不同產(chǎn)地天麻中天麻素的含量測定研究 中藥學(xué)專業(yè)

前言天麻本品是蘭科植物天麻GastrodiaelataBl.的干燥塊莖。[1]又稱赤箭、離母（《本經(jīng)》）、定風(fēng)草（《藥性論》）、神草（《吳普本草》）、自動草（《湖南藥物志》）等。我國長久以來流傳的中藥天麻，是一種既可以作食品，也可以作要用的中藥材。其主要可用在平息肝風(fēng)，抑制肌肉萎縮，平肝抑陽，祛除風(fēng)濕，疏通經(jīng)絡(luò)等方面。也常在頭痛眩暈，小孩風(fēng)癇，驚厥抽搐，手足麻木，肢體不遂，風(fēng)濕疼痛等病癥中應(yīng)用。植物天麻是一種多年生的寄生草本植物，全植物不含有葉綠素，一般高度在65到110厘米之間。本植物的莖塊較為厚大，整體呈卵圓形，長度在8到12厘米之間，直徑約為4厘米，外表的具有環(huán)節(jié)，但不明顯。莖直立生長，為圓柱狀，顯黃褐色。植物葉片呈魚鱗形，在表面可以看到有明顯的細(xì)脈，葉托部分為短鞘狀。天麻植物的花序為穗狀花序，花呈紅褐色；具有膜質(zhì)的苞片，呈長條狀卵圓形或狹披針形；其種子的特點(diǎn)是量大而小，似粉末大小，在6到7月之間開花。7至8月結(jié)果。其所產(chǎn)的果實和莖葉也可以具有一定的藥效。根據(jù)史籍記載天麻在我國已有2000年藥用歷史了，但是由于天麻的生長發(fā)育、生活習(xí)性等較為獨(dú)特，所以雖然有這么長的歷史記載，但是這些史籍中對天麻生長習(xí)性、形態(tài)發(fā)育等方面的記錄卻并不多。在《神農(nóng)本草經(jīng)》里面就早有記載，天麻的功效為“可以祛除人體和外界的邪氣，長期服用有益于增強(qiáng)氣力,助長陰氣、滋潤身體”。在這之后的不少醫(yī)藥類專著都記載有關(guān)于天麻的功效的相關(guān)信息，而其中收錄撰寫關(guān)于天麻的功效最為詳盡的應(yīng)該是《本草綱目》這本專著了，其中對天麻的功效描述有：“天麻味辛，性溫，藥物無毒。長期服食可補(bǔ)虛益氣，可以補(bǔ)陰有益于保健身體，輕身增年，消除癰疽膿腫、下肢脹滿、急性腹痛和便血。主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,手足的肌肉收縮，兒童驚風(fēng)，有益于腰部和膝部強(qiáng)勁，可以增強(qiáng)筋力，有助于陰氣增長，可以補(bǔ)五勞、七傷，疏通血脈，開竅，沒有副作用”。早在晉代葛洪所寫的《抱樸子》中就記載有天麻與蜜環(huán)菌的關(guān)系：“這種植物可以作藥用，下部根塊形似芋頭，有十二枚游子環(huán)繞在四周。離塊莖不遠(yuǎn)的地方，有許多像白發(fā)一樣的細(xì)根，雖然相互接壤卻沒有相連，但以氣相屬耳”。[2]國內(nèi)的野生天麻主要生長分布在西北、西南、華東和東北的10多個省(市、區(qū))之中，而作為中藥商品則主要在貴州、云南、四川、湖南等地區(qū)生產(chǎn)出售，除此以上地區(qū)之外，在東北和華北的部分地區(qū)也有進(jìn)行產(chǎn)品的生產(chǎn)。一般人們普遍認(rèn)為貴州的野生天麻最為出名有效，而現(xiàn)代中藥商品生產(chǎn)產(chǎn)量最大的則是陜西地區(qū)。[3]植物天麻一般多生長在陰暗潮濕的樹林和有較多腐殖質(zhì)的地方。本植物喜好陰涼、濕潤的環(huán)境，懼寒、懼旱、懼熱和懼積水。人工栽培的天麻應(yīng)該在有較多腐殖質(zhì)、疏松肥沃、pH在5.5-6.0之間且具有優(yōu)良排水性能的砂質(zhì)土壤來進(jìn)行栽培。一般人工栽培的天麻分為冬天麻和春天麻，由于兩者均為人工進(jìn)行栽培，故習(xí)稱為栽培天麻，前者在冬天進(jìn)行采挖，后者則在春天。一般來說，冬天麻的質(zhì)量都會比春天麻好。但是由于春天麻采挖后會有有莖基殘留，這點(diǎn)和野生天麻一樣，所以在中藥材市場上經(jīng)常會有不良商人用較高的價格把春天麻當(dāng)成野生天麻進(jìn)行販賣，以此謀取暴利。國家醫(yī)藥管理局和衛(wèi)生部在1984年頒布了新規(guī)《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》，其中規(guī)定了中藥天麻按每公斤支數(shù)劃分了等級，每公斤26支為一等品、46支為二等、90支以內(nèi)為三等，而多于90支則為四等。