基因工程專練

基因工程專練一、非選擇題1．人乳鐵蛋白是一種重要的藥用保健蛋白。下圖表達(dá)運(yùn)用乳腺生物反映器生產(chǎn)人乳鐵蛋白的過程，圖中Tetr表達(dá)四環(huán)素抗性基因，Ampr表達(dá)氨芐青霉素抗性基因，五種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示，請(qǐng)回答下列問題：（1）要將人乳鐵蛋白基因插入質(zhì)粒，若只允許使用一種限制酶，應(yīng)選擇的限制酶是___________，酶能起催化作用的原理是___________。（2）據(jù)圖分析，篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞首先需要在含___________（填“四環(huán)素”、“氨芐青霉素”或“四環(huán)素或氨芐靑霉素”）的培養(yǎng)基上進(jìn)行，因素是___________。（3）若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為________，對(duì)于該部位，這兩種酶__________（填“都不能”或“只有一種能”）切開。（4）培養(yǎng)出早期胚胎后，科學(xué)家欲進(jìn)行胚胎分割移植，則應(yīng)當(dāng)選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的____________，將其移入盛有操作液的培養(yǎng)皿中，然后用分割針進(jìn)行分割。2．某質(zhì)粒上有SaiⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四壞素基因和抗氨芐青霉素基因。運(yùn)用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程，以下圖所示?；卮鹣铝袉栴}：（1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，釆用最多的辦法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。其中用到的質(zhì)粒是__________；該質(zhì)粒含有一段特殊的DNA片段，稱為__________。該辦法從農(nóng)桿菌的作用是__________。（2）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，和只用一種酶切割目的基因的兩端及質(zhì)粒相比，選用HindⅢ和SaiⅠ兩種酶的好處是____________________。（3）含有目的基因的農(nóng)桿菌可根據(jù)標(biāo)記基因進(jìn)行篩選。若農(nóng)桿菌在含有氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上都能夠生長(zhǎng)繁殖，農(nóng)桿菌中與否巳含有目的基因?__________（填“是”或“否”）。為什么？__________。3．[生物——選修3：當(dāng)代生物科技專項(xiàng)]下圖為某種轉(zhuǎn)基因抗病棉花哺育過程圖，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題：(1)PCR技術(shù)運(yùn)用的基本原理是___。運(yùn)用該技術(shù)擴(kuò)增目的DNA片段（子鏈的延伸方向從5'→3'），應(yīng)選擇圖巾的引物____（填字母）與模板DNA結(jié)合。(2)在構(gòu)建基因體現(xiàn)載體時(shí)，慣用兩種不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，獲得不同的黏性末端，其重要目的是避免____和反向連接。(3)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入植物細(xì)胞中慣用的辦法是____。我國(guó)科學(xué)家將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花受體細(xì)胞所用的辦法是____。(4)重組細(xì)胞通過G、H過程成功地哺育出了轉(zhuǎn)基因抗病毒馬鈴薯植株，此過程涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)廣泛應(yīng)用于___、植物體細(xì)胞雜交育種等育種過程。(5)研究表明，轉(zhuǎn)基因植物能夠通過花粉將外源基因擴(kuò)散到其它植物，從而對(duì)生態(tài)環(huán)境造成潛在的危害。因此，科學(xué)家設(shè)法將目的基因整合到受體細(xì)胞的葉綠體基因組中，這樣做的目的是避免目的基因__________________。4．Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞?？蒲腥藛T運(yùn)用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖（圖中數(shù)字序號(hào)表達(dá)的是有關(guān)過程）。請(qǐng)回答下列有關(guān)問題：（1）過程②運(yùn)用的技術(shù)是______________，過程③中涉及到了基因工程技術(shù)，其中作為受體細(xì)胞的是____________。（2）過程③中獲取的目的基因是_______________，能夠根據(jù)該基因的___________________設(shè)計(jì)引物，運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因片段。按此辦法和圖示技術(shù)流程，完畢基Rag2基因缺失小鼠的基因治療涉及的酶有____________和耐高溫的DNA聚合酶(Taq酶)等。