【教學】第二十章 生物制品分析llq

生物制品分析概論整理課件生物制品:以微生物、細胞、動物或人源組織和體液等為原料，應用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制成。整理課件（一）疫苗類（二）抗病毒及抗毒血清類藥物（免疫血清類）（三）血液制品（四）重組DNA制品（五）診斷制品第一節(jié)生物制品的種類

整理課件（一）疫苗類用病毒或立克次體接種于動物、雞胚，或經(jīng)組織培養(yǎng)后加以處理制造而成。疫苗保留了病原菌刺激動物體免疫系統(tǒng)的特性。當動物體接觸到這種不具傷害力的病原菌后，免疫系統(tǒng)便會產(chǎn)生一定的保護物質(zhì)，如免疫激素、活性生理物質(zhì)、特殊抗體等；當動物再次接觸到這種病原菌時，動物體的免疫系統(tǒng)便會依循其原有的記憶，制造更多的保護物質(zhì)來阻止病原菌的傷害。整理課件1、細菌類疫苗2、病毒類疫苗3、聯(lián)合疫苗4、雙價疫苗及多價疫苗整理課件（一）疫苗類1、細菌類疫苗

由有關(guān)細菌、螺旋體或其衍生物制成的減毒活疫苗、滅活疫苗、重組DNA疫苗、亞單位疫苗。皮內(nèi)注射用卡介苗、傷寒Vi多糖疫苗、吸附破傷風疫苗、乙型腦炎滅活疫苗、乙型腦炎減毒活疫苗、人用狂犬疫苗等。整理課件（一）疫苗類2、病毒類疫苗

由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制成的減毒活疫苗、滅活疫苗、重組DNA疫苗、亞單位疫苗?？诜顾杌屹|(zhì)炎減毒活疫苗、麻疹減毒活疫苗、風疹減毒活疫苗、腮腺炎減毒活疫苗等。整理課件3、聯(lián)合疫苗

兩種或兩種以上疫苗原液按特定比例配制成的具有多種免疫原性的滅活疫苗或活疫苗。傷寒副傷寒甲乙聯(lián)合疫苗、吸附百白破聯(lián)合疫苗、麻疹腮腺炎聯(lián)合減毒疫苗等。整理課件4、雙價疫苗及多價疫苗

兩種或兩種以上同一種但不同型（或群）抗原合并組成的疫苗。雙價腎綜合癥出血熱滅活疫苗等。整理課件（二）抗毒素及抗毒血清（免疫血清類）抗毒素（抗毒血清）：用細菌類毒素或毒素免疫馬或其他大動物所取得的免疫血清破傷風抗毒素、白喉抗毒素和肉毒抗毒素等整理課件（二）免疫血清類抗菌（抗病毒）血清：用細菌、病毒本身免疫馬或其他大動物所取得的免疫血清抗蝮蛇毒血清、抗五步蛇毒血清、抗銀環(huán)蛇毒血清、抗眼鏡蛇毒血清、抗炭疽血清、抗狂犬病血清持續(xù)時間短，主要用治療和緊急預防整理課件（三）血液制品由健康人的血漿或經(jīng)特異免疫的人血漿，經(jīng)分離、提純或由重組DNA技術(shù)制成的血漿蛋白組分，以及血液細胞有形成分。人血白蛋白、人免疫球蛋白、乙型肝炎人免疫球蛋白等。整理課件（四）重組DNA制品

整理課件（四）重組DNA制品

1、細胞因子類：重組人干擾素等

2、生長因子類：重組人表皮生長因子等

3、激素類：重組人生長激素等

4、酶類：注射用重組鏈激酶等

5、疫苗：重組乙型肝炎疫苗等

6、單克隆抗體：注射用抗人T細胞CD3鼠單抗整理課件（五）診斷制品用于檢測相應的抗原、抗體或機體免疫狀態(tài)的制品。毒素、診斷血清、分型血清和因子血清等。分為：1、體外診斷制品

