同期卵長路gnrh-pg和卵巢止奶牛同期婦女輸精技術(shù)的應用

同期卵長路gnrh-pg和卵巢止奶牛同期婦女輸精技術(shù)的應用

近年來，隨著奶牛業(yè)的發(fā)展，奶牛的產(chǎn)量逐漸提高，奶牛的繁殖變得越來越困難，產(chǎn)仔間距擴大，一些牛場超過450天，嚴重影響了牛場的經(jīng)濟效益。目前同期排卵定時輸精技術(shù)(TimedArtificiaInsemination,TAI)已成為規(guī)?；龇敝彻芾碇兄匾獌?nèi)容之一。TAI是指使一群奶牛在同一時期內(nèi)發(fā)情并排卵,不需要觀察發(fā)情就能進行人工授精的技術(shù),它是改進的同期發(fā)情技術(shù),具有效果可靠,使用面廣,效率更高的優(yōu)點,有利于大型規(guī)模牧場采用。但是受多種因素的影響,我國各地使用該技術(shù)的效果不一,使用方法、對象及操作還存在許多問題。本文總結(jié)了近年來國內(nèi)外該技術(shù)應用的進展供參考。1gnrh注射TAI技術(shù)以促性腺激素釋放激素(GnRH)為基礎,結(jié)合前列腺素(PG)、P4、雌激素(E2)、馬(人)絨毛膜促性腺激素(eCG、HCG)等一起使用,最終使母牛同期化排卵,進行集中TAI。目前一般程序為第一次注射GnRH,誘導任何一次卵泡發(fā)育波中的卵泡排卵并形成黃體,GnRH注射在促進前一波卵泡排卵后又促進新一輪卵泡發(fā)育波的出現(xiàn),7d后注射PG溶解黃體,此時卵巢上存在一個來自第一次GnRH注射后產(chǎn)生的優(yōu)勢卵泡,該優(yōu)勢卵泡由于黃體溶解將繼續(xù)發(fā)育,使母牛進入發(fā)情期,間隔2d,在優(yōu)勢卵泡發(fā)育接近成熟時對母牛第二次注射GnRH以誘導卵泡排卵。最后在第二次GnRH注射后一定時間對母牛輸精,這一技術(shù)在GnRH誘發(fā)排卵之前就已經(jīng)調(diào)整了卵泡的成熟和黃體的退化,從而無需發(fā)情鑒定就可TAI。2coor技術(shù)方案和效果2.1中國研究現(xiàn)狀2.1.1兩種類型牛奶的情期受胎率滕勇利用一次PG法,二次PG法和GnRH-PG-GnRH法誘導奶牛同期發(fā)情這些方法均要在觀察發(fā)情后配種,受胎率分別為31.25%,41.94%和85.71%。GnRH-PG-GnRH法的受胎率明顯高于其他兩種方法。李啟業(yè)等用LHRH-A3對奶牛進行誘導發(fā)情,受胎率為87.5%。姚國良采用Ovsynch程序(即對母牛先用GnRH處理,7d后注射PG,48h后再注射一次GnRH,第2次注射GnRH后18~20h輸精),分別對乏情奶牛、卵巢靜止奶牛及正常發(fā)情奶牛進行試驗,顯示乏情奶牛情期受胎率為74%,高于常規(guī)配種49.8%的受胎率;卵巢靜止奶牛的治療有效率為97.2%,情期受胎率為64%;產(chǎn)后正常發(fā)情奶牛應用定時輸精程序處理后,其情期受胎率分別提高了21%和25.3%。劉念銳等選擇產(chǎn)后80d左右,長期不發(fā)情,直腸檢查卵巢多為靜止、持久黃體、卵巢囊腫等狀況奶牛119頭,采用Ovsynch程序處理,得到37%的妊娠率,高于常規(guī)處理牛群25%的妊娠率。阿布力孜等使用GnRH和PG處理,經(jīng)產(chǎn)牛的受胎率為71.4%;后備牛的受胎率為75.0%,二者之間無顯著差異。凌明湖等對產(chǎn)后32~144d乏情奶牛和屢配不孕奶牛定時輸精,結(jié)果乏情奶牛第一情期受胎率為37.5%、下一情期受胎率為50%,分別比該場2008年的實際生產(chǎn)水平高7.5%和6.1%。