梔子不同提取物所致的大鼠肝腎病理學(xué)變化

梔子不同提取物所致的大鼠肝腎病理學(xué)變化

梔子是紫草科的一種常見(jiàn)的綠色灌木。它用于儲(chǔ)存和保護(hù)肝臟和膽囊。但也有報(bào)道認(rèn)為梔子的主要成分京尼平苷大劑量應(yīng)用具有肝毒性。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),大劑量應(yīng)用梔子的水提物和醇提物具有明顯的肝毒性,并證實(shí)京尼平苷是導(dǎo)致肝毒性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。另外,對(duì)梔子腎臟毒性研究尚未見(jiàn)報(bào)道。為此,本文在前期工作基礎(chǔ)上,對(duì)梔子導(dǎo)致的肝、腎病理學(xué)變化進(jìn)行了研究。1材料和方法1.1動(dòng)物合格號(hào)SD大鼠,雌雄各半,體重100～120g,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(京2002-0003)。1.2水和醇法提取梔子購(gòu)自江西省樟樹(shù)中藥飲片廠,經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所何希榮老師鑒定,系茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實(shí)。水提法:將梔子煎煮、過(guò)濾、濃縮、干燥并粉碎,經(jīng)HPLC檢測(cè)水提物中京尼平苷含量為8.12%;醇提法:將梔子冷浸于90%的乙醇中過(guò)夜、過(guò)濾、濃縮、干燥并粉碎,經(jīng)HPLC檢測(cè)醇提物中京尼平苷含量為14.10%,水提物和醇提物由我所付梅紅副研究員提供。京尼平苷樣品購(gòu)自安徽亳州亞強(qiáng)天然產(chǎn)物制品廠,經(jīng)HPLC檢測(cè)京尼平苷含量為98.54%。1.3病理組織學(xué)檢測(cè)肝、腎指標(biāo)大鼠按體重隨機(jī)分7組,空白對(duì)照組,梔子水提物3.08g/kg組(相當(dāng)于9g生藥/kg)、1.54g/kg組,醇提物1.62g/kg組(相當(dāng)于9g生藥kg)、0.81g/kg組,京尼平苷0.28g/kg組、0.14g/kg組。連續(xù)灌胃給藥3d,于第4天解剖,取肝、腎稱(chēng)重,計(jì)算肝、腎指數(shù),臟器指數(shù)=臟器重量/體重×100;將肝、腎固定于福爾馬林溶液中,石蠟包埋切片,HE染色。將肝臟病變程度分為5等級(jí):①“-”:肝組織結(jié)構(gòu)正常;②“+”:肝細(xì)胞核濃縮,核分裂增多,枯否細(xì)胞增生;③“++”:肝細(xì)胞核濃縮、氣球樣變及嗜酸性變,中央靜脈擴(kuò)張,膽管輕度增生,少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn):④“+++”:肝細(xì)胞變性,有片狀肝壞死,膽管明顯增生,較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn):⑤“++++”:肝細(xì)胞變性壞死,肝索排列紊亂,膽管明顯增生,有少量纖維組織增生,大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。將腎臟病變程度分為4個(gè)等級(jí):①“-”:腎組織結(jié)構(gòu)正常;②“+”:少量腎曲管輕度腫脹,間質(zhì)未見(jiàn)炎癥浸潤(rùn);③“++”:部分腎曲管腫脹,可見(jiàn)蛋白管型,間質(zhì)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn):④“+++”:大部分腎曲管腫脹變性,間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。1.4統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包,臟器重量及系數(shù)比較采用單因素方差分析,臟器病變程度比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1兩組患者的分布梔子水提物、醇提物、京尼平苷的大劑量組的肝臟重量和肝臟指數(shù)與空白組比較均(P<0.001),具有極顯著性差異。梔子水提物1.54g/kg組、醇提物0.81g/kg組的肝臟指數(shù)與空白組比較P<0.05,具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,見(jiàn)表1。