所以在現(xiàn)在中藥材市場中，主要以上述標(biāo)準(zhǔn)評價天麻質(zhì)量，即在商品中不同等級之間天麻的性狀、質(zhì)量、價格等各方面都有較大的差異；但是，對天麻有效成分的質(zhì)量評價到現(xiàn)在還沒有一套完整的體系。[4]在上世紀(jì)早期以前，天然的野生植物資源是中藥天麻的主要來源，由于本身尋找和采掘的困難以至于產(chǎn)量稀少并不能的滿足人們用藥需求,而且這樣也使得了野生天麻的大規(guī)模的減少，以至于供求關(guān)系逐漸出現(xiàn)尖銳化的現(xiàn)象；直至到70年代，研究者們發(fā)現(xiàn)了天麻和蜜環(huán)菌的之間存在著一定的關(guān)系，根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)促使人民成功進(jìn)行了大規(guī)模的天麻種植，緩解了供求不足的現(xiàn)象。但由于長期使用這一人工栽培的方式，導(dǎo)致天麻的種莖生長能力退化，于是在80年代末天麻大面積的產(chǎn)量下降的現(xiàn)象又再次出現(xiàn)了，科研人員分析認(rèn)為是天麻的萌芽率過低而導(dǎo)致的。一些專家針對這一現(xiàn)象提出了相關(guān)的見解，為了確保萌芽率，必須先制造出優(yōu)良的萌發(fā)拌生菌再天麻進(jìn)行有性繁殖。然而至今科研人員們?nèi)詻]有探索出可以有效解決在萌發(fā)菌的制作過程中的污染現(xiàn)象和成品菌易軟化霉?fàn)€的這些會導(dǎo)致了天麻萌芽率過低等問題的解決方案。[2]天麻主含天麻素、天麻素苷元、對羥基苯甲醛、檸檬酸、派立辛、天麻醚苷、β-甾醇、香草醇、琉拍酸等。[5]除此之外中藥天麻中還含多種酚類化合物。[6]而在這些活性成份之中含量最高且最為有效單體成份為天麻素。[7]其廣泛應(yīng)用于眩暈、神經(jīng)痛、頭痛和癲癇這些病癥上，而且對精神緊張抑郁、失眠多夢等病癥也有一定的治療效果，還有鎮(zhèn)靜和安眠等作用，為常用的鎮(zhèn)靜安眠藥。[8-9]天麻素在非酶體系中一般較為穩(wěn)定，而在肝、腎、腦等組織中時，天麻素可進(jìn)行代謝成天麻苷元。當(dāng)天麻素在組織器官內(nèi)進(jìn)行代謝的時候，代謝速度按腎、腦、肝逐漸減慢；當(dāng)其在腦組織中進(jìn)行代謝時，在小腦、丘腦和延腦區(qū)域代謝速度比在皮層和海馬區(qū)等區(qū)域代謝的速度要快。[6]。因為具有泛用的藥理作用，且使用之后的毒副作用較小，天麻素逐漸受到了人們的青睞。被廣泛用于治療驚厥、眩暈、癱瘓、癲癇、破傷風(fēng)、哮喘和免疫功能障礙。近來在國內(nèi)外的許多研究中表明，天麻素在治療老年性癡呆癥病情、抑制神經(jīng)性疼痛和修復(fù)腦缺血再灌注損傷等病癥上有優(yōu)良的表現(xiàn)，其療效有一定的保證。社會對其需求量也越來越大。但是由于天麻中天麻素的含量較低的原因，使其應(yīng)用受到限制，于是越來越多科研人員投入到人工合成的天麻素研究中。[10-11]本實驗將以天麻素作為評價指標(biāo)評估天麻質(zhì)量。在一般實驗室條件中，對天麻進(jìn)行的含量測定主要有薄層掃描法、紫外分光光度法、高效液相色譜法等測定方法。[12]這些方法當(dāng)中，高效液相色譜法是一較為常用的測定方法。高效液相色譜法（HPLC）是色譜法的發(fā)展歷史中一個極為重要的部分，該法用液體作為流動相，使用高壓輸液系統(tǒng)將極性不同的單一溶劑或者比例不同的混合溶劑等流動相輸入到已經(jīng)裝有固定相的色譜柱之中，待檢測溶液在色譜柱內(nèi)被分離為各組分后，再進(jìn)入檢測器進(jìn)行測定，進(jìn)而完成對試樣各組分的測定。HPLC出現(xiàn)才短短四十年的時間，但這種色譜分離技術(shù)的發(fā)展卻非?？焖?，而且具有較為廣泛運(yùn)用。其有著快速高效、靈敏度高、范圍廣、可反復(fù)利用色譜柱、進(jìn)樣量少、易回收等優(yōu)點(diǎn)；本實驗將采用高效液相色譜法對貴州產(chǎn)地和云南產(chǎn)地的兩種天麻樣品進(jìn)行含量測定，以比較兩產(chǎn)地所產(chǎn)天麻的質(zhì)量。