核酸化學(xué)-核酸的提取、分離和含量測(cè)定

DNA的粗提取與鑒定1.

NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14mol／L時(shí),DNA的溶解度最低。2.DNA不溶于酒精溶液。3.DNA遇二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色。1、脹破細(xì)胞，得DNA溶液（1）雞血細(xì)胞液5-10ml，加入蒸餾水20ml，使血細(xì)胞加速破裂，過濾，取其濾液。(2)溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA

將物質(zhì)的量濃度為2mol/l的氯化鈉溶液40ml加入到濾液中，攪拌使其混合均勻，這時(shí)DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。2、析出含DNA的黏稠物沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)輕輕攪拌，這時(shí)會(huì)有絲狀物出現(xiàn)，隨著蒸餾水的加入逐漸增多，一直到氯化鈉濃度約為0.14mol/l時(shí)，不再繼續(xù)增加。實(shí)驗(yàn)步驟3、第二次析出DNA的黏稠物（1）所得DNA加入2mol/l的氯化鈉溶液20ml，使其溶解。（2）過濾，取其濾液，DNA溶于濾液中（3）加入冷卻的酒精溶液50ml，溶液中出現(xiàn)雜質(zhì)較少的絲狀物，它的主要成分就是DNA。DNA的鑒定

用二苯胺（沸水浴）鑒定，DNA遇二苯胺會(huì)變藍(lán)色。兩次加入蒸餾水的作用一樣嗎？DNA的直徑約為2nm，實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的絲狀物的粗細(xì)是否就表示一個(gè)DNA分子直徑的大小？1、DNA分子結(jié)構(gòu)主要特點(diǎn)DNA分子是有

條鏈組成，

盤旋成

結(jié)構(gòu)。

交替連接，排列在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架；

排列在內(nèi)側(cè)。堿基通過

連接成堿基對(duì)，并遵循

原則。反向平行雙螺旋脫氧核糖和磷酸堿基對(duì)氫鍵堿基互補(bǔ)配對(duì)2二、DNA模型分析2、DNA的多樣性AAATTTGGGGCCCATCDNA分子結(jié)構(gòu)主要特點(diǎn)AAATTTGGGGCCCATC兩條長(zhǎng)鏈上的脫氧核糖與磷酸交替排列的順序是穩(wěn)定不變的。長(zhǎng)鏈中的堿基對(duì)的排列順序是千變?nèi)f化的。兩條長(zhǎng)鏈上的脫氧核糖與磷酸交替排列的順序是穩(wěn)定不變的。長(zhǎng)鏈中的堿基對(duì)的排列順序是千變?nèi)f化的。DNA分子的特異性就體現(xiàn)在特定的堿基（對(duì)）排列順序中。

思考：研究表明：DNA結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性與四種堿基的含量有關(guān)：G和C的含量越多，DNA的結(jié)構(gòu)就越穩(wěn)定?；竟羌転榱姿岷兔撗鹾颂墙惶媾帕?；兩鏈反向平行；有兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)；具有穩(wěn)定性、多樣性、特異性二、核酸的組成成分核酸nucleicacid核苷酸nucleotide核苷nucleoside磷酸phosphate嘌呤堿purinebase或嘧啶堿pyrimidinebase（堿基base）核糖ribose

或脫氧核糖deoxyribose

（戊糖amylsugar）

組成核酸的戊糖有兩種。DNA所含的糖為β-D-2-脫氧核糖；RNA所含的糖則為β-D-核糖。（一）戊糖PentoseRiboseDeoxyribose（二）堿基（Base）核酸中的堿基分為兩類：嘌呤堿：腺嘌呤A、鳥嘌呤G

嘧啶堿：胞嘧啶C、胸腺嘧啶T、尿嘧啶U

嘌呤（Purine）123456978腺嘌呤AdenineA鳥嘌呤guanineG

嘧啶（Pyrimidine）123456尿嘧啶uracilU胞嘧啶cytosineC胸腺嘧啶thymineTDNA中的四種堿基及它們間的氫鍵胞嘧啶胸腺嘧啶鳥嘌呤腺嘌呤TCAG－CH3RNA分子中的四個(gè)堿基腺嘌呤A、鳥嘌呤G、胞嘧啶C、尿嘧啶U稀有堿基：又叫微量堿基或修飾堿基，是主要堿基的衍生物。如次黃嘌呤、1-甲基次黃嘌呤、二氫尿嘧啶。（三）磷酸

OOO‖‖解離 ‖HO—P—OHHO—P—

—P—O－

|||OHOHO－磷酸磷酰基（四）核苷戊糖與堿基結(jié)合物nucleoside

1、核苷的形成

核苷由戊糖和堿基縮合而成，嘌呤的N9或嘧啶的N1與戊糖C-1’-OH以C-N糖苷鍵相連接。dANNNNNH2OHHOHOCH2HHHH9NONOOHOCH2HHHHOHOHU1核苷戊糖+堿基

糖與堿基之間的C-N鍵，稱為C-N糖苷鍵1’2’3’4’5’(OH)1’2’3’4’5’(OH)

核苷OHOH2COHOHOH1′2′3′4′5′核糖NNNNHHHH9腺嘌呤腺苷

AGCU

dAdGdCdT核酸長(zhǎng)鏈記錄方式之演進(jìn)PRB3’2’5’1’ATCGATCGPOH5’3’5’

pApTpCpGpApTpCpG-OH

3’5’

pATCGATCG-OH

3’ATCGATCGDNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的表示方法：（1）結(jié)構(gòu)式表示法：（2）線條式表示法：（3）字母式表示法：書與文獻(xiàn)中（五）核苷酸(nucleotide)——

核苷與磷酸結(jié)合物

1、核苷酸是形成核酸大分子的基本單元?？梢詫⒑塑账峥醋骱塑盏牧姿狨?。HHHHHHHHHAMPdAMP2、核糖分子中除了C1

位—OH成苷外，還有C2、C3和C5

位三個(gè)自由羥基，可以分別生成相應(yīng)位的核苷酸。脫氧核糖分子中除了C1

位—OH成苷外，則只有C3和C5位兩個(gè)自由羥基，能分別生成相應(yīng)位核苷酸。

RiboseDeoxyribose2’，3’，5’一核糖核苷酸(2′-AMP)(3′-AMP)(5′-AMP)3’，5’一脫氧核糖核苷酸Deoxyadenosine3’-monphosphate(3’-dAMP)Deoxyadenosine5’-monphosphate(5’-dAMP)脫氧（核糖）核苷酸（deoxyribonucleotide）：

3、核苷酸的名稱

某苷—（酯化位）—磷酸或（酯化位）—某苷酸如：腺苷-（5′）-磷酸或（5′）—腺苷酸

4、核苷酸的代號(hào)一般以核苷號(hào)加“MP”形成，如5′—AMP。常見核苷酸多為5′—核苷酸，通常不寫出酯化位置（5′略去）。如5′—AMP寫成AMP。

DNA和RNA分別有四種基本核苷酸。

二、DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)