地塞米松干預哮喘模型大鼠不同階段癥狀表現的研究

地塞米松干預哮喘模型大鼠不同階段癥狀表現的研究

糖皮質激素（tc）被認為是預防和治療哮喘的首選藥物，但在臨床應用中也存在一些問題，如激素依賴性、激素受體、局部和全身副作用。目前西醫(yī)學尚無有效的激素替代療法,而中醫(yī)藥防治激素不良反應取得了一定成效,但相關研究結果多為臨床經驗性總結,缺乏相應的實驗研究基礎支持,尤其對中藥緩解治療哮喘患者出現的激素不良反應的中醫(yī)病機特點規(guī)律還缺乏深入研究。本課題旨在觀察哮喘模型大鼠在激素干預的不同階段(激素撤停前、撤停中、撤停后)的證候改變,判斷激素干預的不同階段哮喘大鼠的陰虛、陽虛證候屬性,為后期平補陰陽中藥協(xié)同激素治療哮喘提供實驗基礎。1實驗數據1.1實驗動物,4.10SPF級SD大鼠,雄性,體質量(120±10)g,由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供,合格證號:SCXK(京)2007-0001。1.2儀器、試劑與儀器卵清白蛋白(OVA,美國Sigma公司生產)、地塞米松磷酸鈉注射液(天津藥業(yè)焦作有限公司生產)、402A超聲霧化器(江蘇魚躍醫(yī)療設備股份有限公司生產)、RAYTEKMiniTempMT4紅外線測溫儀、Canon數碼相機(IXUS750)。1.3不同ld-4模型的建立篩選合格動物90只,隨機分為3大組各30只,即正常對照組、哮喘模型組、激素干預組(于第0天進行證候學評價,各組之間無顯著性差異)。每大組動物按照不同處死時間隨機分為3小組各10只,即正常對照1,2,3組,哮喘模型1,2,3組,激素干預1,2,3組。其中正常對照1組、哮喘模型1組、激素干預1組在第7周結束后處死,正常對照2組、哮喘模型2組、激素干預2組在第11周結束后處死,其余組在實驗結束后處死。1.4激素撤停前后地塞米松地下黨組織變化觀察建立大鼠哮喘模型,具體方法參見文獻。在普通哮喘模型制備成功的基礎上,激素干預組每日注射地塞米松0.5mg/kg,同時每周2次給予1%OVA生理鹽水溶液霧化吸入,連用2周至實驗第48天(激素撤停前階段:第35—48天)。于實驗第49天開始撤減激素用量,按照每周地塞米松0.1mg/kg遞減,于實驗第77天地塞米松全部撤離(激素撤停階段:第49—76天)。撤離后繼續(xù)觀察2周至實驗第90天(激素撤停后階段:第77—90天)。動物處死前24h行1%OVA霧化吸入。1.5r、g、b降色度的測定參考文獻略作改進,電子天平測量大鼠體質量;紅外線測溫儀檢測腋溫;數碼拍攝爪、尾照片,輸入電腦,采用Photoshop9.0圖像軟件進行圖像處理,用吸管工具,讀取特定區(qū)域的R、G、B(R代表紅色,G代表綠色,B代表藍色)的色度值,按以下公式分別選取爪、尾、舌特定區(qū)域定量提色度R、G、B,進而求出反映紅色程度的r值,r=R/(R+G+B)。各指標均于第42天(地塞米松0.5mg腹腔注射1周后)、第49天(地塞米松0.5mg腹腔注射2周)、第63天(開始地塞米松0.2mg腹腔注射之前)、第77天(開始停用地塞米松之前)、第91天(停用地塞米松2周)檢測。1.6陰性液脫注液①陰虛程度=各動物體質量/正常組均值(辨證標準:與正常組比較,大于1.2為形豐,小于0.85為陰虛,小于0.7為陰虧,小于0.6為液脫);②陽熱程度=各動物腋溫/正常組均數×0.3+各動物爪r/正常組均數×0.5+各動物尾r/正常組均數×0.2(辨證標準:與正常組比較,大于1.02為陽氣盛,小于0.98為陽虛,小于0.95為陽虛重,小于0.9為陽損)。