2材料與儀器2.1儀器與設(shè)備熱風(fēng)循環(huán)烘箱CT-C-Ⅱ(杭州海善制藥設(shè)備有限公司)多功能高速中藥粉碎機(jī)DFY-500(搖擺式)(浙江省永康市金穗機(jī)械制造廠)萬分之一天平SartotiusCPA2235(杭州海善制藥設(shè)備有限公司)超聲波數(shù)顯式清洗機(jī)HNY-300（廣州市華南超聲設(shè)備有限公司）三頻數(shù)控超聲波清洗器KQ-700VDB(昆山蘇美自動化科技有限公司)硅膠板GF254(青島海洋化工有限公司）色譜柱WelchromC18-WR(月旭科技（上海）股份有限公司)高效液相色譜儀DXDK-620型(島津國際貿(mào)易有限公司）2.2藥品與試劑天麻素樣品1（自制，提取于貴州產(chǎn)地天麻）天麻素樣品2（自制，提取于云南產(chǎn)地天麻）對照品（中檢院）甲醇（廣州化學(xué)試劑廠）乙酸乙酯（分析純AR，蘇州永邁物資有限公司）乙腈（廣州化學(xué)試劑廠）磷酸溶液（廣州化學(xué)試劑廠）乙醇（分析純AR，廣州化學(xué)試劑廠）3方法與結(jié)果3.1定性鑒別3.1.1試液的制備（1）精密稱取本品粉末0.5g，再加甲醇5mL，用超聲儀超聲處理30分鐘，過濾后，取濾液作為供試品溶液。（2）另外稱取天麻對照藥材0.5g，依照（1）的制法制成對照藥材溶液。（3）另取天麻素對照品，加入甲醇制成1mg/mL的對照品溶液。3.1.2薄層色譜法試驗分別吸取供試品溶液10μL，對照藥材溶液5μL，對照品溶液5μL，在同一硅膠G薄層板上點(diǎn)樣；用乙酸乙酯-甲醇-水（9：1：0.2）作為展開劑，待其展開完成，取出，等晾干之后再用10%磷鉬酸乙醇溶液輕噴薄層板表面，置于105℃烘箱加熱至斑點(diǎn)清晰顯色。圖1供試品的薄層色譜圖在薄層色譜中，兩個產(chǎn)地的供試品各自在和對照品色譜相同的位置上有相同顏色的斑點(diǎn)出現(xiàn)。故供試品中還有天麻素，可以繼續(xù)進(jìn)行含量測定。3.2色譜條件3.2.1色譜具體參數(shù)色譜柱：WelchromC18-WR（4.6×250mm，5μm）；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；檢測器：UV檢測器；流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97）；檢測波長：220nm；進(jìn)樣量：10μL。3.2.2對照品的制備取天麻素對照品5mL，精密稱定，再加乙腈-水（3：97）100mL混合溶液制成每1mL中含有天麻素50μg的溶液作為對照品溶液。3.2.3供試品的制備取天麻樣品，稱重，用粉碎機(jī)打成粉（過三號篩），精密稱取本品粉末2g，放在含瓶塞的100mL錐形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，稱定重量，置于超聲儀器中超聲處理30min，取出放冷，稱定重量，再用稀乙醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻過濾，精密稱取續(xù)濾液10mL，濃縮至近干無醇味，殘渣加乙腈-水（3：97）混合溶液使其溶解，再轉(zhuǎn)移到25mL量瓶中，加乙腈-水（3：97）混合溶液定容，搖勻，過濾，取得的續(xù)濾液作為供試品溶液。3.3方法學(xué)考察3.3.1線性關(guān)系考察取天麻素對照品溶液，分別用乙腈-水（3：97）稀釋10、8、4、2倍配制成不同濃度的天麻素對照品溶液。按照3.2.1的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣2次，記錄峰面積求其平均值。以天麻素的平均峰面積（mV）為縱坐標(biāo)（Y），以進(jìn)樣濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖2對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖由圖可知，天麻素對照品的峰面積（mV）與其濃度(μg/mL)的標(biāo)準(zhǔn)回歸方程為：y=20057x+3914.9，相關(guān)系數(shù)R2=0.9998，接近于1。