花卉原植物的花卉水提液抗氧化活性研究

花卉原植物的花卉水提液抗氧化活性研究

氧氣自由基的大量產(chǎn)生是氧氣自由基的主要形式。自由基攻擊生命是大分子造成組織細(xì)胞損傷,是引起機(jī)體衰老的根本原因。添加抗氧化劑或自由基清除劑能有效抑制或緩解自由基對(duì)機(jī)體的不利影響。DPPH·(1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl)是一種穩(wěn)定存在的有機(jī)自由基,在525nm附近的吸收峰的下降程度可以直接反映材料的抗氧化能力的強(qiáng)弱。DPPH·法在國(guó)外廣泛用于植物材料的抗氧化能力的評(píng)價(jià)和抗氧化劑的篩選,彭長(zhǎng)連等對(duì)此法用于評(píng)價(jià)植物抗氧化能力的可行性進(jìn)行了研究,認(rèn)為它是一種快速、簡(jiǎn)便和靈敏的評(píng)價(jià)植物抗氧化能力的可行方法。本文應(yīng)用DPPH·法比較研究花卉花瓣水提液的抗氧化能力,并探討其與花瓣中多酚、黃酮含量的關(guān)系,以期為花卉在抗氧化功能食品和抗氧化劑的研究和開發(fā)領(lǐng)域服務(wù)。1材料和試劑1.1研碎器和干燥器所有材料于晴天上午10時(shí)左右采集,鑒定,分離花瓣,50℃干燥48h,研碎過100目篩,干燥器中保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)稱取0.1g于100mL錐形瓶中,加入經(jīng)90～95℃預(yù)熱的雙蒸水50mL,(95±1)℃水浴提取2h(每30min搖勻1次),趁熱過濾得水提液。1.2化學(xué)試劑DPPH·含量≥90%,為Sigma公司產(chǎn)品;蘆丁(Lutin)含量≥95%;二叔丁基對(duì)甲酚(BHT,2,6-Di-tert-butyl-p-cresoll)化學(xué)純,為中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品;槲皮素(Quercetin)化學(xué)純,中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院勞衛(wèi)所產(chǎn)品;其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。2實(shí)驗(yàn)方法2.1樣品的加量預(yù)處理DPPH·清除率法,按文獻(xiàn)略加改進(jìn)。取50μL水提液,加入120μmol/LDPPH·溶液2.45mL,以加等量雙蒸水作空白對(duì)照(A0),以50μL水提液加2.45mL50%乙醇作為扣除樣品顏色的對(duì)照(A樣’),搖勻,25℃靜置20min后,以50%的乙醇調(diào)零測(cè)A525(A樣)。清除率按下列公式計(jì)算:清除率=[A0-(A樣-A樣’]/A0×100%。2.2多酚含量測(cè)定采用酒石酸鐵法測(cè)定,參見文獻(xiàn)。2.3黃酮相對(duì)含量測(cè)定按文獻(xiàn)略加改進(jìn)。取水提液0.5mL,加入1%AlCl32mL,搖勻,靜置10min,以1%AlCl3調(diào)零測(cè)A420,黃酮相對(duì)含量以A420值表示。2.4乙醇對(duì)玫瑰花水提液抗氧化活性的影響分別將槲皮素、蘆丁、二叔丁基對(duì)甲酚溶于少量乙醇,以50%乙醇稀釋成不同濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線,并將之與玫瑰花(紅衣主教)花瓣水提液抗氧化活性進(jìn)行比較。以上測(cè)定均設(shè)3個(gè)重復(fù),取其平均值。3結(jié)果與分析3.1不同材料中dpph的清除率如表1所示,薔薇科薔薇屬各種花瓣水提液的DPPH·清除率均超過75%,大花紫薇、鐵海棠、桂花和各種杜鵑花花瓣水提液的DPPH·清除率也較高。同時(shí)以上各種材料的多酚含量也較高。而黃酮含量以三色堇和玫瑰花(金獎(jiǎng)?wù)?最高。3.2u3000含量的線性關(guān)系對(duì)表1結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,發(fā)現(xiàn)花卉的抗氧活性與其多酚含量呈顯著的線性相關(guān),回歸方程:y=1.88x+24.68(tb=9.80>t0.01);而黃酮相對(duì)含量與抗氧活性無顯著的線性相關(guān)關(guān)系(r=0.14)。3.3花花粉質(zhì)量分?jǐn)?shù)ro-bandisal,utch.由圖1可見,4者的DPPH·50%清除劑量分別為:Quercetin,5.866μg;Rose-Kardinal,12.515μg(花瓣干重);Lutin,16.526μg和BHT,16.332μg。玫瑰花的抗氧化活性比槲皮素弱,而比蘆丁和廣泛使用的食品抗氧化劑BHT強(qiáng)。4抗氧化活性與自由基清除能力的關(guān)系DPPH·法廣泛用于抗氧化活性評(píng)價(jià)和抗氧化劑篩選。本研究發(fā)現(xiàn),薔薇科薔薇屬和千屈菜科紫薇屬植物花的抗氧化活性最強(qiáng),鐵海棠、杜鵑花和桂花次之,結(jié)果與廖立新等的報(bào)道基本一致,說明DPPH·法所測(cè)得的抗氧化活性與人紅細(xì)胞膜完整性的保護(hù)和體外抗脂質(zhì)過氧化的能力存在一定的相關(guān)性。但許申鴻認(rèn)為杜鵑花(映山紅,RhododendronsirasiiL.)的0H清除能力較弱,而本研究所選的4種杜鵑花的DPPH·清除能力都較強(qiáng)。說明抗氧化活性與某些活性氧自由基清除能力評(píng)價(jià)結(jié)果間有較大出入,可能是由材料提取方法不同和體系間評(píng)價(jià)原理不同所致。關(guān)于抗氧化活性強(qiáng)弱與多酚類物質(zhì)含量的相關(guān)性,以往的研究結(jié)果不盡一致。Velioglu等通過對(duì)28種植物材料的抗氧化活性及其酚類含量的比較得出兩者間沒有明顯相關(guān)性,并認(rèn)為是酚類以外的物質(zhì)在其抗氧化方面起主要作用。于善凱等通過對(duì)不同品種杭白菊中酚類物質(zhì)含量和清除OH能力的比較,認(rèn)為菊花中酚類物質(zhì)的含量高低與抗氧化沒有明顯的對(duì)應(yīng)關(guān)系。而另有報(bào)道認(rèn)為果汁、橄欖油的抗氧化活性與多酚含量密切相關(guān)。本研究結(jié)果支持后一種觀點(diǎn)。因此,在花卉保存和加工過程中保證多酚類物質(zhì)的穩(wěn)定性對(duì)維持抗氧化活性可能相當(dāng)重要。結(jié)果還發(fā)現(xiàn)鳳花的多酚類物質(zhì)含量不高但抗氧化活性較強(qiáng),具體原因有待進(jìn)一步的研究。蘆丁和槲皮素是目前公認(rèn)的活性較強(qiáng)的天然抗氧化劑,BHT是廣泛使用的食品抗氧化劑,而薔薇屬植物花的抗氧化活