微量凱氏定氮法測定蛋白質含量實驗報告

-!微量凱氏定氮法測定蛋白質含量實驗報告一、實驗目的1.學習微量凱氏定氮法的原理2.掌握微量凱氏定氮法的操作技術（未知樣品的消化、蒸餾、滴精品文檔放心下載定及其含氮量的計算等）二、實驗原理凱氏定氮法常用于測定天然有機物（如蛋白質，核酸及氨基酸等）精品文檔放心下載的含氮量。當天然含氮有機物與濃硫酸共熱時，其中的碳、氫被氧化成二氧精品文檔放心下載化碳和水，而氮則變成氨并進一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程稱感謝閱讀為“消化”。此過程進行的相對較為緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提感謝閱讀高溶液的沸點，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進反應的進行。氧化感謝閱讀劑過氧化氫也能加速反應。消化過程：2NHHSO(NH)SO324424含氮有機物HSOCOSOHONH242223蒸餾：在消化完全的樣品溶液中加入濃氫氧化鈉使呈堿性，加熱感謝閱讀-!蒸餾，即可釋放出氨氣。反應方程式如下：(NH

)

SO

2NaOH

Na

SO

2NHOH4 2

4

2

4

4吸收與滴定：蒸餾所放出的氨，可用硼酸溶液進行吸收，待吸收謝謝閱讀完全后，再用鹽酸標準溶液滴定，直至恢復溶液中原來氫離子濃度為精品文檔放心下載止（即滴定至藍紫色)，最后根據所用標準酸的當量數（相當于待測感謝閱讀物中氨的當量數）計算出待測物中的氮量。NHHBONHHBO3 3 3 4 2 3NHHBOHCLNHCLHBO感謝閱讀4 2 3 4 3 3三、實驗試劑、材料和器材實驗材料：食用面粉。實驗試劑：濃硫酸、30%氫氧化鈉溶液、克氏催化劑、2%硼酸、精品文檔放心下載指示劑、0.01MHCL。實驗器材：凱氏燒瓶、電爐、凱氏定氮蒸餾裝置、錐形瓶、100ml感謝閱讀容量瓶、酸式滴定管。四、操作步驟1.消化（1）準確稱取1克食用面粉，用稱量紙卷好小心送入至50毫升謝謝閱讀的凱氏燒瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶頸上；-!（2）向另一燒瓶加入1ml水作空白對照；在每個燒瓶內加入硫酸鉀—硫酸銅混合物（克氏催化劑）少許，濃硫酸10ml，小瓷片兩粒，搖勻；謝謝閱讀（3）將燒瓶約60度角固定在鐵架上，每個瓶口放一小漏斗，在通風廚內的電爐上消化；精品文檔放心下載（4）在消化開始時，應控制火力，不要使液體沖到瓶頸；謝謝閱讀（5）待瓶內水汽蒸完，硫酸開始分解并放出SO2白煙后，適當加強火力，繼續(xù)消化，直至消化液呈透明綠色為止；精品文檔放心下載（6）消化完畢，待燒瓶內容物冷卻后，加蒸餾水10ml（注意慢加，邊加邊搖）；謝謝閱讀（7）冷卻后將瓶中內容物轉入100ml的容量瓶中，并用蒸餾水洗燒瓶數次，溶液一并倒入容量瓶，最后定容至刻度搖勻，做上記號備用。感謝閱讀2.蒸餾（1）蒸餾器洗凈后，開放水龍頭P3，使水進入A室，水放至A室球部2/3處即可。精品文檔放心下載（2）取3個50ml的錐形瓶，分別加入10ml硼酸（內加有混合指示劑）。