結(jié)果表明，在濃度5.000~50.000μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。3.3.2儀器精密度試驗取天麻素對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積求其平均值，并算出RSD值。表1精密度試驗結(jié)果濃度（μg/ml）次數(shù)峰面積（mV）峰面積平均值（mV）RSD（%）110043242100847850310116411011057.80.784102436851006478由表1可知，濃度50μg/mL的天麻素對照品的峰面積的RSD=0.78%，RSD小于2%，結(jié)果表明該儀器的精密度良好，可用于天麻的天麻素含量測定實驗。3.3.3穩(wěn)定性試驗用按3.2.3方法配制出的同一濃度的天麻供試品溶液，分別在室溫條件下放置0、2、4、6、8h，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，并算出RSD值。表2穩(wěn)定性試驗結(jié)果濃度（μg/mL）時間（h）峰面積（mV）峰面積平均值（mV）RSD（%）062464422621022650461835876178080.80.906614646886103681由表2可知，穩(wěn)定性試驗的RSD=0.90%，低于2%，結(jié)果表明天麻素供試品溶液在室溫條件下放置8h內(nèi)穩(wěn)定。3.3.4重復(fù)性試驗取同一批次天麻打粉，精密稱定5份，按3.2.3的方法來制備供試品溶液。按3.2.1色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣兩次，記錄峰面積求其平均值，并求出天麻供試品中的天麻素量及其平均值，并算出RSD值。表3重復(fù)性試驗結(jié)果次數(shù)平均峰面積（mV）含量（%）平均含量（%）RSD（%）162440402.160262583262.165364349852.2262.16741.86461096072.113562851912.173由表3可知，天麻供試品重復(fù)性試驗的RSD=1.86%，低于2%，結(jié)果表明試驗方法多次實驗的結(jié)果相差不大，重復(fù)性好，可批量對天麻供試品進(jìn)行含量測定。3.3.5回收率試驗采用加樣回收法[12]，取已知天麻素含量(2.1674%)的貴州天麻樣品5份,各約0.5g,精密稱定,分別按下表加入天麻素對照品,按樣品測定項下所述方法測定,結(jié)果見表4,其平均回收率為97.1%。表4回收率試驗結(jié)果取樣量（g）樣品中含量（mg）加入量（mg）測得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）0.494310.7131.00011.33096.730.503410.9111.00011.63197.650.497510.7831.00011.58598.3298.080.940.502310.8871.00011.78499.130.508711.0261.00011.85498.57由表4可知，樣品的平均回收率為98.08%，在95%～105%的范圍內(nèi)，RSD=0.94%，結(jié)果表明該方法選用的溶劑和提取方法較好，能完全有效地提取出天麻中的天麻素，準(zhǔn)確而且可靠。3.4供試品的含量測定分別準(zhǔn)備兩個產(chǎn)地的天麻樣品，精密稱定，按上述3.2.3的方法來制備溶液。之后分別將對照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣4次，記錄峰面積，按外標(biāo)法計算出天麻素的含量。結(jié)果見表5、6。