（3）圖中造血干細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)最少有___________個(gè)來源。為檢測(cè)Rag2基因的體現(xiàn)狀況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用____________進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。圖中所述克隆技術(shù)屬于___________克隆。5．【選修3:當(dāng)代生物科技專項(xiàng)】干旱會(huì)影響農(nóng)作物產(chǎn)量，科學(xué)家們對(duì)此進(jìn)行了研究。如圖為用探針檢查某一抗旱植物基因型的原理，有關(guān)基因用R和r表達(dá)。（1）基因R與r的本質(zhì)區(qū)別是___________________的不同。在運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增R或r基因過程中，運(yùn)用___________可尋找抗旱基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增。（2）若被檢植株發(fā)生A現(xiàn)象，不發(fā)生B、C現(xiàn)象，則被檢植物的基因型為____________________。（3）用從基因文庫中獲取目的基因的辦法獲取抗旱基因時(shí)需要用到限制酶，限制酶的具體作用部位是______________________。（4）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的辦法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其根據(jù)重要是：當(dāng)植物受到損傷時(shí)，傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，這時(shí)農(nóng)桿菌中的______________________。（5）經(jīng)檢測(cè)，抗旱基因已經(jīng)導(dǎo)入煙草細(xì)胞，但未檢測(cè)出抗旱基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA，從構(gòu)建基因體現(xiàn)載體的角度推測(cè)，最可能的因素是______________________________。6．玉米（2n=20）是我國(guó)栽培面積最大的作物。為使其獲得抗除草劑性狀，獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米自交系A(chǔ)，技術(shù)路線以下圖。（1）為避免酶切產(chǎn)物本身環(huán)化，構(gòu)建體現(xiàn)載體需用2種限制酶，選擇的原則是__________（單選）。①Ti質(zhì)粒內(nèi)，每種限制酶只有一種切割位點(diǎn)②G基因編碼蛋白質(zhì)的序列中，每種限制酶只有一種切割位點(diǎn)③酶切后，G基因形成的兩個(gè)黏性末端序列不相似④酶切后，Ti質(zhì)粒形成的兩個(gè)黏性末端序列相似A．①③B．①④C．②③D．②④（2）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)含有的基本條件有____________________（答出兩點(diǎn)即可）。而作為基因體現(xiàn)載體，除滿足上述基本條件外，還需含有____________________（答出兩點(diǎn)即可）。（3）下表是4種玉米自交幼胚組織培養(yǎng)不同階段的成果。據(jù)表可知，細(xì)胞脫分化時(shí)使用的激素是____________________，自交系__________的幼胚最適合培養(yǎng)成愈傷組織作為轉(zhuǎn)化受體。（4）慣用Ca2+解決土壤農(nóng)桿菌，其目的是____________________。農(nóng)桿菌的T-DNA攜帶插入其內(nèi)的片段轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的__________上。篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織，需使用含__________的選擇培養(yǎng)基。（5）轉(zhuǎn)化過程中，愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，造成未轉(zhuǎn)化愈傷組織隔壁可能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。含有內(nèi)含子的報(bào)告基因只能在真核生物中對(duì)的體現(xiàn)，其產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。用K分別解決下列愈傷組織，出現(xiàn)藍(lán)色的是____________________（多選）。A．無農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織B．無農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織C．農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織D．農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織（6）組織培養(yǎng)獲得的轉(zhuǎn)基因植株（核DNA中僅插入一種G基因）進(jìn)行自交，在子代含G基因的植株中，純合子占__________。繼續(xù)篩選，最后選育出抗除草劑純合自交系A(chǔ)。（7）下表是鑒定含G基因植株的4種辦法。請(qǐng)預(yù)測(cè)同一后裔群體中，4種辦法檢出的含G基因植株的比例，從小到大依次是____________________。