2、體內(nèi)診斷制品整理課件（一）需進行相對分子質(zhì)量的測定大部分為大分子物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、多肽、核酸、多糖類等），其相對分子質(zhì)量一般為幾千至幾十萬。對大分子的生物制品而言，即使組分相同，往往由于相對分子質(zhì)量不同而產(chǎn)生不同的生理活性。所以，生物制品常需進行相對分子質(zhì)量的測定。一、生物制品分析的特點第二節(jié)生物制品分析特點及質(zhì)量要求整理課件（二）需檢查生物活性在制備多肽或蛋白質(zhì)類藥物時，有時因工藝條件的變化，導致活性多肽或蛋白質(zhì)失活。因此，對這類生物制品除了用通常采用的理化法檢驗外，尚需用生物檢定法進行檢定，以證實其生物活性。整理課件（三）需做安全性檢查由于生物制品的性質(zhì)特殊，生產(chǎn)工藝復雜，易引入特殊雜質(zhì)，故生物制品常需做安全性檢查，如熱原檢查、過敏試驗、異常毒性試驗等。整理課件（四）需做效價測定生化制品多數(shù)可通過含量測定，以表明其主藥的含量。但對某些藥物需進行效價測定或酶活力測定，以表明其有效成分含量的高低。整理課件（五）要用生化法確證結(jié)構(gòu)在大分子生物藥物中，由于有效結(jié)構(gòu)或相對分子質(zhì)量不確定，其結(jié)構(gòu)的確證很難沿用元素分析、紅外、紫外、核磁、質(zhì)譜等方法加以證實，往往還要用生化法如氨基酸序列分析等方法加以證實。整理課件（一）來源于生物體（二）制造過程涉及生物材料和生物學特征（三）工藝存在易變性和安全性問題二、生物制品生產(chǎn)的特點整理課件危險因素：異源物質(zhì)、不穩(wěn)定、易受微生物污染全程質(zhì)量控制：原材料、生產(chǎn)過程、最終產(chǎn)品（1）嚴格遵守GMP標準（2）建立完善的制造檢定規(guī)程（3）建立各生產(chǎn)工序相適應的檢定方法、標準操作細則（SOP）三、生物制品的全程質(zhì)量控制整理課件《中華人民共和國藥典》（2010版三部）項目：

1.品名（中文通用名稱、英文名稱、漢語拼音）

2.定義、組成及用途

3.基本要求

4.制造

5.檢定（原液、半成品、成品）

6.保存運輸及有效期

7.使用說明（僅預防類含此項）整理課件生物制品質(zhì)量控制的重點：（一）有效成分的同一性、結(jié)構(gòu)確證（二）有效成分的均一性、純度檢驗（三）有害物質(zhì)及殘余雜質(zhì)的控制（四）高效、靈敏的生物活性及比活性實驗方法整理課件生物制品的質(zhì)量標準有別于其他商品，強調(diào)其特殊性：1、安全性：安全使用，副作用小2、有效性：使用后能產(chǎn)生相應的效力3、可接受性整理課件生物制品質(zhì)量控制的基本內(nèi)容：（一）鑒別試驗（二）雜質(zhì)檢查（三）安全性檢查（四）含量（生物學活性或效價）測定整理課件（一）免疫學法抗原抗體反應檢測新技術(shù)：（1）免疫雙擴散法凝膠中進行的固相沉淀反應。抗原抗體在瓊脂凝膠中擴散，由近及遠形成梯度，當兩者在比例適當處相遇，發(fā)生反應，反應的沉淀物因其顆粒較大，在凝膠中不再擴散，形成沉淀帶。第三節(jié)鑒別試驗整理課件（2）免疫電泳法瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開，然后加入抗體做雙相免疫擴散，當兩者在比例適當處相遇，發(fā)生反應，形成沉淀弧。遷移率、分子量整理課件（3）免疫印跡法（Westernblot）經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（如硝酸纖維素薄膜）上。以固相載體上的蛋白質(zhì)作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影，對供試品的抗原特異性進行檢查。整理課件整理課件（4）免疫斑點法（5）酶聯(lián)免疫法:利用酶標記抗原（抗體），通過酶促顯色反應，可以直接觀察特征顏色變化來測定抗體（抗原）。整理課件整理課件（二）肽圖分析根據(jù)蛋白質(zhì)、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點，使用專一性較強的蛋白水解酶（一般為肽鏈內(nèi)切酶）作用于特殊的肽鏈位點將多肽裂解成小片斷，通過一定的分離檢測手段形成特征性指紋圖譜。整理課件溴化氰裂解-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）胰蛋白裂解-反相高效液相色譜（RP-HPLC）胰蛋白酶裂解-毛細管區(qū)帶電泳（CZE）結(jié)合N-末端氨基酸序列分析，是蛋白質(zhì)類生物制品精確的鑒別方法整理課件（一）來源于生物體（二）制造過程涉及生物材料和生物學特征（三）工藝存在易變性和安全性問題生物制品生產(chǎn)的特點生物制品危險因素：異源物質(zhì)、不穩(wěn)定、易受微生物污染第四節(jié)生物制品檢查內(nèi)容整理課件一、理化檢定（一）物理性狀檢查（二）蛋白質(zhì)含量測定（三）防腐劑和滅活劑（四）純度檢查（五）相對分子質(zhì)量或分子大小測定整理課件二、安全檢查（一）安全檢查對象1.菌毒種和原材料2.半成品3.成品整理課件