用表面皿復蓋備用。感謝閱讀（3）加樣用移液管吸取2ml消化液，小心地由漏斗D傾入B室；謝謝閱讀取一個盛有硼酸的錐形瓶，置于M管下，使管口恰好接觸精品文檔放心下載-!硼酸溶液，用量筒從漏斗D加入30%氫氧化鈉5ml，隨即將P4夾緊，并往漏斗加入少量蒸餾水封閉。感謝閱讀（4）蒸餾①用酒精燈加熱，維持火力恒定，沸騰不可高于Y管口以免A室溶液從Y管倒吸，待第一滴蒸餾液從冷凝柱F頂端滴下時起，繼續(xù)蒸餾5分鐘；感謝閱讀②然后將錐形瓶放低，使導管離開液面再蒸2分鐘，最后用蒸餾水洗導管外壁，蒸餾完畢，取下錐形瓶準備滴定。謝謝閱讀（5）空白蒸餾①用移液管分別吸取2ml蒸餾水按上述操作步驟進行蒸餾。感謝閱讀儀器的洗滌：3.滴定（1）蒸餾完畢，用微量酸式滴定管，以0.01mol/L鹽酸標準溶精品文檔放心下載-!液進行滴定錐瓶內溶液，溶液由藍綠色變?yōu)榈仙蚧疑?，即為終點。謝謝閱讀（2）記錄所用鹽酸的量。4.計算樣品的總氮含量（克氮％）（AB）0.010014100C1000精品文檔放心下載若測定的樣品含氮量部分只是蛋白質則：樣品的總蛋白含量（克蛋白％）（AB）0.0100146.25100C1000感謝閱讀式中：A為滴定樣品用去的鹽酸平均毫升數；為滴定空白用去的鹽酸平均毫升數；為稱量樣品的克數：0.0100為鹽酸的當量濃度（實際上，此項應按實驗中使用鹽酸的實際濃度填寫）；精品文檔放心下載14為氮的原子量；6.25為常數（1毫升0.1N鹽酸相當于0.14毫克氮）。謝謝閱讀五、實驗結果序號 稱量樣品(g） 滴定樣品用去的鹽酸（ml）滴定空白用去的鹽酸（ml）感謝閱讀1115.20.122115.4-!滴定樣品用去鹽酸平均值15.215.42感謝閱讀15.（3ml）樣品的總氮含量（克氮％）（AB）0.020014100C1000感謝閱讀0.43％若測定的樣品含氮量部分只是蛋白質，則：（AB）0.0200146.25樣品的總蛋白含量（克蛋白％） 100、C1000感謝閱讀2.66％式中：A為滴定樣品用去的鹽酸平均毫升數；為滴定空白用去的鹽酸平均毫升數；為稱量樣品的克數：0.0100為鹽酸的當量濃度（實際上，此項應按實驗中使用鹽酸的實際濃度填寫）；精品文檔放心下載14為氮的原子量；6.25為常數（1毫升0.1N鹽酸相當于0.14毫克氮）。謝謝閱讀六、注意事項1.本法適用于0.05-3.0mg氮，樣品中含氮量過高時，則應減少精品文檔放心下載取樣量或將樣液稀釋。2.勿使樣品粘于燒瓶頸部。放置液體樣品時，需將吸管插至燒瓶精品文檔放心下載底部再放樣：如固體樣品，可將樣品卷在紙內，平插入燒瓶底部，然謝謝閱讀后再將燒瓶直起，紙卷內的樣品即完全放在燒瓶底部。3.蒸餾完畢，先將蒸餾出口離開液面，繼續(xù)蒸餾1min，將附著精品文檔放心下載-!在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶內，再將吸收瓶移開，最后移開酒精精品文檔放心下載燈，絕不能先滅燈，否則吸收液將發(fā)生倒吸。4.硼酸吸收液的溫度不應超過40°C，否則氨吸收減弱，造成損謝謝閱讀失，可置于冷水浴中?