辦法檢測(cè)對(duì)象檢測(cè)目的檢出的含G基因植株的比例PCR擴(kuò)增基因組DNAG基因x1分子雜交總mRNAG基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物x2抗原-抗體雜交總蛋白質(zhì)G基因編碼的蛋白質(zhì)x3噴灑除草劑幼苗抗除草劑幼苗x47．金屬硫蛋白(MT)是一類廣泛存在的金屬結(jié)合蛋白，某研究小組計(jì)劃通過多聚酶鏈?zhǔn)椒从?PCR)擴(kuò)增獲得目的基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌，用于重金屬廢水的凈化解決。PCR擴(kuò)增過程示意圖以下，請(qǐng)回答下列問題：（1）設(shè)計(jì)一對(duì)與MT基因兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物(引物1和引物2)，為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，在引物中需要增加適宜的______________位點(diǎn)。設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間形成______________，而造成引物自連。（2）圖中環(huán)節(jié)1代表______________，環(huán)節(jié)2代表退火，環(huán)節(jié)3代表延伸，這三個(gè)環(huán)節(jié)構(gòu)成一輪循環(huán)。（3）PCR擴(kuò)增時(shí)，退火溫度的設(shè)定是成敗的核心。退火溫度過高會(huì)破壞引物與模板之間的堿基配對(duì)。退火溫度的設(shè)定與引物長(zhǎng)度、堿基構(gòu)成有關(guān)，長(zhǎng)度相似但____________的引物需要設(shè)定更高的退火溫度。（4）如果PCR反映得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，則能夠采用的改善方法有_____(填序號(hào)：①升高退火溫度②減少退火溫度③重新設(shè)計(jì)引物)。8．【生物——選修3:當(dāng)代生物科技專項(xiàng)】肺氣腫病在北美比較常見，病人以前只能依賴于注射人的α—抗胰蛋白酶做替代療法，但價(jià)格昂貴，英國(guó)羅斯林研究所研制成功的轉(zhuǎn)基因羊，其乳汁中含有α一抗胰蛋白酶，可治療肺氣腫病。回答下列問題：（1）為獲取目的基因，需要在肝臟細(xì)胞中提取__________，通過反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生cDNA。（2）α-抗胰蛋白酶基因與______、標(biāo)記基因和終止子等調(diào)控組件重組在一起，構(gòu)建基因體現(xiàn)載體，其中標(biāo)記基因的作用是____________。然后通過顯微注射技術(shù)，導(dǎo)入羊的受精卵中。也能夠?qū)?gòu)建好的基因體現(xiàn)載體導(dǎo)入羊體細(xì)胞中，再通過__________將該體細(xì)胞核注入處在_________期的去核的卵母細(xì)胞中。（3）通過早期胚胎培養(yǎng)，得到早期胚胎。為了選育出能泌乳的雌羊，普通在胚胎的________部位取樣，做性別鑒定。（4）α—抗胰蛋白酶是一種糖蛋白，普通不用傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因大腸桿菌生產(chǎn)，由于__________。9．【生物——選修3:當(dāng)代也物科技專項(xiàng)】下表是幾個(gè)限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2標(biāo)注有關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相似的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)回答下列問題:（1）質(zhì)粒作為基因工程的載體，除了圖1中所示的構(gòu)造制條件外，還需要含有____________。用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用___________兩種限制酶切割。若用Sau3AI切圖1質(zhì)粒最多可能獲得___________種大小不同的DNA片段。（2）為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加______________________。（3）為了在體外擴(kuò)增目的基因，可采用____________________反映，該反映體系需要模板、緩沖液、引物、dNTP和__________________。為獲得圖2中的目的基因，所用的引物不會(huì)是_______________，引物在退火階段，與DNA模板按__________________原則結(jié)合。10．將外源基因整合到葉綠體基因組中并成功體現(xiàn)，這就是葉綠體轉(zhuǎn)基因技術(shù)，該技術(shù)能有效改良植物的品質(zhì)。請(qǐng)回答下列問題：（1）若要在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增外源基因，可采用PCR技術(shù)，該技術(shù)運(yùn)用了_______________的原理。（2）對(duì)大多數(shù)高等植物而言，與傳統(tǒng)的細(xì)胞核轉(zhuǎn)基因相比，葉綠體轉(zhuǎn)基因更穩(wěn)定，因其不會(huì)隨_____(填“花粉”或“卵細(xì)胞”)傳給后裔，從而保持了_________(填“父本”或“母本”)的遺傳特性。