屢配不孕奶牛第一情期受胎率為37.5%、下一情期受胎率為60%,分別比該場2008年的實際生產(chǎn)水平高7.5%和16.1%。2.1.2注射pg的并發(fā)癥和受胎率高慶華等利用孕激素海綿栓-孕馬血清(PMSG)-PG方案(圖1)即先用孕激素通過陰道栓處理7d,結(jié)束時注射PG,結(jié)果同期發(fā)情率達到75%,48h同期率達到62.15%,受胎率達到44.14%。黃開華等利用GnRH—PG—GnRH法及增加孕酮緩釋劑的方法,都得到了約50%的受胎率,結(jié)果表明1胎牛效果最好,達55%,5胎及5胎以上牛只有20%左右的受胎率。2.2國外的研究現(xiàn)狀2.2.1采用ovsynch方案的妊娠率結(jié)果見表1為了確定TAI的最佳時機,Pursley等比較了GnRH二次處理后第0h、8h、16h、24h、32h輸精的受胎率,結(jié)果表明,GnRH二次處理后第16h受胎率(44%)最高,第32h受胎率最低。這可能是第32h實施TAI時已發(fā)生排卵,待精子獲能后,卵子的受精能力已降低,因此TAI在二次處理后第16h實施最好。Geary等做了Ovsynch和CO-Synch方案的對比研究,CO-Synch方案進行了少許改進,與Ovsynch方案的激素注射程序完全相同,但是牛在第9d注射GnRH時就TAI,結(jié)果Ovsynch方案牛的妊娠率為57%,明顯高于使用CO-Synch方案牛49%的妊娠率,可能是由于用Ovsynch方案處理的母牛輸精時間與排卵時間更接近的緣故。Martinez等在注射GnRH后,觀察第一個卵泡活動波的優(yōu)勢卵泡排卵之后的第3d、第6d和第9d誘導母牛卵泡波出現(xiàn)的能力,發(fā)現(xiàn)只有那些對處理發(fā)生反應的母?？梢哉T導出現(xiàn)新的卵泡波,并且在處理后的第7d有74%的奶牛存在一個優(yōu)勢卵泡,其中85%的優(yōu)勢卵泡大于9mm并有排卵能力,說明奶牛在GnRH處理后7d出現(xiàn)了優(yōu)勢卵泡。Moreira等認為TAI理想的處理階段應該是母牛處于發(fā)情周期的5~10d。因為在發(fā)情早期,自發(fā)性排卵已經(jīng)發(fā)生而潛在的優(yōu)勢卵泡太小,對注射GnRH的反應不足以誘導排卵,因此在第二次注射GnRH時,優(yōu)勢卵泡可能已經(jīng)退化,退化的優(yōu)勢卵泡不發(fā)生排卵,即使排卵最終受精率也比較低,因此奶牛在發(fā)情早期應用Ovsynch程序的妊娠率可能很低。Brusveen等對一牛群集中注射GnRH,7d后注射PG,然后分別按以下方案處理(圖2):(1)注射PG后48h注射GnRH同時進行TAI(Cosynch-48);(2)注射PG后56h注射GnRH,然后在16h之后TAI(Cosynch-56);(3)注射PG后72h注射GnRH同時進行TAI(Cosynch-72),在人工授精后31~33d利用超聲進行妊娠診斷,52~54d再次進行妊娠診斷。Cosynch-48妊娠率為29.2%,Cosynch-72妊娠率為25.4%,Cosynch-56的妊娠率最高,達到38.6%。Ahujaa、Stevenson、Bartolome等在各自的研究中,使用常規(guī)的Ovsynch方案都得到了50%左右的受胎率。Burns等研究了TAI方案中用HCG替換GnRH的同期化排卵效果(圖3)。結(jié)果表明,不同劑量的HCG與GnRH在排卵反應方面的效果相近,在一定情況下可以代替GnRH。2.2.2pgeg的應用Geary采用CO-Synch方案得到52%的妊娠率,與Ovsynch方案54%的妊娠率相比,差異不顯著,當把CIDR加入到這個方案中時(圖4),妊娠率從48﹪提高到59%。