表5貴州產(chǎn)地的天麻含量測定批次取樣量（mg）峰面積樣品中含量（%）平均含量（%）RSD（%）1710135012003.762440402.1601710135022003.762280582.1542.1570.261710135032004.362551912.1631710135042004.362187492.150圖3貴州產(chǎn)地的天麻色譜圖表6云南產(chǎn)地的天麻含量測定批次取樣量（mg）峰面積樣品中含量（%）平均含量（%）RSD（%）1712165012004.660228942.0941712165022004.659794462.0782.0661.171712165032003.858896882.0481712165042003.858753802.043圖4云南產(chǎn)地的天麻色譜圖圖5對照品的色譜圖4結(jié)果通過結(jié)果對比可知，貴州產(chǎn)地的天麻所含的天麻素高于云南地區(qū)的天麻，即在以天麻素作為評估指標(biāo)時，前者的質(zhì)量優(yōu)于后者。5討論5.1實驗條件的選擇5.1.1測定波長的選擇通過查閱文獻(xiàn)可知天麻素在220nm和270nm波長處皆有最大吸收。從天麻素對照品的光譜圖可見220nm檢測的靈敏度遠(yuǎn)高于270nm，分析2個波長的峰面積,可知220nm檢測的靈敏度遠(yuǎn)高于270nm，約為15倍,所以選擇220nm作為測定波長。[12]而且雖然天麻素的最大吸收波長在205nm左右，但由于此波長是氘燈的末端發(fā)射波長，其能量相對較弱，而且基線噪音也較大，相同的進(jìn)樣量在220nm時得到更大的吸收峰面積，有利于提高定量的準(zhǔn)確度。[10]故最終選擇220nm作為檢測波長。5.1.2流動相的選擇在液相色譜中，溶質(zhì)與流動相和固定相兩者之間相互作用的強(qiáng)弱程度將決定溶質(zhì)的保留，所以流動相的選擇對物質(zhì)的分離作用極為重要。在眾多的參考文獻(xiàn)中使用過的流動相有乙腈-0.05％磷酸溶液（3:97）、甲醇-0.001mol/L、磷酸鹽溶液（2.5:97.5）、甲醇-磷酸鹽溶液（含KH2PO4和Na2HPO4各為0.1mol/L）-水（1.5:3:95.5）、乙腈-水（3：97）、甲醇-異丙醇-水（2.5：2.5：95）、水-甲醇（93：7）。[13]比較藥典與本實驗所提供的流動相,結(jié)果均可獲得良好的色譜圖，在了結(jié)合以上信息及條件之后，本實驗所采用采用乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97）溶液的流動相經(jīng)過系統(tǒng)適應(yīng)性實驗，有良好的分離效果，所以以此流動相。提取的樣品用流動相溶解后進(jìn)樣,避免出現(xiàn)前傾峰。5.1.3提取方法的選擇實驗過程中不同的提取方法對天麻素的含量測定也有一定的影響，根據(jù)文獻(xiàn)[13]超聲法：無需加熱，操作簡便，可以將樣品更為有效的粉碎，但其過程所產(chǎn)生的噪音較大，且儀器各部位功率有一定的差異，對提取結(jié)果有一定的影響?；亓鞣ǎ禾崛÷瘦^高，但其操作復(fù)雜、所需時間長、耗能也大，且有一定安全隱患。微波法：操作簡單、所需時間較短、耗能小、無污染，但為了避免其受熱不均勻以至于影響結(jié)果，實驗必須逐個操作才可以保證提取效果，且要注意加熱時間不能過長，以免溶液沸騰而沖出。應(yīng)采用間斷多次加熱的方法來進(jìn)行提取。索氏法：提取效果較好，但裝樣較為復(fù)雜、耗時較長、耗能較大。結(jié)合2015版文獻(xiàn)和實驗室條件，最終選擇超聲法進(jìn)行實驗，該法操作簡便，快速，有利于進(jìn)行多次實驗。5.2影響天麻素含量的因素時間：人工天麻的通常在當(dāng)年的10月下半月到下一年的4月之間進(jìn)行栽培。一般在10月下半月至12月上半月在土壤表面結(jié)凍之前播種，或者在下一年春季3至4月在土壤解凍之后播種，前者稱為冬栽，后者為春栽。在一些高海拔山區(qū)可以到5月再進(jìn)行播種。一般來說，冬天麻的質(zhì)量比春天麻好。場地：人工天麻可以任意選擇住房的附近、小山丘、樹林果園等地方的田地作為栽培的場所，最好選擇透氣滲水的沙質(zhì)土壤來進(jìn)行栽培。因為天麻喜好在一些含有較厚的腐殖質(zhì)、疏松透氣的土壤中生長發(fā)育，具有良好的排水性能和土壤結(jié)構(gòu)能更有助于天麻生產(chǎn)的質(zhì)量提升；但是如果土壤的過濕，會使得天麻的塊莖腐壞，而濕度過低，則又會使蜜環(huán)菌的生長受到限制，影響天麻生長。