糧食中淀粉的測定

糧食中淀粉的測定

由于第5514-1985年gb和t的定義缺陷，試驗結(jié)果相對較低。GB/T5514—2008標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布和實施對其進(jìn)行了較大的修改,主要變化為:要求樣品的粉碎粒度全部通過孔徑0.45mm篩;酸處理的水解溫度改為沸水浴回流1h;使用試劑淀粉酶替代自制淀粉酶;要求實驗用水應(yīng)符合GB/T6682—2008《分析實驗室用水規(guī)格》中三級水的要求;修改了試樣稱量精度;修改了對重復(fù)性的要求;樣品經(jīng)淀粉酶、鹽酸水解后,按GB/T5009.7—2008《食品中還原糖的測定》部分內(nèi)容進(jìn)行操作。依據(jù)新的檢驗標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測定,樣品的前期處理比較容易掌握,關(guān)鍵是樣品處理并稀釋至一定體積后的測定步驟(還原糖測定)。下面將測定糧食中淀粉的主要測定步驟,以及測定中遇到的問題進(jìn)行分析。1還原性淀粉的測定試樣經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類后,其中α-淀粉經(jīng)淀粉酶水解成雙糖,雙糖再用鹽酸水解成具有還原性的單糖,最后按還原糖測定,并折算成淀粉。試樣的制備、處理、水分測定按GB/T5514—2008執(zhí)行,同時量取50mL水及與試樣處理時相同量的α-淀粉酶溶液,按同一方法作試劑空白試驗。2還原糖量的測定樣品經(jīng)按GB/T5514—2008處理后,在加熱條件下,以亞甲基藍(lán)作指示劑,滴定標(biāo)定過的堿性酒石酸銅液(用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定),根據(jù)樣品液消耗體積計算還原糖量。2.1b工作原理即在氧指數(shù)和溶劑配制(1)堿性酒石酸銅(甲液)稱取15g硫酸銅(CuSO4·5H2O)及0.05g亞甲基藍(lán),溶于水中并稀釋至1000mL。(2)堿性酒石酸銅(乙液)稱取50g酒石酸鉀鈉,75g氫氧化鈉,溶于水中,再加入4g亞鐵氰化鉀,完全溶解后,用水稀釋1000mL,貯存于橡膠塞玻璃瓶內(nèi)。(3)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱取1g(精確至0.0001g)經(jīng)過98~100℃干燥2h的純葡萄糖,加水溶解后加入5mL鹽酸,并以水稀釋至1000mL,此溶液每毫升相當(dāng)于1.0mg葡萄糖。2.2測量步驟2.2.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液總體積的測定吸取5.0mL堿性酒石酸銅(甲液)及5.0mL堿性酒石酸銅(乙液),置于150mL錐形瓶中。加水10mL,加入玻璃珠兩粒,從滴定管滴加約9mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁熱以每一滴2s的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點,記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積。同時平行操作3份,取其平均值,計算每10mL(甲、乙液各5mL)堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量(mg),也可按上述方法標(biāo)定4~20mL堿性酒石酸銅溶液(甲、乙液各半)來適應(yīng)試樣中還原糖的濃度變化。2.2.2還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液體積測定吸取5.0mL堿性酒石酸銅(甲液)及5.0mL堿性酒石酸銅(乙液),置于150mL錐形瓶中。加水10mL,加入玻璃珠兩粒,控制在2min內(nèi)加熱至沸,保持沸騰以先快后慢的速度,從滴定管中滴加試樣溶液,并保持溶液沸騰狀態(tài),待溶液顏色變淺時,以每一滴2s的速度滴定,直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積。當(dāng)樣液中還原糖濃度過高時,應(yīng)適當(dāng)稀釋后,再進(jìn)行正式測定,使每次滴定消耗樣液的體積控制在與標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液時所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近,約在10mL左右。當(dāng)濃度過低時則采取直接加入10mL樣品液,免去加水10mL,再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點,記錄消耗的體積與標(biāo)定時消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液體積之差相當(dāng)于10mL樣液中所含還原糖的量。2.2.3消耗體積測定吸取5.0mL堿性酒石酸銅(甲液)及5.0mL堿性酒石酸銅(乙液),置于150mL錐形瓶中。加水10mL,加入玻璃珠兩粒,從滴定管滴加比預(yù)測體積少1mL的試樣溶液至錐形瓶中,使在2min內(nèi)加熱至沸,保持沸騰繼續(xù)以每一滴2s速度滴定,直至藍(lán)色剛好褪去為終點,記錄樣液消耗體積。同法平行操作3份,得出平均消耗體積。3分析和建議對糖測定的問題3.1測定條件的控制根據(jù)測定步驟,首先要標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液(2.2.1),可是依照操作方法,實驗不能觀察到溶液藍(lán)色褪去的現(xiàn)象。因為其中“趁熱以每一滴2s的滴定速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液”中的“趁熱”兩字,廣義上可以理解低于沸騰,高于室溫就應(yīng)當(dāng)滿足反應(yīng)條件。但由于還原糖和堿性酒石酸銅試劑反應(yīng)速度較慢,以及還原糖和亞甲基藍(lán)反應(yīng)的可逆性,“趁熱”繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,永遠(yuǎn)不會顯示到達(dá)終點。那么實驗必須滿足反應(yīng)條件,即:在加熱至沸條件下繼續(xù)滴定(同2.2.2試樣溶液預(yù)測、2.2.3試樣溶液測定條件一致),應(yīng)將“趁熱”改為“趁沸”(保持沸騰),這樣才能體現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的嚴(yán)謹(jǐn)(測定條件的統(tǒng)一)。在此特別強(qiáng)調(diào),滴定時一定不要離開熱源,必須使溶液保持“沸騰”,除加快反應(yīng)速度,也是讓上升的蒸汽阻止空氣浸入到溶液中,避免無色亞甲基藍(lán)和空氣中的氧結(jié)合又變?yōu)樗{(lán)色,使結(jié)果偏低。3.2測定還原糖濃度(1)標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液、試樣溶液預(yù)測、試樣溶液測定,三者滴定操作條件應(yīng)保持一致。對每一次滴定使用的錐型瓶的規(guī)格質(zhì)量、加熱電爐功率(可采用800W電爐)、滴定速度、滴定消耗的大致體積、終點觀察方法(液面半邊變透明為滴定終點)等都應(yīng)盡量一致,以減少誤差。(2)樣品溶液的測定樣品液中還原糖濃度應(yīng)在0.1%左右,與標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液相近,繼續(xù)滴定至終點的體積應(yīng)控制在0.5~1.0mL以內(nèi),以保證在1min內(nèi)完成繼續(xù)滴定的工作。(3)加熱至沸時間要相同,否則蒸發(fā)量不同,反應(yīng)液的堿度也不同,從而影響反應(yīng)的速度、反應(yīng)進(jìn)行的程度及最終測定的結(jié)果。(4)測定試劑空白中還原糖濃度,采取直接加入10mL空白液,免去10mL加水,再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(先預(yù)測)。紀(jì)錄消耗的體積與標(biāo)定時消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積之差相當(dāng)于10mL空白液中所含還原糖的量。(5)由于整個滴定過程必須在沸騰條件下進(jìn)行,為防止燒傷及便于滴定操作,可于滴定管尖部加接一彎形尖管,彎形尖管規(guī)格及安裝如圖1所示(標(biāo)準(zhǔn)要求用酸式滴定管,但不好掌握,可