2.2大鼠肝腎疾病的檢查2.2.1肝組織病理學(xué)檢測(cè)空白組:肉眼可見(jiàn)肝臟質(zhì)地柔軟、紅潤(rùn)有光澤,大小形態(tài)正常。鏡下見(jiàn)肝細(xì)胞無(wú)腫脹變性,中央靜脈未見(jiàn)擴(kuò)張,匯管區(qū)膽管無(wú)增生見(jiàn)圖1。梔子水提物、醇提物、京尼平苷大劑量組:肉眼見(jiàn)肝臟明顯腫脹、出現(xiàn)大片狀蒼白色的壞死區(qū)域,其它區(qū)域肝臟成黑色或暗紅色。鏡下見(jiàn)大部分肝細(xì)胞明顯腫脹,胞核濃縮,胞質(zhì)空網(wǎng)狀,似氣球樣變(見(jiàn)圖2),部分肝細(xì)胞壞死,個(gè)別區(qū)域僅見(jiàn)殘留的壞死肝細(xì)胞碎片,碎片中央可見(jiàn)肝細(xì)胞嗜酸性變,并見(jiàn)裸核、雙核或多核的肝細(xì)胞。部分區(qū)域肝細(xì)胞索排列紊亂,失去正常的組織結(jié)構(gòu)(見(jiàn)圖3),匯管區(qū)膽管明顯增生并交錯(cuò)相連(見(jiàn)圖2),間質(zhì)有少量纖維組織增生。膽管周?chē)写罅垦装Y細(xì)胞浸潤(rùn)。部分大鼠肝枯否細(xì)胞增生,核分裂像多見(jiàn)。梔子水提物、醇提物、京尼平苷小劑量組:肉眼見(jiàn)個(gè)別肝臟呈暗紅色。鏡下見(jiàn)部分大鼠肝枯否細(xì)胞增生,核分裂增多;血管擴(kuò)張淤血,部分匯管區(qū)有輕度毛細(xì)膽管增生,病理分級(jí)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,見(jiàn)表2。2.2.2患者各部位腎組織病理學(xué)觀察空白組:肉眼見(jiàn)腎臟色澤紅潤(rùn),質(zhì)地柔軟,大小形態(tài)正常。鏡下見(jiàn)腎曲管及腎小球未見(jiàn)腫脹變性,間質(zhì)無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),組織結(jié)構(gòu)正常(見(jiàn)圖4)。梔子水提物、醇提物、京尼平苷大劑量組:肉眼見(jiàn)腎臟輕度腫大,呈烏黑色。鏡下見(jiàn)腎曲管明顯腫脹,管腔內(nèi)可見(jiàn)淡粉色物質(zhì)沉積(見(jiàn)圖5),部分曲管壞死失去正常結(jié)構(gòu)(見(jiàn)圖6),集合管可見(jiàn)少量的蛋白性物質(zhì)滲出,間質(zhì)有大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),以小淋巴細(xì)胞為主。腎小球大小形態(tài)基本正常,未見(jiàn)明顯病變。梔子水提物、醇提物、京尼平苷小劑量組:肉眼見(jiàn)部分腎臟呈暗紅色,大小形態(tài)正常。鏡下見(jiàn)腎曲管輕度腫脹,管腔內(nèi)含淡粉染顆粒物。間質(zhì)未見(jiàn)炎癥浸潤(rùn),病理分級(jí)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,見(jiàn)表3。3梔子水提物、梔子醇提物的毒性將梔子水提物、醇提物、京尼平苷給大鼠灌胃3d后,第4d解剖,在3.08g/kg的水提物、1.62g/kg的醇提物、0.28g/kg京尼平苷組,肝臟重量明顯增加,指數(shù)增大;病理檢查發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞腫脹、變性壞死,中央靜脈淤血擴(kuò)張,匯管區(qū)膽管增生,間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),且肝細(xì)胞的變性是以匯管區(qū)周邊區(qū)開(kāi)始,并逐漸向小葉中央?yún)^(qū)延伸的,匯管區(qū)膽管增生也較明顯。此外,鏡下尚可見(jiàn)腎曲管腫脹變性,管腔內(nèi)蛋白管型沉積,間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等,說(shuō)明腎臟也存在不同程度的毒性病變。梔子水提物3.08g/kg劑量組,相當(dāng)于給予大鼠京尼平苷0.25g/kg,梔子醇提物1.62g/kg劑量組,相當(dāng)于給予大鼠京尼平苷0.228g/kg,京尼平苷的給藥量接近0.28g/kg,推測(cè)京尼平苷是梔子肝、腎毒性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。由于京尼平苷在