（3）運(yùn)用_______________解決植物體細(xì)胞可得到原生質(zhì)體，再通過_____________法將目的基因?qū)朐|(zhì)體，當(dāng)原生質(zhì)體再長(zhǎng)出__________________時(shí)，便可通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)出對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)基因幼苗。（4）一種完整的基因體現(xiàn)載體應(yīng)當(dāng)涉及啟動(dòng)子、_________________________________等，啟動(dòng)子位于基因的首端，它是____________________，有它才干啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。11．閱讀下面的有關(guān)材料，回答下列問題：材料甲：基因工程中運(yùn)用PCR技術(shù)不僅可從含目的基因的DNA中獲得目的基因，還能夠大量擴(kuò)增目的基因。材料乙：近來，由于我國(guó)從美國(guó)進(jìn)口大量轉(zhuǎn)基因食品而引發(fā)了國(guó)民的關(guān)注和爭(zhēng)論。材料丙：北京交出一份治霾成績(jī)單：PM2.5年均濃度下降4％，一級(jí)優(yōu)的天數(shù)增加了22天，重污染天數(shù)減少了13天。北京霧霾狀況在有望變好。材料?。鹤?0世紀(jì)60年代以來，我國(guó)家兔、綿羊、牛、馬和山羊的胚胎移植相繼獲得成功。（1）在PCR反映過程中，將基因不停加以復(fù)制，使其數(shù)量呈_______方式增加。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈延伸的基礎(chǔ)，因此運(yùn)用PCR擴(kuò)增目的基因的前提是已知__________，設(shè)計(jì)引物對(duì)A與B的規(guī)定是兩者不能________________。n輪循環(huán)后，產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占比例是____________。（2）對(duì)轉(zhuǎn)基因生物安全性的爭(zhēng)論重要集中在__________、生物安全和環(huán)境安全三個(gè)方面。（3）普通來說，生態(tài)工程的重要任務(wù)是對(duì)已被破壞的生態(tài)環(huán)境進(jìn)行修復(fù)，對(duì)造成環(huán)境污染和破壞的生產(chǎn)方式進(jìn)行改善，并提高生態(tài)系統(tǒng)的生產(chǎn)力。與傳統(tǒng)的工程相比含有少消耗、多效益、_________等特點(diǎn)。確保社會(huì)—經(jīng)濟(jì)—生態(tài)協(xié)調(diào)發(fā)展體現(xiàn)了生態(tài)工程的______________原理。（4）胚胎移植是指將雌性動(dòng)物的_______，或者通過_______及其它方式得到的胚胎，移植到同種的、__________相似的其它雌性動(dòng)物的體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。12．科研人員運(yùn)用生物工程技術(shù)對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，技術(shù)流程如圖，分析回答⑴環(huán)節(jié)①的技術(shù)名稱_________。⑵將基因?qū)隕S細(xì)胞而不是上皮細(xì)胞是由于____________。⑶環(huán)節(jié)③中，需要構(gòu)建含有___________________的基因體現(xiàn)載體。之前運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，能夠從圖2的ABCD四種單鏈DNA片斷中選用_______作為引物。對(duì)干擾素基因片斷和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時(shí)，可選用限制酶的組合為________________或_________。⑷將環(huán)節(jié)③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)___________色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)。為檢測(cè)干擾素基因與否體現(xiàn)，能夠采用_________________________的辦法。13．【生物—選修3：當(dāng)代生物科技專項(xiàng)】下圖1為某種慣用質(zhì)粒的序列圖，LacZ基因編碼的酶能使無色的X—gal變?yōu)樗{(lán)色，Amp為氨芐青霉素，抗性基因。圖2為目的基因的序列及其有關(guān)限制酶的識(shí)別序列。請(qǐng)回答下列問題：（1）若要篩選成功導(dǎo)入目的基因的重組質(zhì)粒，培養(yǎng)基中應(yīng)加入的物質(zhì)有_________________和_________________，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)需要的工具酶有_________________，對(duì)獲取的目的基因可用_________________技術(shù)對(duì)其擴(kuò)增。（2）實(shí)驗(yàn)小組用BamHI和BlgII兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌中，在篩選重組質(zhì)粒的培養(yǎng)基上，若大腸桿菌菌落顯藍(lán)色，闡明導(dǎo)入了____________________。