（一）過敏性物質(zhì)檢查

（二）殺毒、滅活和脫毒檢查

（三）毒性物質(zhì)檢查（四）外源性污染檢查（二）、安全性檢查內(nèi)容整理課件過敏反應檢查：檢查異性蛋白豚鼠試驗法整理課件毒性檢查：疫苗類生物制品是否存在自身毒素引起的特異性毒性的不安全因素小鼠試驗法豚鼠試驗法外源性污染檢查：是否污染外源性毒性物質(zhì)以及是否存在意外的不安全因素整理課件三、效力測定1.免疫力試驗2.活菌數(shù)和活病毒滴度測定3.血清學試驗整理課件3.血清學法

體外抗原抗體試驗經(jīng)典血清學反應：（1）凝集反應（2）沉淀反應（3）補體結(jié)合反應（4）中和反應整理課件經(jīng)典血清學反應：（1）凝集反應顆粒性抗原（完整的病原微生物或紅細胞等）與相應抗體結(jié)合，在有電解質(zhì)存在的條件下，經(jīng)過一定時間，出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊。整理課件（2）沉淀反應可溶性抗原與相應的抗體混合，在電解質(zhì)存在的條件下，兩者比例適合，即可有沉淀物出現(xiàn)。沉淀反應抗原多系膠體溶液，沉淀物主要是由抗體蛋白所組成。整理課件（3）補體結(jié)合反應可溶性抗原與相應抗體結(jié)合后，抗原抗體復合物可以結(jié)合補體，但這一反應肉眼不能察覺，加入紅細胞和溶血素，即可根據(jù)是否出現(xiàn)溶血反應來判定反應系統(tǒng)中是否存在相應的抗原或抗體。整理課件（4）中和反應抗體與病毒或毒素結(jié)合，使病毒或毒素失去致病力或毒性。整理課件一、一般雜質(zhì)檢查二、特殊雜質(zhì)檢查三、安全性檢查雜質(zhì)檢查整理課件檢查項目：氯化物、硫酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸堿度、溶液的澄清度與顏色、水分及干燥失重、熾灼殘渣等。檢查方法：同化學藥物一、一般雜質(zhì)檢查整理課件檢查意義：（1）特殊雜質(zhì)可能存在的毒性會引起安全性問題（2）可能影響產(chǎn)品的生物學活性和藥理作用（3）反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性主要特殊雜質(zhì)：

生物污染物、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)、工藝添加劑二、特殊雜質(zhì)檢查整理課件主要特殊雜質(zhì)：生物污染物（1）微生物（2）細胞成分（3）培養(yǎng)基成分（4）有關(guān)大分子物質(zhì)二、特殊雜質(zhì)檢查宿主細胞、外源性DNA牛血清白蛋白重組制品中的鼠IgG整理課件主要特殊雜質(zhì)：產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（1）二聚體和多聚體（2）脫氨或氧化產(chǎn)物（3）突變物（4）錯誤裂解產(chǎn)物（5）二硫化物異構(gòu)體二、特殊雜質(zhì)檢查整理課件主要特殊雜質(zhì)：工藝添加劑（1）殘余抗生素（2）蛋白分離劑（聚乙二醇、乙醇）（3）佐劑氫氧化鋁（4）產(chǎn)品穩(wěn)定劑（辛酸鈉、肝素）（5）防腐劑（苯酚、硫柳汞等）

（6）細菌與病毒滅活劑（甲醛等）二、特殊雜質(zhì)檢查整理課件（一）宿主細胞蛋白殘留量的檢查檢查目的：控制異源蛋白的含量，以防超量后引起機體免疫反應檢查方法：酶聯(lián)免疫吸附劑測定法－ELISA

二、特殊雜質(zhì)檢查整理課件整理課件（二）外源性DNA殘留量的檢查檢查目的：防止外源性DNA對人類的危害檢查方法：分子雜交技術(shù)、基于DNA結(jié)合蛋白的分析技術(shù)、實時定量PCR技術(shù)

二、特殊雜質(zhì)檢查整理課件分子雜交技術(shù)：基于堿基互補原理，利用核酸探針與被測定單鏈基因序列雜交進行檢測。（1）菌落原位雜交（2）Southern印跡雜交（Southernblot）（3）Northern印跡雜交（Northernblot）整理課件基于D