香果、香精、沙姜和陳皮提取物的體外抗菌作用研究

香果、香精、沙姜和陳皮提取物的體外抗菌作用研究

食品是人類生存和發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)。食品安全問題引起了世界各國的關(guān)注。盡管現(xiàn)代科技發(fā)展已經(jīng)達(dá)到了一定的水平,但是因?yàn)槭吃葱灾虏【l(fā)的疾病在全世界都沒有達(dá)到很好的控制,它仍然在危害人們的健康,食品安全仍然面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。近些年來,人們對(duì)合成食品添加劑感到強(qiáng)烈不安,所以選擇安全性高的天然防腐劑顯得尤為重要。香辛料指通常用作食品調(diào)理或飲料調(diào)配所用的,能夠給食品呈現(xiàn)具有各種辛、香和辣味等風(fēng)味的食用香料植物的簡(jiǎn)稱[1~2]。它可以用來給各類食品加香和調(diào)味,還能用來改善食品的色、香和味,使食品對(duì)人產(chǎn)生強(qiáng)烈誘惑感,還能夠提高食品的自身身價(jià)和產(chǎn)品的檔次。香辛料多數(shù)具有抗氧化和抑菌作用。在食用香辛料中,大多數(shù)來自天然,又有很好的抗菌作用,而且它們的安全性已為人們多年的經(jīng)驗(yàn)所證實(shí)。它們都有各自獨(dú)有的香味,既能夠增加香氣、調(diào)節(jié)氣味、還具有防腐作用、延長食物的保存時(shí)間。有研究發(fā)現(xiàn)山蒼子、丁香、肉桂和牛至的提取物,對(duì)于細(xì)菌,霉菌和酵母菌都有很強(qiáng)的殺菌效果;八角茴香、生姜、花椒、大蒜、山蒼子、薄荷、桉葉、牛至和紫蘇9種香辛料提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌均有不同程度的抑制作用,鼠尾草、九層塔、香果和辣椒均能很好地抑制李斯特菌的生長。本文研究了香果、香葉、沙姜和陳皮乙醇提取物對(duì)食源性致病菌的抑制作用,為開發(fā)天然防腐劑提供理論基礎(chǔ)。1試驗(yàn)材料和方法1.1試驗(yàn)設(shè)備及儀器香果、香葉、沙姜和陳皮,購于徐州礦西農(nóng)貿(mào)市場(chǎng);胰蛋白胨大豆瓊脂和胰蛋白胨大豆肉湯,北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上海申生科技有限公司;微型植物粉碎機(jī),天津市泰斯特儀器有限公司;DNP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司;SW-CJ-IC標(biāo)準(zhǔn)型雙人凈化工作臺(tái),蘇州凈化設(shè)備廠。1.2菌株和菌株單增李斯特菌、英諾克李斯特菌、綿羊李斯特菌、格氏李斯特菌、威爾士李斯特菌、副溶血性弧菌33846、副溶血性弧菌33847和副溶血性弧菌17802購自ATCC;大腸桿菌O157:H7、腸炎沙門氏菌和金黃色葡萄球菌中科院微生物所;惡臭假單胞菌、熒光假單胞菌、銅綠假單胞菌和耶爾森氏菌,由試驗(yàn)室分離并經(jīng)生理生化鑒定。1.3測(cè)試方法1.3.1香辛料蒸發(fā)作用將香果、香葉、沙姜和陳皮用粉碎機(jī)粉碎至顆粒直徑約為0.1mm,各取30g粉碎完的香辛料于蒸餾瓶中,加入300mL體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇,在80℃水浴條件下浸提1h,將浸提液抽濾后得到濾液,使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮,得到濃縮液。將得到的濃縮液用蒸餾水配成生藥量為1g/mL的提取液備用。1.3.2水浴培養(yǎng)將各供試菌種接種于TSB中,置于37℃水浴中恒溫振蕩培養(yǎng)活化18~24h。活化好的菌種,在無菌條件下,用生理鹽水稀釋,制成106CFU/mL菌懸液。1.3.3香辛料提取物的制備打孔器制備直徑為6mm的定性濾紙圓片,121℃干熱滅菌20min后置于烘箱中烘干備用。用滅菌鑷子取烘干后的滅菌濾紙片到香辛料提取物中浸泡12h,以無菌水浸過的濾紙片做空白。濾紙片經(jīng)充分浸泡后取出晾干,備用。在培養(yǎng)皿中倒入TSA培養(yǎng)基,待其完全冷卻凝固后,再分別移取各菌懸液0.1mL,用涂布器涂布均勻。以無菌操作將浸泡過香辛料提取物的濾紙片和一個(gè)空白濾紙片貼在一個(gè)平板上,每皿做4個(gè)受試樣品,同時(shí)做空白對(duì)照,每種香辛料做3個(gè)平行。培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中,在37℃下培養(yǎng)18~24h。測(cè)量抑菌圈直徑大小。2試驗(yàn)結(jié)果2.1抑菌效果的測(cè)定由表1可知:香果提取液對(duì)各種供試菌種均有較好的抑菌效果,其中對(duì)惡臭假單胞菌的抑菌效果最強(qiáng),對(duì)副溶血性弧菌ATCC17802的抑菌效果最弱。2.2菌株抑菌效果由表2可知:香葉提取液對(duì)各種供試菌種均有較好的抑菌效果,其中對(duì)綿羊李斯特菌的抑菌效果最強(qiáng),對(duì)惡臭假單胞菌和英諾克李斯特菌的抑菌效果最弱。2.3抑菌效果的情況由表3可知:沙姜提取液對(duì)各種供試菌均有較好的抑菌效果,且抑菌效果相差不大,其中對(duì)單增李斯特菌、耶爾森氏菌屬和英諾克李斯特菌的抑菌效果都較好,對(duì)副溶血性弧菌ATCC33847的抑菌效果最弱。2.4陳皮、香果、種子、沙姜和沙姜提取液對(duì)哈爾森氏菌屬的抑菌效果由表4可知:陳皮提取液對(duì)各種供試菌種均有一定的抑菌效果,但沒有香果、香葉和沙姜提取液的抑菌效果好,陳皮提取液對(duì)耶爾森氏菌屬的抑菌效果最好,對(duì)惡臭假單胞菌、熒光假單胞菌、副溶血性弧菌ATCC33847和英諾克李斯特菌的抑菌效果最弱。3香辛料的抑菌作用香果、香葉和沙姜對(duì)受試食源性致病菌的抑菌效果較好,陳皮提取液的抑菌效果相對(duì)較弱。各香辛料的抑