；旌现甘緞┰趬A性溶液中呈蘭綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸感謝閱讀性溶液中呈紅色。七、思考題1.寫出一下各步的化學反應方程式:蛋白質的消化、氨的蒸餾、氨的精品文檔放心下載滴定。答：蛋白質的消化:含氮有機物HSOCOSOHONH感謝閱讀2 4 2 2 2 3氨的蒸餾：NHSO2NaOHNaSO2NHOH感謝閱讀424244NHOHHONH423NHHBONHHBO333423氨的滴定：NHHBOHCLNHCLHBO4234332.指出本測定方法產生誤差的原因答：①在消化過程中，消化時間，催化劑，濃硫酸都要一樣，一感謝閱讀定要消化完全。在消化過程中蛋白質附著在凱氏燒瓶壁上沒有被消化謝謝閱讀-!也會影響最終的濃度。②蒸餾過程中，蒸餾出來的液體量一定要相同，因為不一樣的蒸餾水，最后結果不一樣，在蒸餾的過程中一開始要加入買的蒸餾水，蒸餾過程中加入的是自己用自來水蒸餾的。蒸餾中出氣孔的管子一定要插入硼酸液面以下，蒸餾過程中保證冷凝水一直在流動。蒸餾過程中定氮儀各連接處應使玻璃對玻璃外套橡皮管絕對不能漏氣。加入消化液后加氫氧化鈉應小心緩慢加入，開關甲不能常開，加完后加水液封。謝謝閱讀③滴定過程中應一滴一滴加入，滴定速度過快容易滴定過量。滴定過程中仰視刻度結果偏小，俯視刻度線結果偏大。謝謝閱讀④蒸餾裝置的洗滌過程中洗滌不干凈也會導致誤差的出現。⑤本實驗方法適合測量0.05-3.0mg氮，含量過大應該減少取樣謝謝閱讀量或者樣液稀釋。否則會產生誤差。3.消化過程中產生何種有毒氣體？如何判斷消化終點？答：可能會產生一氧化氮、二氧化氮、二氧化硫。消化終點判定：在消化開始時，應控制火力，不要使液體沖到瓶謝謝閱讀頸。待瓶內水汽蒸完，硫酸開始分解并放出SO2白煙后，適當加強火力，繼續(xù)消化，直至消化液呈透明綠色為止。謝謝閱讀八、討論經過本次利用微量凱氏定氮法進行面粉中蛋白質的粗測定實驗，謝謝閱讀-!使我較為熟練的掌握了凱氏定氮蒸餾裝置的使用，并且了解了其工作原理，這對于以后的學習是有很大幫助的。經查閱資料得，面粉中蛋白質的含量大概在9％左右，本次實驗的結果為2.66％，總體來講，本次試驗較為失敗，沒能夠粗略地測量出了面粉中蛋白質的含量。經過分析后，得出幾點影響實驗結果的因素，如下：謝謝閱讀1.在消化過程中，消化時間，催化劑，濃硫酸都要一樣，一定要消化完全。在消化過程中蛋白質附著在凱氏燒瓶壁上沒有被消化也會影響最終的濃度；精品文檔放心下載2.蒸餾過程中，蒸餾出來的液體量一定要相同，因為不一樣的蒸餾水，最后結果不一樣，在蒸餾的過程中一開始要加入買的蒸餾水，蒸餾過程中加入的是自己用自來水蒸餾的。蒸餾中出氣孔的管子一定要插入硼酸液面以下，蒸餾過程中保證冷凝水一直在流動。蒸餾過程中定氮儀各連接處應使玻璃對玻璃外套橡皮管絕對不能漏氣。加入消化液后加氫氧化鈉應小心緩慢加入，開關甲不能常開，加完后加水液封；精品文檔放心下載3.滴定過程中應一滴一滴加入，滴定速度過快容易滴定過量。滴定過程中仰視刻度結果偏小，俯視刻度線結果偏大；感謝閱讀4.蒸餾裝置的洗滌過程中洗滌不干凈也會導致誤差的出現；感謝閱讀5.本實驗方法適合測量0.05-3.0mg氮，含量過大應該減少取樣量或者樣液稀釋。