養(yǎng)基等則要高壓滅菌。.培養(yǎng)基培養(yǎng)基是指由人工方法配合而成的，用于微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、研究和保存菌種用的混合營養(yǎng)制品。制作培養(yǎng)基的基本原則依據(jù)細菌的物質(zhì)代謝要求和營養(yǎng)需要，必須含有細菌生長繁殖所需要的碳源、氮源、礦物質(zhì)以及生長環(huán)境條件。制作培養(yǎng)基的基本要求適宜的水分和各種營養(yǎng)物質(zhì)；適宜的酸堿度與滲透壓；不含抑制細菌生長的物質(zhì)；應(yīng)均質(zhì)透明；應(yīng)徹底滅菌；對某些微生物必須提供一些特殊物質(zhì)。（3）培養(yǎng)基的種類基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有一般細菌生長繁殖需要的基本營養(yǎng)物質(zhì)；可作為一些特殊培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。加富培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)（如血液/血清、酵母浸膏或生長因子等）；用以培養(yǎng)對營養(yǎng)要求高的微生物。選擇培養(yǎng)基：利用細菌對某種或某些化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同；在培養(yǎng)基中加入這類物質(zhì)，利于所需分離的細菌生長，而抑制不需要的細菌生長，從而達到分離某種微生物的目的。鑒別培養(yǎng)基：是一類含有某種特定化合物或試劑的培養(yǎng)基。某種細菌在這種培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，能與這種特定化合物或試劑發(fā)生某種明顯的特征性反應(yīng)；從而達到區(qū)分不同的微生物。厭氧培養(yǎng)基：利用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法，去除氧氣后的培養(yǎng)基；可用于厭氧性細菌的分離和培養(yǎng)。2.4.細菌在培養(yǎng)基上的生長情況（1）固體培養(yǎng)基單個細菌在培養(yǎng)基表面生長、繁殖到一定程度時形成的肉眼可見的子細胞群落稱為菌落，它是由數(shù)以萬計相同的細菌集合而成。眾多細菌在固體培養(yǎng)基表面密集生長所形成的細胞群體稱為菌苔。菌落的形態(tài)特征大小、形狀（露滴狀、圓形、菜花樣、不規(guī)則等）突起或扁平、凹陷、邊緣（光滑、波形、鋸齒狀、卷發(fā)狀等）、顏色（紅色、灰白色、黑色、綠色、無色、黃色等）、表面（光滑、粗糙等）透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。據(jù)細菌菌落表面特征不同，可將菌落分為3型：光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、濕潤、邊緣整齊，新分離的細菌大多呈光滑型菌落。粗糙型菌落（R型菌落）：菌落表面粗糙、干燥、呈皺紋或顆粒狀，邊緣大多不整齊。R型菌落多為S型細菌變異失去菌體表面多糖或蛋白質(zhì)形成。R型細菌抗原不完整，毒力和抗吞噬能力都比S型細菌弱。但也有少數(shù)細菌新分離的毒力株就是R型，如炭疽抱桿菌、結(jié)核分枝菌等。粘液型菌落（M型菌落）：菌落粘稠、有光澤、似水珠樣。多見于厚莢膜或豐富粘液層的細菌、結(jié)核桿菌等。菌落溶血特征a溶血：又稱草綠色溶血，菌落周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)1~2mm的草綠色環(huán)，為高鐵血紅蛋白所致；P溶血：又稱完全溶血，菌落周圍形成一個完全清晰透明的溶血環(huán)，是細菌產(chǎn)生的溶血素使紅細胞完全溶解所致；Y溶血：即不溶血，菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化，紅細胞沒有溶解或缺損。