小鼠虛證四診表現(xiàn)比較研究

小鼠虛證四診表現(xiàn)比較研究

過去，作者的研究建立了一個收集大鼠的工作站和方法，并制定了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。這些方法的建立,主要檢測的是KM小鼠。那么,是否適用于ICR、Balb/c、C57等國內(nèi)外常用的其他品系小鼠呢?同時,對于相同的造模,這些小鼠在四診表現(xiàn)方面是否存在異同?這是本研究的主要目的。在中醫(yī)證候動物模型中,環(huán)磷酰胺(氣虛造模)和乙酰苯肼(血虛造模)所造成的模型比較穩(wěn)定,四診特征明顯,因而本研究采用這兩種造模方法。1材料和方法1.1實驗動物及設(shè)備KM、ICR、Balb/c、C57等4種品系小鼠,各30只,雄性,16～18g,由中科院上海實驗動物中心提供。合格證號:KM:SCXK(滬)2002-0002;ICR、Balb/C57:SCXK(滬)2003-002。清潔級條件下常規(guī)飼養(yǎng)。1.2x-射線衍射法溫度法MP200B型電子天平,數(shù)字WMY-01型溫度計,SQF-EA體視顯微鏡,3200K(色溫)500W攝像專用光源,自制光源裝置,NIKONCoolpix4500數(shù)碼相機,普通三腳架。小鼠半透明實驗籠,劃有小方格(5cm×4cm)的透明薄膜紙(26cm×16cm)。1.3組件和模型方法各種品系小鼠各自隨機分為3組,每組10只。具體見表1。1.4紅色指標(biāo)檢測體重、飲水、攝食、腋溫、爪和尾顯微數(shù)碼拍照獲取反映紅色程度指標(biāo)r值、晚間35s自主活動計數(shù),以及一般外觀表現(xiàn)的觀察。以上指標(biāo)第1、4、7、11、14日各檢測1次,共5次。1.5檢測方法1.5.1體重電子天平測量。1.5.2剩余量/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/剩余量/剩余量/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)間隔天數(shù)/小鼠只數(shù)每只日攝食量=(上次加入的飼料量-剩余量)/(小鼠只數(shù)×間隔天數(shù))。每只日飲水量=(上次加入的飲水量-剩余量)/(小鼠只數(shù)×間隔天數(shù))。1.5.3小鼠左前溫度值的測定左手抓住小鼠,暴露腹部,右手持溫度計,將溫度計探頭預(yù)熱后插入小鼠左腋下,以溫度計上的數(shù)值上升到不再上升為止,即可以讀出相應(yīng)的腋溫數(shù)值。1.5.4基于x-ms的料色設(shè)計第一步:將小鼠左后爪(尾)分別放在載物臺上,爪面向上,使每只小鼠左后爪(尾)的方向一致,調(diào)整顯微鏡的微調(diào)按鈕,使之放大倍數(shù)為8倍,手動模式(M),曝光模式:尾-M(1/30,F4.5),爪-M(1/30,F4.5),ISO:400下拍攝。將拍攝后的照片輸入電腦。第二步:采用Photoshop7.0圖像軟件進行處理,選取爪的掌部及尾部作為RGB色度的定量分析。作為國際標(biāo)準(zhǔn)色的定量,R代表紅色,G代表綠色,B代表藍色,得到原始爪尾RGB分量值。將RGB值帶入公式r=R/(R+G+B),得出r值。能反映紅色程度的深淺。1.5.5照片記錄方法將數(shù)碼相機固定在三腳架上,位于觀察籠正上方。打開相機電源至錄像模式,將鼠籠置于地面,垂直于數(shù)碼相機下方。將小鼠從飼養(yǎng)籠中轉(zhuǎn)移到潔凈透明的小鼠飼養(yǎng)籠內(nèi),待小鼠適應(yīng)新環(huán)境10min后,用數(shù)碼相機拍攝小鼠35s錄像。輸入電腦后,可反復(fù)播放,并逐一記錄35s內(nèi)不同小鼠水平行走的格數(shù)、垂直探頭次數(shù)。