柴胡與醋柴胡對小鼠抑郁模型的疏肝解郁作用比較

柴胡與醋柴胡對小鼠抑郁模型的疏肝解郁作用比較

柴胡是波形科植物柴胡buurosescorzerinfoll，干燥的根，根據(jù)其屬性，通常被稱為“北柴胡”和“南柴胡”。性味辛、苦,微寒,歸肝、膽、肺經(jīng)。疏散退熱,疏肝解郁,升舉陽氣。用于感冒發(fā)熱,寒熱往來,胸脅脹痛,月經(jīng)不調(diào),子宮脫垂,脫肛［1］。柴胡傳統(tǒng)炮制方法有:醋柴胡、鱉血柴胡、酒柴胡、蜜炙柴胡,中國藥典目前只收載醋柴胡。自古便有柴胡“入解表藥生用,清肝炒熟用”的說法,在傳統(tǒng)理論中,生柴胡的升散作用較強,多用于解表退熱;醋柴胡可以緩和升散之性,降低解表退熱作用,并可增強疏肝止痛作用,多用于肝郁氣滯的脅痛、腹痛及月經(jīng)不調(diào)等癥。兩者的疏肝解郁作用到底如何呢?故考察醋制前后柴胡疏肝解郁作用差異及其解郁作用機制,選用小鼠懸尾應(yīng)激、小鼠強迫游泳、利血平所致眼瞼下垂小鼠抑郁模型［2-6］,比較柴胡醋制前后疏肝解郁作用的差異。并通過測定小鼠全血膽堿酯酶活力對其疏肝解郁作用機制進行探究。1試劑、儀器和儀器1.1藥材來源柴胡飲片購于遼寧正大祥和藥業(yè)集團有限公司,批號201105245,產(chǎn)地遼寧。1.2試劑利血平注射液,天津金耀氨基酸有限公司公司,批號1203241;鹽酸氯米帕明,江蘇恩華藥業(yè),批號H32022974;甲硫酸新斯的明注射液,批號H110202;乙酰膽堿酯酶(TChE)測定試劑盒,購于南京建成生物工程研究所。1.3儀器日立U-3010型分光光度計,日立公司。1.4動物昆明種小鼠,雌雄兼用,體質(zhì)量(18~22)g,由大連醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供,清潔級(CL)。2小鼠全血膽堿酯酶活力測定2.1生、醋柴胡疏肝解郁作用差異比較2.1.1醋柴胡水煎液的制備分別將生柴胡及3種醋柴胡用水煎煮制成1∶2濃度水煎劑(相當(dāng)于生藥),備用。2.1.2小鼠懸尾試驗按文獻方法進行試驗,取小鼠60只。隨機分成6組,每組10只,分別為生柴胡組、醋柴胡1組(每100kg柴胡用米醋20kg)、醋柴胡2組(每100kg柴胡用米醋40kg)、醋柴胡3組(每100kg柴胡用米醋60kg)、生理鹽水陰性對照組、氯米帕明陽性對照組。給藥組分別給生柴胡及3種醋柴胡水煎劑,參照文獻中給藥方法及劑量,按30mL/kg灌胃給藥,陰性對照組灌服等容量生理鹽水,陽性對照組灌服氯米帕明20mg/kg。連續(xù)灌胃7d,于末次灌胃給藥后1h后將小鼠尾端2cm處固定于水平面上,使其呈倒掛狀態(tài),頭部離臺面約30cm,四周以板隔離動物視線,記錄小鼠在6min內(nèi)的不動時間為失望時間。2.1.3小鼠強迫游泳試驗按文獻中方法,先做預(yù)試驗,將小鼠放入水槽(2000mL燒杯,高20cm,直徑14cm,水深10cm,置于水浴鍋內(nèi))中,調(diào)節(jié)水溫保持25℃左右,持續(xù)觀察6min,累計6min內(nèi)小鼠在水中停止掙扎、呈漂浮狀態(tài)、僅有細(xì)小的肢體運動以保持頭部浮在水面的持續(xù)時間(不動時間),將不動時間超過150s或低于60s者小鼠剔除。將合格老鼠隨機分組(分組及處理同懸尾實驗),連續(xù)灌胃7d,于末次灌胃1h后按預(yù)試驗方法進行強迫游泳試驗,記錄小鼠6min內(nèi)累計不動時間。2.1.4利血平拮抗試驗按文獻中方法,取實驗動物隨機分組(分組及處理較懸尾試驗增加利血平模型組)連續(xù)灌胃給藥7d,末次給藥30min后每只小鼠按2.5mg/kg腹腔注射利血平(0.1mL/log)觀察小鼠眼瞼下垂情況,準(zhǔn)確記錄1h時的眼瞼下垂度和體溫,觀察自發(fā)活動、耳尾顏色及腹瀉等情況。按Rubin分級標(biāo)準(zhǔn)判斷下垂度。0度為正常開目;1度為眼瞼下垂1/4;2度為眼瞼下垂1/2;3度為眼瞼下垂3/4;4度為眼瞼完全閉合。2.2醋柴胡疏肝解郁作用機制探究小鼠全血膽堿酯酶活力測定取小鼠50只。隨機分為5組,每組10只,分別為醋柴胡1組(每100kg柴胡用米醋20kg)、醋柴胡2組(每100kg柴胡用米醋40kg)、醋柴胡3組(每100kg柴胡用米醋60kg)、生理鹽水陰性對照組、甲硫酸新斯的明陽性對照組。