色素有些細菌產(chǎn)生水溶性色素，使菌落和周圍的培養(yǎng)基出現(xiàn)綠色、金黃色、白色、橙色、檸檬色等顏色，產(chǎn)生的色素有水溶性或脂溶性。氣味某些細菌在培養(yǎng)基中生長繁殖后可產(chǎn)生特殊氣味，如銅綠假單胞菌（生姜氣味）、變形桿菌（巧克力燒焦的臭味）、厭氧梭菌（腐敗的惡臭味）、白色假絲酵母菌（酵母味）和放線菌（泥土味）等。（2） 液體培養(yǎng)基細菌在液體培養(yǎng)基中有3種生長現(xiàn)象：大多數(shù)細菌在液體培養(yǎng)基生長繁殖后呈均勻混濁；少數(shù)鏈狀排列的細菌如鏈球菌、炭疽芽胞桿菌等則呈沉淀生長；枯草芽胞桿菌、結(jié)核分枝桿菌和銅綠假單胞菌等專性需氧菌一般呈表面生長，常形成菌膜。（3） 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基主要用于細菌動力試驗，有鞭毛的細菌除了沿穿刺線生長外，在穿刺線兩側(cè)也可見羽毛狀或云霧狀混濁生長。無鞭毛的細菌只能沿穿刺線呈明顯的線狀生長，穿刺線兩邊的培養(yǎng)基仍然澄清透明，為動力試驗陰性。2.5.分離細菌所要滿足的培養(yǎng)條件（1）適宜的培養(yǎng)基條件；（2）適宜的溫度條件；（3）適宜的氣體條件。2.6細菌的分離方法細菌分離就是把病料中的病原菌或把目的菌從微生物的混合材料中分離培養(yǎng)出來，并獲得目的菌的單一生長材料，從而進行診斷及有關(guān)研究工作。待檢材料的處理無菌采集的病料不經(jīng)處理可直接用于分離；污染較嚴(yán)重的病料，接種前必須處理后方可進行分離培養(yǎng)。（1） 加熱處理法當(dāng)懷疑病原菌為芽胞菌時，可加入5-10倍滅菌生理鹽水研磨（液體病料除外），75°C水浴30min（或80°C15-20min），可殺死細菌繁殖體（包括雜菌及病原菌）；然后將處理過的病料接種到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上。（2） 接種易感動物把病料接種易感動物，待其發(fā)病死亡后，取其血液或組織器官，接種到培養(yǎng)基上。利用此方法不但可以從污染的材料中分離出病原菌，而且還可以確定病原菌的毒力。（3） 化學(xué)藥品處理有些化學(xué)藥品對某些細菌有極強的抑制力，而對另一些細菌則沒有抑制作用或很小。因此可將適宜的化學(xué)藥品加入培養(yǎng)基中。如龍膽紫則可抑制許多G+菌的繁殖，有利于G—菌的分離培養(yǎng)；2.6.2.平板劃線分離培養(yǎng)法（1）培養(yǎng)基平板的準(zhǔn)備取普通瓊脂培養(yǎng)基或含有特殊成分的瓊脂培養(yǎng)基，融化并讓其冷卻至50C左右，傾入滅菌平皿中，每個平皿約15mL，使其分布均勻，冷卻凝固后即為固體平板培養(yǎng)基。各種物品的準(zhǔn)備取出待檢病料，置于工作臺上；接種前準(zhǔn)備好酒精燈、接種環(huán)、火柴、酒精棉球、試管架等。如有超凈工作臺，應(yīng)先打開通風(fēng)機，過濾除塵，如有紫外線燈應(yīng)同時打開，10T5min后可開始工作。不論在桌面上還是在超凈工作臺上接種，都要事先作好準(zhǔn)備工作，把所用的物品器械擺好。平板劃線以左手持平板，中指、無名指和小指托著平板底，拇指和食指打開上蓋，使蓋與底成30o角，以便劃線。右手握接種環(huán)，先滅菌鉑絲部分，待絲燒紅后，再于火焰上滅菌金屬棒部分。把接種環(huán)上的病料涂在培養(yǎng)基一側(cè)，一般作5-8次劃線。將環(huán)上的多余細菌材料燒掉后，從第1次劃線引出第2次劃線；再從第2次劃線引出第3次劃線，如此反復(fù)3-4次劃線后，即可把整個平板表面劃滿，注意每一次劃線只能與上一次劃線重疊，這樣就可在最后的1-2次劃線上出現(xiàn)多量的單個菌落，以便進行純培養(yǎng)。培養(yǎng)物的觀察病料在接種培養(yǎng)基后，經(jīng)過一段時間，應(yīng)取出來檢查其生長狀況。