能反映晚間動物自主活動狀況。1.6統(tǒng)計處理SPSS10.0統(tǒng)計軟件。除飲水?dāng)z食外,采用單因素方差分析,方差不齊采用非參數(shù)檢驗。2結(jié)果2.1體重2.1.1km鼠造模后氣虛組與血虛組體重先出現(xiàn)下降,后期逐漸恢復(fù)。其中第7日血虛組與正常組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見圖1。2.1.2兩組降后逐漸恢復(fù)的比較小鼠氣虛組、血虛組體重均出現(xiàn)先下降后逐漸恢復(fù)的現(xiàn)象,其中氣虛組第7、11日、血虛組第7日與正常組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見圖2。2.1.3兩組第4、7、11、14日、血壓病大鼠血清第4、7日的統(tǒng)計學(xué)差異氣虛、血虛兩模型組體重下降,其中氣虛組第4、7、11、14日、血虛組第4、7日與正常組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。后期兩組均出現(xiàn)恢復(fù)的趨勢。見圖3。2.1.4造模前后的影響氣虛組、血虛組體重均出現(xiàn)下降,其中氣虛組第4、7、11日、血虛組第7日與正常組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖4?？梢钥闯?四種不同品系的各兩個模型組小鼠造模后體重一致下降,以后有逐漸恢復(fù)的趨勢。不同的是:KM小鼠對同等劑量環(huán)磷酰胺造模的耐受性較強,而ICR、balb/c和C57鼠相反;balb/c小鼠對同等劑量乙酰苯肼造模的耐受性差,而ICR、C57和KM小鼠相對不敏感,易于恢復(fù)。其中,ICR小鼠所受到的影響最小?？傮w上,乙酰苯肼造模早期影響嚴(yán)重,但恢復(fù)快、幅度大;環(huán)磷酰胺造模影響相對輕一些,恢復(fù)略緩慢。2.2腋溫2.2.1km鼠氣虛模型組腋溫變化較小。血虛模型組腋溫下降明顯,后恢復(fù)至正常水平,其中第4、7日與正常組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見圖5。2.2.2ic-老鼠氣虛組、血虛組均出現(xiàn)一先下降后恢復(fù)至正常水平的過程,氣虛組第7日、血虛組第4、7日與正常組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見圖6。2.2.355.b和c氣虛、血虛兩模型組腋溫下降,其中氣虛組第11、14日、血虛組第4、7、11、14日與正常組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見圖7。2.2.4各品系小鼠腋溫變化造模后氣虛組出現(xiàn)下降的趨勢。血虛組腋溫下降,以第4、7日最為明顯,與正常組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖8。除KM小鼠外,環(huán)磷酰胺造模,其它品系小鼠腋溫均下降,后期趨向恢復(fù)。乙酰苯肼造模,各組小鼠腋溫下降幅度均較環(huán)磷酰胺模型大。與體重一致的是,各品系小鼠該模型腋溫恢復(fù)也快,在14日大多基本恢復(fù)至正常水平。2.3icr和s17恢復(fù)慢環(huán)磷酰胺造模,小鼠飲水下降,其中KM小鼠較輕,恢復(fù)快;balb/c次之;ICR、C57恢復(fù)慢?；沮厔萑匀皇窍认陆岛笾饾u回升。乙酰苯肼造模,小鼠飲水所受到的影響,ICR最嚴(yán)重。但一致的是,14日左右各組基本恢復(fù)至正常水平。各乙酰苯肼模型變化幅度較各環(huán)磷酰胺模型大。2.4乙酰苯造模與飲水量變化趨勢大體類似,各組攝食量先下降,后回升。