給藥組分別給3種醋柴胡水煎劑,按30mL/kg灌胃給藥,陰性對照組灌服等容量生理鹽水,陽性對照組灌服甲基硫酸新斯的明0.2mg/kg,給藥后1h摘眼球取血,按照試劑盒說明書中步驟用化學(xué)比色法測定小鼠全血膽堿酯酶活力。2.3統(tǒng)計處理應(yīng)用SPSS軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。各給藥組均與對照組進行比較,采用單因素方差分析比較。P<0.05時,兩組間差異有顯著性。3醋胡對小鼠全血膽堿酯酶活力的影響3.1生、醋柴胡對小鼠強迫懸尾、游泳不動時間、利血平引起小鼠體溫下降、眼瞼下垂的影響從實驗結(jié)果可以看出,生、醋柴胡和氯米帕明均可縮短小鼠尾懸掛的失望時間和大鼠強迫游泳不動時間,并且可以對抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降,且醋柴胡和氯米帕明的作用優(yōu)于生柴胡。結(jié)果見表1~3。3.2醋柴胡中加醋量不同對于小鼠膽堿酯酶活力的影響從實驗結(jié)果可以看出,醋柴胡能夠抑制膽堿酯酶的活性,從而減少乙酰膽堿的水解,進而達到解郁的作用。而且與對照組比較,三組醋柴胡均能減低小鼠全血膽堿酯酶活力,其中醋柴胡2組能顯著降低小鼠全血膽堿酯酶活力(P<0.01)。結(jié)果見表4。4抗抑郁藥的篩選和使用抑郁癥在中醫(yī)理論中辯證為郁癥,多由于肝郁氣滯所致,而肝郁,多由情志抑郁,氣機阻滯所致。是“肝氣郁”,“肝氣郁結(jié)”的簡稱。肝有疏泄的功能,可條暢氣機,喜升發(fā)舒暢,疏泄有度,則氣機暢達,氣血調(diào)和,疏泄不足,則氣機郁滯。如因情志不舒,惱怒傷肝,或因其他原因影響氣機升發(fā)和疏泄,氣郁日久,日久化火,就會引起肝郁的病癥。治療肝郁癥可通過疏肝理氣,即疏肝解郁［10-11］。柴胡為中醫(yī)臨床對抑郁癥治療應(yīng)用廣泛且療效較好的藥物之一。又《素問·宣明五氣篇》中說:“酸入肝”,又酸味具有收斂,固澀的作用。所以醋柴胡相較之于生柴胡,可以緩和生品的升散之性,降低解表退熱作用,卻可增強其疏肝止痛作用［12］。文中選取小鼠懸尾、強迫游泳、利血平所致眼瞼下垂體溫下降等模型均為經(jīng)典的情志和藥物所致的抑郁模型,可用來篩選和觀察抗抑郁藥物。動物在一個局限環(huán)境中拼命掙扎試圖逃跑而又無法逃脫后出現(xiàn)不動狀態(tài),此狀態(tài)反映了絕望行為［13-15］。本實驗選用氯米帕明為陽性對照,其為臨床常用三環(huán)類抗抑郁藥,用于治療各種抑郁狀態(tài)。主要通過抑制神經(jīng)元對釋放于突觸間隙的NA和5-HT的再攝取、又以抑制5-HT的重攝取為主,有效治療抑郁癥［16］。但由于其相應(yīng)的阻斷了膽堿能受體,臨床會常常表現(xiàn)出口干、便秘、排尿困難、視物模糊、頭暈、嗜睡、體位性低血壓、記憶影響和心動過速等多種不良反應(yīng)［17］,副作用明顯。所以應(yīng)找出新型藥效良好但副作用小的新型抗抑郁藥。從實驗結(jié)果可以看出生、醋柴胡和氯米帕明均可縮短小鼠尾懸掛的失望時間和大鼠強迫游泳不動時間,并可對抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降,且醋柴胡和氯米帕明的作用優(yōu)于生柴胡。結(jié)果顯示柴胡具有疏肝解郁的作用,且醋柴胡的疏肝解郁作用明顯優(yōu)于生柴胡。這一結(jié)果驗證了傳統(tǒng)理論的科學(xué)性,也證明了中藥炮制的重要性,為臨床準(zhǔn)確用藥提供了依據(jù)。臨床上,肝郁患者常表現(xiàn)為兩脅苦滿、腹脹、納減及神志上的異常等,這除了由于個別臟器的病理性病變外,還與植物神經(jīng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)有很大關(guān)系。由于植物神經(jīng)功能紊亂,可影響到人的情緒上的異常改變,亦可影響到消化系統(tǒng)。乙酰膽堿是中樞內(nèi)廣泛存在的一種神經(jīng)介質(zhì),作為植物神經(jīng)節(jié)前纖維和副交感神經(jīng)節(jié)后纖維神經(jīng)遞質(zhì),可以興奮膽堿能神經(jīng),起到調(diào)節(jié)神經(jīng)、消化系統(tǒng)的功能,其可被乙酰膽堿酯酶所水解,膽堿酯酶的活力間接影響著中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能［8］。從實驗結(jié)果可以看出