沒有導(dǎo)入任何外源DNA的大腸桿菌________________（填“能”或“不能”）在該培養(yǎng)基上生存。（3）將若干個(gè)質(zhì)粒和目的基因用BamHI和BlgII兩種限制酶切割后，用DNA連接酶相連，然后再用BamHI和EcoRI切割成功連接后的產(chǎn)物，獲得了長(zhǎng)度為0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四種長(zhǎng)度的DNA片段，則目的基因的長(zhǎng)度為____________kb（已知目的基因的長(zhǎng)度不不大于1kb，1kb=1000個(gè)堿基對(duì)）。14．醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，番茄紅素含有一定的抗癌效果，其合成、轉(zhuǎn)化途徑如圖一所示。由于普通番茄合成的番茄紅素易發(fā)生轉(zhuǎn)化，科學(xué)家設(shè)計(jì)了一種重組DNA（質(zhì)粒三）能體現(xiàn)出雙鏈RNA(發(fā)卡)，番茄細(xì)胞能夠識(shí)別侵入的雙鏈RNA并將該雙鏈RNA及含有相似序列的單鏈RNA一起降解，提高了果實(shí)中番茄紅素的含量（圖二）。請(qǐng)分析回答下列問題：（1）體現(xiàn)出“發(fā)卡”的DNA片段事實(shí)上是兩個(gè)反向連接的____________________基因，由于“發(fā)卡”制止了其在細(xì)胞內(nèi)的________________（填“轉(zhuǎn)錄”或“翻譯”）過程，因此提高了果實(shí)中番茄紅素的含量。（2）為確保第二個(gè)目的基因片段反向連接，解決已開環(huán)質(zhì)粒所用的兩種限制酶是_________和_______。（3）科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，哺育成功的轉(zhuǎn)基因番茄植株對(duì)光能的運(yùn)用能力有所下降，據(jù)圖一推測(cè)可能的因素是____________________________________________。為解決此問題，能夠按照乳腺生物反映器的原理，在此體現(xiàn)出“發(fā)卡”的DNA片段前面加入只在果實(shí)中發(fā)揮作用的_________________。（4）去磷酸化是去掉黏性末端最外側(cè)游離的磷酸基團(tuán)。對(duì)已開環(huán)的質(zhì)粒二兩端去磷酸化的重要作用是制止其_____________________，該DNA分子仍能夠和目的基因連接，形成缺少____________個(gè)磷酸二酯鍵的重組質(zhì)粒，隨即在細(xì)胞中被修復(fù)。15．下圖是科學(xué)家運(yùn)用人的α-抗胰蛋白酶基因哺育轉(zhuǎn)基因羊的過程，據(jù)圖回答下列問題。（1）獲得目的基因有許多辦法，圖中A到B獲得大量目的基因的辦法___________，該技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知___________序列，方便根據(jù)這一序列合成___________。（2）圖中B到C的過程屬于基因工程操作程序中的___________，1處表達(dá)___________，是一段特殊構(gòu)造的DNA片段，位于基因首端，是___________酶識(shí)別結(jié)合的部位，有了它才干驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。（3）C到D過程采用最多的辦法是___________，受體細(xì)胞D普通是___________。（4）D到E，E到F分別使用的技術(shù)是___________、__________基因工程參考答案1．Sau3AⅠ能夠明顯減少化學(xué)反映的活化能氨芐青霉素用限制酶切割后破壞了Tetr基因，但不會(huì)破壞Ampr基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞（對(duì)氨芐青霉素含有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來都不能桑葚胚或囊胚2．Ti質(zhì)粒T-DNA感染煙草細(xì)胞，把目的基因插入到煙草細(xì)胞的染色體DNA上避免目的基因自連和質(zhì)粒自連,以形成帶有目的基因的重組質(zhì)粒否含有目的基因的質(zhì)粒中抗四環(huán)素的基因被破壞3．DNA(雙鏈)復(fù)制B、C目的基因和質(zhì)粒本身環(huán)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法花粉管通道法基因工程育種、單倍體育種通過花粉向其它植物擴(kuò)散4．早期胚胎培養(yǎng)ES細(xì)胞(正常的）Rag2基因脫氧核苷酸序列(或堿基對(duì)序列或遺傳信息）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和胰蛋白酶三抗Rag2蛋白的抗體治療性(或體細(xì)胞核移植等）5．脫氧核苷酸排列次序（或堿基對(duì)排列次序）引物RR磷酸二酯鍵Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上基因體現(xiàn)載體上的目的基因首端為加入啟動(dòng)子6．A復(fù)制原點(diǎn)和酶切位點(diǎn)啟動(dòng)子和終止子2，4-D乙提高受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率（或使之成為能吸取周邊環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞）染色體DNA除草劑BD1/3X4，X3，X2，X17．限制性核酸內(nèi)切酶堿基互補(bǔ)配對(duì)變性GC含量高②③8．