Mialot等在實驗中采用PRID-PGF2α-GnRH(圖5)和PRID-PGF2α-PMSG(圖6)方案,受胎率分別為44.7%和53.8%。Larson等為了研究發(fā)情鑒定對TAI的影響,及在以GnRH為基礎的方案中增加CIDR能否提高生殖力,采用5種方案進行試驗。(1)對照組先埋栓7d,去栓同時給予PG,注射PG后觀察發(fā)情并人工授精。如果沒有觀察到發(fā)情,則在84h注射GnRH并TAI;(2)GnRH處理后7d注射PG,接著在60h后第二次注射GnRH并TAI;(3)在第2種方案基礎上增加CIDR,即在第一次注射GnRH與PG之間;(4)GnRH處理后7d注射PG,然后觀察發(fā)情并人工授精,如果沒有觀察到發(fā)情,則在84h注射GnRH并TAI;(5)第4種方案增加CIDR,在第一次注射GnRH與PG之間。結(jié)果第5種方案的妊娠率為58%,第3種方案的妊娠率為54%,第4種方案的妊娠率為53﹪,對照組的妊娠率為53%,而第2種方案僅為44%。Busch等改變常規(guī)TAI程序中CIDR的處理方式(圖7),即在GnRH處理前23d置入CIDR,14d后撤栓,實驗組與對照組分別于注射PG后72h、54h第二次注射GnRH并TAI。結(jié)果實驗組的情期受胎率為62%,高于對照組的47%。該研究表明提前用CIDR處理或延長處理時間,能夠提高母牛受胎率。Small等研究了在降低孕酮劑量情況下CIDR和eCG的使用效果(圖8),結(jié)果表明:低劑量的孕酮有增加大卵泡的直徑和響應GnRH的排卵等作用,但它并不能提高TAI的受胎率,所以經(jīng)產(chǎn)牛一般不需使用CIDR,但對一些乏情牛可以選擇使用;而在第7d注射PG的同時注射eG,可促進卵泡發(fā)育,提高初產(chǎn)牛的受胎率,但對經(jīng)產(chǎn)牛無明顯作用。Bridges等對“CO-Synch+CIDR”方案進行了改進,即在注射GnRH后5d用PG處理,12h后第二次注射PG,在第二次注射PG60h后TAI。結(jié)果母牛受胎率提高了9.1%~13.3%,但由于該方案改變因素較多,究竟是哪種因素導致了受胎率的提高還有待研究。3未來研究的方向和改進措施3.1血液采血控制試驗我國采集連續(xù)初步采血裝置的必要性奶牛卵泡的發(fā)育是個復雜的生理過程,卵泡波主要與血液中FSH濃度有關,隨著卵泡的生長,FSH濃度逐漸下降。此時,LH脈沖性釋放可以促進卵泡的繼續(xù)生長以及E2的產(chǎn)生。隨著優(yōu)勢卵泡的生長,E2分泌也加強,當血液中有足夠的E2來誘導出現(xiàn)LH峰時,引起了優(yōu)勢卵泡排卵。通過采集血液進行分析可以判斷母牛發(fā)情周期及其卵泡的生長狀態(tài)。但是常規(guī)的采血需要多次保定,并且對牛的應激也較大,而應用連續(xù)遙控采血裝置可以解決這個難題,國內(nèi)對該裝置應用于奶牛TAI排卵時間的研究尚未見報道。國外用近紅外線裝置測量后軀和臀部溫度差變化等研究發(fā)情和排卵規(guī)律,因此這些方面還有待研究。3.2超聲檢測和普通table-pcr檢測均有有效的流程,及在輸精前后和產(chǎn)微生物的生長情況對比,主要表現(xiàn)為在使用激素處理后,母牛的黃體、卵泡都會發(fā)生相應的變化,使用B超檢查,可以相對準確判斷此時黃體和卵泡的狀態(tài),以便決定是否適合輸精。McArt等對比研究了普通TAI方案和與超聲結(jié)合的TAI方案對奶牛繁殖力的影響。結(jié)果表明,使用超聲檢測的方案能夠提高奶牛的繁殖力,并且在牛群中運用超聲檢測還可提高發(fā)情檢測率,使奶牛產(chǎn)犢間隔縮短,減少了直腸觸摸和激素注射的次數(shù),同時降低了生產(chǎn)成本。