1.7方差分析及檢驗數據采用均數±標準差(ˉx±s)表示,組間比較采用方差齊性檢驗及單因素方差分析,根據方差齊性檢驗結果選擇LSD(方差齊)或Tamhane’sT2(方差不齊),采用SPSS11.0forWindows軟件包完成。2結果2.1各組動物體質量的比較實驗第42天開始至實驗結束,激素干預組體質量較正常對照組及哮喘模型組均顯著降低,見表1。2.2組患者不同時間點感冒模型第42天激素干預組腋溫顯著高于另外2組,第49天激素組顯著低于另外2組,第63天、第77天、第91天哮喘模型組較正常對照組顯著降低,第63天、第77天激素組較哮喘模型組顯著升高,見表2。2.3激素對各組大鼠感冒模型的影響第42天激素干預組尾色顯著高于另外2組;第49天哮喘模型組與激素干預組顯著高于正常對照組;第63天、第77天激素組較正常對照組及哮喘模型組均顯著降低,哮喘模型組顯著高于正常對照組;第91天激素干預組低于正常對照組,見表3。2.4間點的嘴唇r值與正常對照組比較,哮喘模型組各個時間點的爪r值均無差異;與哮喘模型組比較,激素干預組第42天爪r值升高,第77天、第91天顯著降低,見表4。2.5測量和辯證法的結果2.5.1兩組患者陰虧程度的比較與陰虛之間;給予激素治療后,激素干預組陰虛程度逐漸加重,由陰虛發(fā)展為陰虧;停藥后,仍符合陰虛標準,但較前有一定的改善。見表5。2.5.2陽熱程度的結論激素干預組第42天為陽氣盛狀態(tài);隨著激素用量的撤停,第77天開始出現陽虛癥狀,激素撤停后,陽虛程度有加重趨勢。見表6。3傳統(tǒng)中醫(yī)觀點哮喘是全球范圍內嚴重威脅公眾健康的一種常見慢性病,按照全球哮喘防治協(xié)議(Globalinitiativeforasthma,GINA)2007年的統(tǒng)計數字,全世界有3億人罹患此病,在許多地區(qū)10～20a哮喘的發(fā)病率增加了1倍。近年來,隨著對哮喘發(fā)病機制中氣道炎癥學說的建立,具有強大抗炎作用的GC被認為是目前防治哮喘的首選藥物,但實踐中使用GC的全身性或局部性不良反應及激素依賴、激素抵抗等問題,尤其是對兒童影響更為顯著。西醫(yī)學目前對于哮喘患者激素應用的不良反應,尤其是激素敏感性降低(SDA)尚無好的激素替代療法,用傳統(tǒng)中醫(yī)藥防治哮喘是我國的獨特優(yōu)勢,積累了寶貴的經驗。基于中醫(yī)“病久及腎”的觀點,針對SDA病史長的特點,中醫(yī)認為其病機與腎虛有關,且由于患者長期大量使用激素,干擾了體內的陰陽平衡,往往表現為陰陽俱損。如有醫(yī)家認為SDA是因宿痰久伏,久病傷及腎陽,加之久用GC而抑制內源性腎上腺皮質激素的產生,致腎陽益虛,陽損及陰,陰損及陽,腎中陰陽俱損,腎虛(GC敏感性降低)于下,痰(慢性氣道炎癥)伏于上,上實下虛,虛實夾雜。目前哮喘患者應用激素過程中的中醫(yī)病機特點規(guī)律尚缺乏深入研究,但在中醫(yī)證的模型研究中已經采用激素模擬腎虛證,如給予連續(xù)注射大劑量地塞米松,動物出現活動度增強、煩躁、易激惹、飲水增多、大便干燥等腎陰虛證;若采用地塞米松連續(xù)注射后,停藥2周左右,動物則出現皮毛豎立、蜷曲扎堆、行動遲緩、反應遲鈍、尾涼黯淡、背溫下降、自發(fā)活動時間降低等腎陽虛證。故從中醫(yī)觀點出發(fā),機體應用激素后會造成腎陰虛、陽虛的病理損害,應采取補腎的藥物來防止激素的不良反應?；谇捌诘膶嶒灮A,本項目建立激素干預大鼠哮喘模型,參照引入上海中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院方肇勤教授開展的大小鼠四診及辨證方法,通過觀察哮喘模型大鼠激素干預治療的不同階段(激素撤停前、撤停中、撤停后)動物的四診相關檢測指標,綜合分析判斷動物的證候屬性,有利于闡明哮喘患者激素干預過程的中醫(yī)發(fā)