首先用肉眼檢查有無細菌生長；若有，則需進一步檢查菌落是否純一。當(dāng)從臨床病料中分離細菌時：多數(shù)情況下，沿劃線生長較多的菌落，是待檢病原菌的可能性較大；少數(shù)零散分布或不在劃線上生長的菌落，多為雜菌。為慎重起見，可挑選若干個可疑菌落分別進行鑒定。2.6.3.厭氧菌的分離培養(yǎng)法通常使用物理去氧、化學(xué)去氧和生物去氧，實驗室常用：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧肉湯。2.6.4.細菌的純培養(yǎng)與移植接種分離培養(yǎng)的目的就是要獲得純培養(yǎng)。細菌的純培養(yǎng)就是只含一種細菌的培養(yǎng)物，最理想的純培養(yǎng)是一個細菌的后代。細菌的移植接種就是把某種細菌材料移種到一個新的培養(yǎng)基上，使它在其上生長。2.7細菌的毒力檢測毒力的概念同種病原微生物不同菌株或毒株的不同程度的致病能力。即致病性的強弱。構(gòu)成毒力的物質(zhì)稱為“毒力因子”2.7.2?構(gòu)成毒力的因素細菌毒力的強弱主要取決于兩大方面：侵襲力和毒素(1)侵襲力指微生物突破宿主機體防衛(wèi)屏障，侵入宿主活組織并在其中生長繁殖和向四周擴散的能力。包括：侵襲性酶和菌體表面結(jié)構(gòu)。侵襲性酶屬胞外酶，對細菌本身無毒性作用；但可破壞機體內(nèi)的一些防止或減低異物向組織內(nèi)滲透的物質(zhì)，從而在感染過程中協(xié)助病原菌抗吞噬或擴散。菌體表面結(jié)構(gòu)G—菌：菌毛，受體是糖蛋白。G+菌：菌體表面的突出物。如A型鏈球菌的膜磷壁酸，受體是類蛋白和糖蛋白莢膜和微莢膜：有抗吞噬、抗體液中殺菌物質(zhì)的作用，使病原菌能留在宿主體內(nèi)迅速繁殖，產(chǎn)生病變。所以有莢膜的細菌的毒力比該種細菌失去莢膜時的毒力明顯增強。毒素(Toxin)有些病原微生物能產(chǎn)生強有力的特殊毒性物質(zhì)，可大大增強微生物的毒害作用，這種毒性物質(zhì)就叫做毒素。毒力島(pathogenicityisland，PAI)毒力島也稱致病島；是指細菌染色體上分子量較大(通常＞30kb)、G+Cmol%及密碼使用與宿主菌染色體有明顯差異的毒力基因簇。許多病原菌中都存在毒力島，毒力島和病原菌的毒力進化密切相關(guān)。目前已在致病性大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、耶爾森氏菌、幽門螺桿菌、霍亂弧菌等細菌中發(fā)現(xiàn)毒力島的存在。致病性大腸桿菌常見的毒力島：LEE毒力島(locusofenterocyteeffacement)“黏附和抹平"(attachingandeffacing，A/E)耶爾森氏菌強毒力島(highpathogenicityisland，HPI)鐵的攝取、色素沉著、鼠疫菌素毒力因子的檢測免疫學(xué)方法細胞試驗動物試驗毒力基因的檢測六、藥物殘留風(fēng)險評估農(nóng)產(chǎn)品中藥物殘留的風(fēng)險評估農(nóng)藥使用的目的是為了保護農(nóng)作物免受病蟲害的侵襲，然而農(nóng)藥在使用后一般會在目標(biāo)作物上、使用者身上、其他相關(guān)人、物以及環(huán)境中產(chǎn)生相應(yīng)的農(nóng)藥殘留。控制這種風(fēng)險，就要從農(nóng)藥的使用量、所造成的殘留范圍以及它們的作用效果和致命性上，以及該農(nóng)藥的其他來源方式和其他的相關(guān)農(nóng)藥的暴露作全面的風(fēng)險評估。2?風(fēng)險評估的過程2.2.1農(nóng)藥殘留危害的識別根據(jù)目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上常用農(nóng)藥(原藥)的毒性綜合評價(急性口服、經(jīng)皮毒性、慢性毒性等)，分為高毒、中等毒、低毒3類。高毒農(nóng)藥(LD50＜50mg/kg)有：3911、蘇化203、1605、甲基1605、1059、殺螟威、久效磷、磷胺、甲胺磷、異丙磷、三硫磷、氧化樂果、磷化鋅、磷化鋁、氰化物、咲喃丹、氟乙酰胺、砒霜、殺蟲脒、西力生、賽力散、潰瘍凈、氯化苦、五氯酚、二溴氯丙烷、401等。