這些方面國內(nèi)應深入研究。3.3民法的研究方法規(guī)范了調(diào)濕前高校基層民法主Larson等在激素處理前10d開始收集待處理牛的血清樣品,以確定該牛所處的發(fā)情周期階段。研究中發(fā)現(xiàn),同樣處理條件下,進行發(fā)情鑒定后再TAI母牛的受胎率更高。但是進行發(fā)情鑒定又增加了工作量,與TAI程序的目的相悖。所以我們需要在不增加工作量的情況下進行發(fā)情鑒定。在Walsh等的研究中就選擇了計步器作為判斷母牛是否發(fā)情,因為在排卵前72~16h,母?；顒恿繒饾u增加,從16h開始突然增加,并持續(xù)發(fā)情。此外,不同規(guī)模的牛場和不同飼養(yǎng)條件下,應根據(jù)飼養(yǎng)方式、牛的品種、環(huán)境條件的不同,研究不同地域條件下TAI中輸精的合適時間。TAI基本程序適用于產(chǎn)后70d不發(fā)情或初檢空懷牛,第2次注射GnRH前可以先直腸檢查或B超檢查鑒定卵泡,若無卵泡則視為無效,體況差的或患病牛不宜使用,第2次注射GnRH后配種時間有一定的變化,要以當?shù)氐呐R床研究規(guī)律為準。3.4pge的注射在TAI前進行預處理可以促進子宮復舊,恢復其正常功能,也就間接地調(diào)節(jié)了卵巢的功能與活性。尤其對于那些因為觀察不到位等人為原因造成的產(chǎn)后發(fā)情率低,而牛群的子宮、卵泡、體況尚可的情況下,使用預處理TAI方案能夠產(chǎn)生明顯的經(jīng)濟效益。預處理方案一般選擇PG處理,即在分娩后39d注射PG,14d后再注射一次。第2次注射PG,牛開始表現(xiàn)發(fā)情時進行配種。第2次注射PG的12~14d之后,沒有觀察到牛發(fā)情,就可使用同期化排卵技術(shù)。使用PG預處理不但能夠調(diào)節(jié)卵巢的正常功能,促進優(yōu)勢卵泡發(fā)育、成熟、排卵,同時還能在一定程度上起到凈化子宮作用,減少了子宮疾病的發(fā)生。張明輝等應用PG結(jié)合GnRH的預同步定時輸精程序,在奶牛產(chǎn)后35~40d開始處理,奶牛產(chǎn)后80d的參配率和情期受胎率分別達到92.6%和46.7%,產(chǎn)后80d和產(chǎn)后180d總受胎率分別達到43.3%和93.5%,預處理方案適用于產(chǎn)后70d發(fā)情率較差的大中型牧場,能夠提高產(chǎn)后75d參配率,取得良好效果。因此預處理方案可以在規(guī)?；膛鲋型茝V應用。3.5保胎、注射海調(diào)奶牛胚胎死亡經(jīng)常發(fā)生于妊娠早期,據(jù)報道,奶牛1個月內(nèi)的早期胚胎死亡率可達38%,高產(chǎn)奶牛更高。適當?shù)臓I養(yǎng)水平和良好的飼養(yǎng)管理可以減少胚胎早期死亡。高樹等認為可根據(jù)臨床實際情況在配后5~7d、15~17d分別對高產(chǎn)奶牛采取保胎措施,每次注射黃體酮100mg或HCG1500~2000IU。也可用LH保胎。鐘壽坤使用LH對青年牛處理,使流產(chǎn)率下降50%多,效果明顯。在使用藥物或激素保胎同時,還應加強妊娠母牛的管理,防止其他外部因素造成的流產(chǎn)。3.6管理好牛場繁殖的質(zhì)量和氣候在生產(chǎn)中,動物的繁殖機能受很多因素的影響,同樣品種、年齡、體況、卵巢發(fā)育狀態(tài)及地區(qū)、氣候等因素都會影響TAI的處理效果,因此要調(diào)查分析出牛場繁殖問題的主要原因,尤其要做好奶牛圍產(chǎn)期的保健、繁殖機能監(jiān)控和飼養(yǎng)管理。奶牛夏季炎熱天氣對其應激較強,在夏季處理效果可能較差。因此需要注意奶牛的防暑降溫。日糧也要平衡,不能造成奶牛過肥或過瘦