一般把天麻栽培在具微酸性土壤當(dāng)中較為適合，有助于其生長。建畦：可以在栽培的平地邊上以寬度80厘米、深度10厘米、長度不限來作為畦；而在一些山丘坡地上可以按照地形來建成梯式橫畦，畦與畦之間距離大概為1米，畦旁邊的花草樹木都要盡可能的保留，這樣可以有效地進(jìn)行遮陰，而且還能有效防止崩塌。溫度：天麻適宜的生長溫度在12℃-24℃之間，在這個范圍之內(nèi)，溫度越高越好。在冬季的時候要注意防凍，在海拔低于1千米的地區(qū)，可以在播種后在上方鋪上15厘米厚的枝葉等；在海拔高于1千米的地區(qū)需要將覆蓋的落葉雜草等鋪厚至一倍以上。在夏秋季的時候要注意避免土壤過熱和缺水，除了利用樹木和外棚遮陰外，還可以澆水的方法來降低地面高溫。需要在傍晚和土壤溫度下降之后再進(jìn)行澆水。水分：在冬季到下一年春季這段時間中，土壤的濕度應(yīng)該控制在15%左右。到了4-6月份的時候可將土壤濕度提升至55%左右。等到6-8月天麻進(jìn)入旺盛的生長期之后，營養(yǎng)積累已逐漸趨于飽滿，這個時候應(yīng)降低溫度、保持水分，進(jìn)行后期的打理。到了9月，天麻營養(yǎng)積累完全，進(jìn)入了成熟期，這時土壤濕度應(yīng)控制在30%以下，在10月下半月土壤溫度已降到10℃左右，天麻開始進(jìn)入休眠期，這時就可以進(jìn)行采挖了。野生：野生天麻受到自然條件的影響較大，以至于一般體積都不如人工栽培的天麻大，而且外觀也不如人工栽培的美觀，形態(tài)各自不一，沒有相同的型體。但野生天麻中所含有效成分較多，如天麻甙、天麻醚甙、香草醇等，其所含的特殊香味是人工栽培的天麻所不能比擬的。5.3天麻產(chǎn)地的分析根據(jù)文獻(xiàn)[14]有學(xué)者對我國天麻主要產(chǎn)地如貴州、云南和四川等進(jìn)行了生態(tài)環(huán)境考究分析，其認(rèn)為主要影響天麻生長和質(zhì)量的因素有海拔、溫度、地勢、氣溫、水分和土壤等因素。事實上，在我國東北、華北、西北以及西南等地均有天麻的生長分布，證明其有較為廣泛的適應(yīng)性。而各地區(qū)所生產(chǎn)的天麻，其藥材性狀和天麻素含量也均符合《中國藥典》的規(guī)定，即各地區(qū)的人工天麻栽培取得了一定的成功。通過種植歷史、技術(shù)、環(huán)境條件和規(guī)模等綜合分析可以認(rèn)為，貴州是天麻較為適宜種植的地區(qū)尤以其所產(chǎn)的烏天麻較為出名。5.4含量測定的結(jié)論本次實驗采用HPLC法對中藥天麻的天麻素含量測定進(jìn)行的研究，此方法具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好、回收率高等優(yōu)點(diǎn)，而且通過文獻(xiàn)查閱和實驗結(jié)果的對比為天麻的質(zhì)量開發(fā)研究和質(zhì)量控制提供了參考。參考文獻(xiàn)[1]國家藥典委員會.中國藥典2015年版:一部[M]北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2015:58.[2]唐春梓,廖朝林,林先明,劉海華.天麻的研究現(xiàn)狀與展望[J].中國現(xiàn)代中藥,2008(06):10-12+14.[3]中國藥材公司.中國中藥區(qū)劃[M].北京:科學(xué)出版社,1995:156.[4]雷有成,李建蕊,肖佳佳,岳媛,張興國,張梅,呂光華.天麻商品等級與天麻素和天麻多糖的相關(guān)性研究[J].中草藥,2015,46(03):418-423.[5]葉偉,梁文琴,祝婧,于歡,葉喜德.天麻炮制研究概況[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2017,15(01):146-148.[6]ChunlanTang,LiWang,XinxinLiu,MengchunCheng,YangQu,HongbinXiao.Comparativepharmacokineticsofgastrodininratsafterintragastricadministrationoffreegastrodin,parishinandGastrodiaelataextract[J].JournalofEthnopharmacology,2015,176.