中等毒農(nóng)藥(LD5。在50?500mg/kg)有：殺螟松、樂果、稻豐散、乙硫磷、亞胺硫磷、皮蠅磷、六六六、高丙體六六六、毒殺芬、氯丹、滴滴涕、西維因、害撲威、葉蟬散、速滅威、混滅威、抗蚜威、倍硫磷、敵敵畏、擬除蟲菊酯類、克瘟散、稻瘟凈、敵克松、402、福美砷、稻腳青、退菌特、代森胺、代森環(huán)、2,4一D、燕麥敵、毒草胺等。低毒農(nóng)藥(LD5。＞500mg/kg)有：敵百蟲、馬拉松、乙酰甲胺磷、辛硫磷、三氯殺螨醇、多菌靈、托布津、克菌丹、代森鋅、福美雙、萎銹靈、異草瘟凈、乙磷鋁、百菌清、除草醚、敵稗、阿特拉津、去草胺、拉索、殺草丹、2甲4氯、綠麥隆、敵草隆、氟樂靈、苯達松、茅草枯、草甘磷等。殘留在食品中的農(nóng)藥的母體、衍生物、代謝物、降解物都能對人體產(chǎn)生危害。農(nóng)藥殘留物的種類與數(shù)量與農(nóng)藥的化學(xué)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)等特點有關(guān)。農(nóng)藥的殘留性越大，在食品中的殘留量越多，對人體的危害也越大。食用少量的殘留農(nóng)藥，人體自身會降解，不會突然引起急性中毒，但長期食用沒有清洗干凈帶有殘留農(nóng)藥的農(nóng)產(chǎn)品，必然會對人體健康帶來極大的危害。如，導(dǎo)致身體免疫力下降，致癌，加重肝臟負擔(dān)，導(dǎo)致胃腸道疾病。2.2.2農(nóng)藥殘留危害的描述對于農(nóng)藥殘留采用一個比較切合實際的固定的風(fēng)險水平是，如果預(yù)期的風(fēng)險超過了可接受的風(fēng)險水平，這種物質(zhì)就可以被禁止使用。但對于已成為環(huán)境污染的禁止使用的農(nóng)藥，很容易超過規(guī)定的可接受水平。例如，在美國四氯苯丙二惡英（TCDD）風(fēng)險的最壞估計高達10-4,對于普遍存在的遺傳毒性致癌污染物如多環(huán)芳香烴和亞硝胺，常常超過10-6的風(fēng)險水平。2.2.3農(nóng)藥暴露途徑的評估農(nóng)藥可通過各種途徑在食品中殘留，殘留在食品中的農(nóng)藥對人的身體健康將產(chǎn)生不良的影響。農(nóng)田施用農(nóng)藥后，一部分農(nóng)藥可粘附在作物上而被作物吸收運到作物的各部分，使收獲的作物帶有一定量的殘留；降落在土壤中的農(nóng)藥可以通過作物的根系吸收；土壤及空氣中的農(nóng)藥，被雨水沖刷進入水體，對水產(chǎn)品造成污染，農(nóng)藥廠排放的污水也對水體造成污染。通過水體、污泥一蝦子-小魚一大魚及食物外殼、根莖等下腳料一禽畜一肉品、乳品、蛋品，形成食物鏈，產(chǎn)生生物富集，使動物性食物含農(nóng)藥較高。在食物的生產(chǎn)、加工、運輸、貯存等環(huán)節(jié)，受農(nóng)藥污染的運輸工具，貯存時為了防止害蟲使用的農(nóng)藥,為了防治畜禽體內(nèi)、體表寄生蟲、螨類對畜禽體及廄舍使用農(nóng)藥，均對食品造成污染。農(nóng)藥對人體的暴露途徑概括起來主要有：吸入、食入、經(jīng)皮膚吸收，暴露途徑見圖示。農(nóng)藥隨食品等途徑進入人體后，主要蓄積于脂肪組織，其次為肝、腎、脾、腦中，血液最低。此外，農(nóng)藥也發(fā)現(xiàn)于人乳中，母體中的農(nóng)藥不僅可以從乳汁排出，而且可以通過胎盤屏障進入胎兒體內(nèi)，引起下一代發(fā)生慢性中毒。膳食中農(nóng)藥殘留總攝人量的估計需要食品消費量和相應(yīng)農(nóng)藥殘留濃度。一般有3種方式：（1）總膳食研究法，（2）單一食品的選擇研究法，（3）雙份膳食研究法。有關(guān)化學(xué)物質(zhì)的膳食攝入量研究的一般指南可從世界衛(wèi)生組織WT0獲得（GEMS/Food，985）。