α—抗胰蛋白酶的mRNA乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子篩選含有目的基因的受體細(xì)胞核移植技術(shù)減數(shù)第二次分裂中滋養(yǎng)層大腸桿菌是原核細(xì)胞，不含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器，不能對(duì)核糖體合成的蛋內(nèi)質(zhì)進(jìn)行加工，不能產(chǎn)生有生物活性的α—抗胰蛋白酶9．復(fù)制原點(diǎn)、終止子BclI和HindIII7四環(huán)素聚合酶鏈?zhǔn)剑ɑ騊CR)酶（或Taq酶）引物乙堿基互補(bǔ)配對(duì)10．DNA雙鏈復(fù)制花粉母本纖維素酶和果膠酶農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（或基因槍）細(xì)胞壁目的基因、標(biāo)記基因、終止子RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的部位11．指數(shù)（2n）目的基因的核苷酸序列互補(bǔ)配對(duì)食物可持續(xù)整體性早期胚胎體外受精（轉(zhuǎn)基因、核移植）【答題空10】生理狀態(tài)【點(diǎn)睛】本題核心是計(jì)算PCR技術(shù)經(jīng)n次循環(huán)后，得到的產(chǎn)物中含引物A的比例的分析規(guī)律：首先，在n次循環(huán)后，得到的含目的基因的DNA片段共有2n個(gè)；另首先，每個(gè)含目的基因的DNA片段都有1條鏈可與引物A結(jié)合；第三，觀察發(fā)現(xiàn)在每輪循環(huán)中，最初以引物B結(jié)合的母鏈產(chǎn)生的這個(gè)DNA片段，始終不含引物A。12．核移植ES細(xì)胞含有發(fā)育的全能性干擾素基因啟動(dòng)子終止子B和CHindⅢ和PstⅠEcoRⅠ和PstⅠ綠抗原-抗體雜交【點(diǎn)睛】PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因和基因工程操作環(huán)節(jié)都是考試的重點(diǎn)，也是理解的難點(diǎn)，解題時(shí)極易失分，特別是如何對(duì)的判斷限制酶的選擇，需要引發(fā)足夠的重視，現(xiàn)舉例以下：(1)根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點(diǎn)擬定限制酶的種類：①應(yīng)選擇切點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇PstⅠ。②不能選擇切點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶，如圖甲不能選擇SmaⅠ。③為避免目的基因和質(zhì)粒的本身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲也可選擇用PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切點(diǎn))。(2)根據(jù)質(zhì)粒的特點(diǎn)擬定限制酶的種類：①所選限制酶要與切割目的基因的限制酶一致，以確保含有相似的黏性末端。②質(zhì)粒作為載體必須含有標(biāo)記基因等，因此所選擇的限制酶盡量不要破壞這些構(gòu)造，如圖乙中限制酶SmaⅠ會(huì)破壞標(biāo)記基因。13．X—gal氨芐青霉素限制酶、DNA連接酶PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒从常]有目的基因的空質(zhì)粒重組質(zhì)粒不能1.8【解析】(1)依題意和圖示分析可知：在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，由于目的基因的插入，使質(zhì)粒中的LacZ基因的構(gòu)造遭到破壞，造成LacZ基因編碼的酶失活或不能編碼該酶，因此不能使無色的X—gal變?yōu)樗{(lán)色；但目的基因的插入，沒有破壞Ampr（氨芐青霉素抗性基因）的構(gòu)造，因此含有重組質(zhì)粒的微生物對(duì)氨芐青霉素有抗性。綜上分析，若要篩選成功導(dǎo)入目的基因的重組質(zhì)粒，培養(yǎng)基中應(yīng)加入的物質(zhì)有X—gal和氨芐青霉素。構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)需要的工具酶有限制酶和DNA連接酶。運(yùn)用PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒从常┘夹g(shù)能夠擴(kuò)增目的基因。(2)結(jié)合對(duì)(1)分析可知：成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，LacZ基因編碼的酶失活或不能編碼該酶，因此不能使無色的X—gal變?yōu)樗{(lán)色。因此在篩選重組質(zhì)粒的培養(yǎng)基上，若大腸桿菌菌落顯藍(lán)色，闡明導(dǎo)入了沒有目的基因的空質(zhì)粒；若大腸桿菌菌落顯白色，闡明導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。沒有導(dǎo)入任何外源DNA的大腸桿菌，因缺少Ampr（氨芐青霉素抗性基因），對(duì)氨芐青霉素沒有抗性，因此不能在該培養(yǎng)基上生存。(3)已知目的基因的長(zhǎng)度不不大于1kb。依題意并分析圖示：將若干個(gè)質(zhì)粒和目的基因用BamHI和BlgII兩種限制酶切割后，用DNA連接酶相連，得到的重組質(zhì)粒中含有1個(gè)BamHI酶切位點(diǎn)和1個(gè)EcoRI酶切位點(diǎn)，同時(shí)得到的沒有目的基因的空質(zhì)粒中含有2個(gè)BamHI酶切位點(diǎn)和1個(gè)EcoRI酶切位點(diǎn)。用BamHI和Eco