[7]孫澤陽,胡東鳴.天麻及其活性成分藥效作用的實驗研究[J].中國野生植物資源,2012,31(03):1-7.[8]CauLiezB,GuigneryS,MarinierS,etal.TwoyearstabilityofNTproBNPinfrozensamplesusingtheRocheElecsyssystem[J].AnnClinBiochem,2008,45(Pt3):318-319[9]謝紹宏,吳平安.不同軟化方式切片對天麻中的天麻多糖和天麻素含量的影響[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2010,27(04):59-62.[10]范維強(qiáng),余永貴.利用高效液相色譜法測定天麻素的含量研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012,18(11):1544-1545+1549.[11]李紅月,孫志偉,王淑琴.天麻素在神經(jīng)系統(tǒng)的藥理作用研究概況[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2015,35(11):1047-1050.[12]吳春敏,陳海濱.天麻中天麻素含量測定方法的研究[J].中國中藥雜志,2004(12):39-41.[13]劉建康,黃偉,楊藝.不同提取方法研究天麻中天麻素的含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2009,5(10):20-23.[14]宋平順,衛(wèi)玉玲,趙建邦,丁永輝.不同地區(qū)人工培育天麻中天麻素含量的HPLC法測定[J].甘肅中醫(yī),2008(10):52-53.綜述天麻的化學(xué)性質(zhì)及其藥理研究1天麻的簡介本品為蘭科植物天麻GastrodiaelataBl.的干燥塊莖。立冬后至次年清明前采挖，立即洗凈，蒸透，敞開低溫干燥。[1]天麻是一味常用而較名貴的中藥，臨床多用于頭痛眩暈、肢體麻木、小兒驚風(fēng)、癲癇、抽搐、破傷風(fēng)等癥。天麻過去一直依賴野生資源，20世紀(jì)70年代野生變家種成功后，家種天麻成為主要商品來源?？梢造铒L(fēng)濕，止痛、行氣活血。我國已經(jīng)對天麻的化學(xué)成分研究數(shù)十年，在天麻化合物的報告中，有幾種類型的酚類、有機(jī)酸和植物固醇。化學(xué)成分含有天麻苷（天麻素）、天麻苷元、天麻醚苷、派立辛、香草醇、B-甾醇、對羥基苯甲醛、檸檬酸、琉拍酸等。[2]天麻及其有效成分的藥理作用為：對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、抗炎、增強(qiáng)免疫力、神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)均有很好的作用；臨床用于治療癲癇、血管性癡呆、腦萎縮、眩暈、血管性頭痛等,具有很好的療效；服用大劑量天麻會出現(xiàn)惡心、嘔吐等毒副作用，常規(guī)劑量無明顯毒副作用。[3]由此其越來越受到人們的關(guān)注，學(xué)者們對天麻進(jìn)行了更為深入的研究。2天麻的藥理作用2.1對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用2.1.1鎮(zhèn)靜催眠黃俊華[4]給小鼠皮下注射天麻注射液，結(jié)果證明能減少小鼠的自主活動，顯著增加小鼠心肌的營養(yǎng)性血流量,提高小鼠抗缺氧能力，顯示具有一定鎮(zhèn)靜作用。實驗進(jìn)一步表明天麻注射液能降低大鼠四腦區(qū)的多巴胺和去甲腎上腺素的含量，在離體腦片法中觀察到天麻注射液可使皮層、腦干、紋狀體的人工腦脊液中的多巴胺含量增多，同時也使四腦區(qū)的去甲腎上腺素含量增加，提示天麻的鎮(zhèn)靜、催眠作用可能與其降低腦內(nèi)多巴胺和去甲腎上腺素含量有關(guān)[5]。2.1.2抗驚厥天麻浸膏具有明顯對抗戊四氮陣攣性驚厥的作用。進(jìn)一步實驗表明，天麻素及其苷元能延長戊四氮陣攣性驚厥的潛伏期，與戊巴比妥鈉有明顯協(xié)同作用，能提高戊四氮在小鼠的半數(shù)驚厥量，并能使小鼠自主活動降低[6]。