這三種方法各有優(yōu)缺點，總膳食研究法和雙份膳食研究法得到的數(shù)據(jù)更適合于膳食中農(nóng)藥殘留對人體的風(fēng)險評估，但由于這兩種方法沒有具體的某種食品的消費量和殘留的數(shù)據(jù)，不能很好地判斷農(nóng)藥殘留的來源，而有時農(nóng)藥殘留可能僅僅來自某一種食品。單一食品的選擇研究法可避免上述遺漏，但由于食品在加工、烹飪過程中某些農(nóng)藥可能有損失。因此，在進行農(nóng)藥暴露評估時應(yīng)盡可能利用3種方法的數(shù)據(jù)，以免以偏概全。近年來，通過直接測定人體組織和體液中污染物的濃度來評估污染物的暴露水平呈增加的趨勢。例如，由于有機氯農(nóng)藥的攝入主要來自食品，從食品中攝入的有機氯素占其總量的90%以上，通過測定母乳中有機氯農(nóng)藥的濃度可以評定該污染物的暴露水平。2.2.4農(nóng)藥殘留風(fēng)險特征描述農(nóng)藥殘留的風(fēng)險描述應(yīng)當(dāng)遵守以下兩個重要原則：農(nóng)藥殘留的結(jié)果不應(yīng)當(dāng)高于“良好農(nóng)業(yè)操作規(guī)范”的結(jié)果；日攝入食品總的農(nóng)藥殘留量（如：膳食攝入量）不應(yīng)當(dāng)超過可以接受的攝入量。農(nóng)藥殘留風(fēng)險的定性估計，是根據(jù)危害識別、危害描述以及暴露評估的結(jié)果給予高、中、低的定性估計。農(nóng)藥殘留風(fēng)險的定量估計可分為有閾值的農(nóng)藥危害物和無閾值的農(nóng)藥危害物的估計。對于農(nóng)藥殘留的風(fēng)險評估，如果是有閾值的化學(xué)物，則對人群風(fēng)險可以攝入量與ADI值(或其他測量值)比較作為風(fēng)險描述。如果所評價的物質(zhì)的攝入量比ADI值小，則對人體健康產(chǎn)生不良作用的可能性為零。即安全限值(Marginofsafety,MOS)MOSW1時，該危害物對食品安全影響的風(fēng)險是可以接受的；MOS>1，則該危害物對食品安全影響的風(fēng)險超過了可以接受的限度，應(yīng)當(dāng)采取適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險管理措施。如果所評價的化學(xué)物質(zhì)沒有閾值，對人群的風(fēng)險是攝人量和危害程度的綜合結(jié)果。即食品安全風(fēng)險一攝入量X危害程度。我國食品安全風(fēng)險評估仍處于起步階段，其框架體系還不夠健全。目前，應(yīng)建立健全食品安全風(fēng)險評估評價制度和體系及食品安全標(biāo)準(zhǔn)體系，重點建立食品安全風(fēng)險評估預(yù)測預(yù)警系統(tǒng)及食品安全監(jiān)管體系，制定并修改相應(yīng)的監(jiān)管制度、措施和技術(shù)法規(guī)。依據(jù)食品安全風(fēng)險評估的結(jié)果制定風(fēng)險管理的標(biāo)準(zhǔn)、法律和實施指南，并建立食品安全事故應(yīng)急救援預(yù)案，以此降低食品安全事故的危害。藥物殘留超標(biāo)的行動計劃根據(jù)《獸藥管理條例》第六十三條的規(guī)定：違反本條規(guī)定，銷售尚在用藥期、休藥期內(nèi)的動物及其產(chǎn)品用于食品消費的，或者銷售含有違禁藥物和獸藥殘留超標(biāo)的動物產(chǎn)品用于食品消費的，責(zé)令其對含有違禁藥物和獸藥殘留超標(biāo)的動物產(chǎn)品進行無害化處理，沒收違法所得，并處3萬元以上10萬元以下罰款；構(gòu)成犯罪的，依法追究刑事責(zé)任；給他人造成損失的，依法承擔(dān)賠償責(zé)任。因此，當(dāng)農(nóng)產(chǎn)品超過本國或目的國最大允許殘留量時應(yīng)將此部分產(chǎn)品進行銷毀或無公害化處理，無公害化處理同死蝦無公害化處理操作。八、 患病、死亡蝦的無公害化處理死蝦處理不當(dāng)造成對公共環(huán)境衛(wèi)生、養(yǎng)殖水體的危害，需及時無害化處理，具體措施如下：清撈及時清撈水體和底泥中的死蝦，以防病原滋生，造成養(yǎng)殖