其中乙酰苯肼造模早期影響重,但后期恢復(fù)也快。其中,KM和ICR小鼠在恢復(fù)過程中出現(xiàn)了嚙齒頻繁的現(xiàn)象。2.5r值爪r2.5.1km鼠兩模型組造模后爪r值下降。其中氣虛組第7日、血虛組第4、7日與正常組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖9。2.5.2兩組恢復(fù)后至正常組ICR小鼠造模后兩模型組爪r值均下降,后恢復(fù)至正常水平。其中氣虛組第7日、血虛組第4、7日與正常組有組間差異(P<0.05)。見圖10。2.5.3兩組第4日、4日、7日比較氣虛組、血虛組爪r值下降,以血虛組明顯。氣虛組第4日、血虛組第4、7日低于正常組(P<0.05),后期逐漸恢復(fù),接近正常組水平。見圖11。2.5.4小鼠正常配方的變化氣虛、血虛兩模型組爪r下降,其中氣虛組第7日、血虛組第4、7、14日明顯低于正常組(P<0.05)。兩模型組大體趨勢是先出現(xiàn)下降,后逐漸恢復(fù),向正常組水平靠近,血虛組第14日甚至高于正常組(P<0.05)。見圖12。磷酰胺造模,小鼠爪r下降,色淡,以第7天顯著,以后緩慢恢復(fù),以C57恢復(fù)最著。乙酰苯肼造模,小鼠爪r下降,色淡白,以第4～7天最嚴(yán)重,而且一致地重于環(huán)磷酰胺造模。但一致的是,14日左右各品系各組基本恢復(fù)至正常水平。其中C57恢復(fù)最著。2.6小鼠尾r、環(huán)磷酰胺造模的小鼠術(shù)后環(huán)磷酰胺造模,小鼠尾r下降,色淡,以C57、ICR恢復(fù)至正常,而KM、balb/c持續(xù)色淡。乙酰苯肼造模,小鼠尾r下降,色淡白,以造模后第4～7天最嚴(yán)重,而且一致地重于環(huán)磷酰胺造模。但14日左右各品系各組基本恢復(fù)至正常水平。2.7夜間獨立活動的計數(shù)水平方向2.7.1km鼠兩模型水平運動均無明顯的規(guī)律,總的趨勢是兩模型組偏少。血虛組第7、14日計數(shù)低于正常組(P<0.05)。見圖13。2.7.2ic-老鼠造模后,氣虛組與正常組接近;血虛組水平活動計數(shù)下降,其中第4、14日明顯低于正常組(P<0.05),以后逐漸恢復(fù)。見圖14。2.7.355.b和c氣虛組變化趨勢不明顯,但血虛組活動計數(shù)下降顯著,第7、11日明顯低于正常組(P<0.05),以后逐漸恢復(fù)。見圖15。2.7.4總變化的變化兩模型組水平運動第4日一度出現(xiàn)暫時的下降,與正常組間有差異(P<0.05)?？偟淖兓厔萑匀皇窍瘸霈F(xiàn)下降后逐漸恢復(fù)。見圖16。乙酰苯肼造模導(dǎo)致小鼠自主活動減弱較環(huán)磷酰胺嚴(yán)重,以balb/c最明顯,持續(xù)時間長。2.8晚上獨立活動的垂直方向總體上,乙酰苯肼造模導(dǎo)致小鼠垂直方向運動減弱較環(huán)磷酰胺嚴(yán)重而明顯,其中以balb/c最嚴(yán)重,持續(xù)時間長,而KM受到的影響最小。3其他品系小鼠四診表現(xiàn)比較以上結(jié)果提示,正常和相同造模因素影響下不同品系小鼠四診表現(xiàn)大致相同,因此,我們所建立的小鼠四診方法,適用于目前國內(nèi)外常用不同品系小鼠,包括被毛是白色或黑色的?？傮w上,乙酰苯肼造模早期影響嚴(yán)重,但恢復(fù)快、幅度大;環(huán)磷酰胺造模影響相對輕一些,恢復(fù)略緩慢環(huán)磷酰胺造模,在體重、腋溫、飲水等方面,KM小鼠所受到的影響最小,而ICR、C57小鼠耐受性差,恢復(fù)慢;但爪、尾色淡C57恢復(fù)最快,而KM、balb/c持續(xù)色淡。依據(jù)這些小鼠體重下降、腋溫降低、飲水減少、爪尾色淡有氣虛和偏陽虛的表現(xiàn)。對于脾主運化水谷方面,KM小鼠耐受性較強;而主生血方面,C57小鼠可能耐受性較強。