天麻素能對抗咖啡因引起的興奮。人工合成天麻素(3000mg/kgip)能對抗馬桑內(nèi)醋所致家兔癲癇，有延長癲癇發(fā)生的潛伏期，減輕大發(fā)作程度，縮短大發(fā)作時程，降低死亡率的作用[7]。香草醇(292mg/kg)在無明顯中樞鎮(zhèn)靜作用時，就能抑制大鼠點(diǎn)燃效應(yīng)的全身性陣攣發(fā)作?？s短AD時程(刺激后放電)，表明在不產(chǎn)生中樞鎮(zhèn)靜作用的劑量下就能顯著改善腦電，產(chǎn)生抗癲癇作用[8]。2.1.3鎮(zhèn)痛葉紅等[9]采用熱板法實驗，通過天麻水煎液灌胃小鼠，結(jié)果表明天麻水煎液對正常小鼠疼痛閾值無明顯影響，但是通過扭體法灌胃給藥表明不同天麻樣品水煎液均能延長小鼠扭體潛伏期并減少其扭體次數(shù)，具有良好的鎮(zhèn)痛作用，其鎮(zhèn)痛作用與劑量有關(guān)，高劑量組作用顯著。鄭衛(wèi)紅等[10]研究顯示天麻素可以減輕長春新堿誘導(dǎo)的大鼠化療疼痛反應(yīng)，使其痛閾值明顯增高，且鎮(zhèn)痛效果與天麻素的劑量有關(guān)，大劑量時效果更明顯。2.1.4益智、延緩衰老老齡大鼠連續(xù)口服天麻3個月，應(yīng)用跳臺試驗觀察小鼠的學(xué)習(xí)記憶過程，同時測定血清脂質(zhì)過氧化物(LPO)濃度。結(jié)果表明，連續(xù)服用天麻可降低血清LPO濃度，具有改善記憶、抗衰老、益智作用[11]。Kim等通過β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的阿爾茨海默病細(xì)胞試驗發(fā)現(xiàn)，天麻提取物可顯著減少該病引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡[12]。試驗表明，天麻大劑量(300mg/kg)組可顯著增強(qiáng)衰老小鼠血清、肝、腦、心組織中過氧化物歧化酶、過氧化氫酶以及血清中谷胱甘肽過氧化物酶的活性，抑制其血清、肝、腦、心組織中丙二醛的形成，具有較好的清除自由基、降低丙二醛含量、延緩細(xì)胞衰老的作用[13]。對鉛誘導(dǎo)的海馬損傷大鼠研究發(fā)現(xiàn)，天麻大劑量組大鼠在游泳試驗中到達(dá)平臺的次數(shù)顯著高于模型組，大鼠海馬未見明顯萎縮,細(xì)胞形態(tài)基本正常，異常改變不明顯，表明天麻可對抗鉛誘導(dǎo)的大鼠海馬損傷，具有改善學(xué)習(xí)記憶功能[14]。2.2對心血管系統(tǒng)的作用2.2.1對心臟的作用采用改良風(fēng)箱模型來計算天麻素動脈血管的順應(yīng)性和血管中血流慣性。結(jié)果表明，天麻素具有降低血壓和外周血管阻力，增加動脈血管中血流慣性以及中央和外周動脈血管的順應(yīng)性等作用，說明天麻素是一種有效的能夠改善由血管順應(yīng)性下降所致的老年性高血壓的成分[15]。2.2.2對血管血壓的作用天麻水醉提取物可降低家兔后肢和頭部的血管阻力。天麻液頸內(nèi)動脈推注可增加兔腦血流量,離體兔耳灌流還能明顯增加灌流量,且對抗腎上腺素引起的流量減少。同樣可增加離體豚鼠心臟的冠脈流量。狗靜脈注射天麻素(5omglkg),中央和外周動脈血管順應(yīng)性顯著升高,外周血管阻力顯著降低。在降低外周阻力方面天麻素雖不如擴(kuò)血管藥物強(qiáng),但在增強(qiáng)中央動脈順應(yīng)性方面則優(yōu)于其它擴(kuò)血管藥。由于天麻素對中央動脈血管順應(yīng)性有改善作用,使得主動脈、大動脈等血管彈性增強(qiáng),從而增強(qiáng)了血管對血壓的緩沖能力,因此天麻素降低收縮壓比其降低舒張壓和平均壓更明顯。大量的藥理實驗研究表明,天麻素、HBA或天麻注射液均能有效地降低動物血壓。比較了3種不同含鋅量的天麻對降低血壓的影響,發(fā)現(xiàn)含鋅量越高,降壓作用維持時間就越長,可調(diào)性越好;而且在降壓的同時,并不影響心率。[16]2.2.3對微循環(huán)的作用天麻注射液(1g/kg)頸外靜脈注射,可明顯擴(kuò)張麻醉大鼠腸系膜動脈管徑，血流加快，給藥1mL后即可發(fā)揮作用,15min達(dá)最大，但對小靜脈作用不明顯。天麻煎劑能對抗大鼠腎上腺素(AD)的縮血管效應(yīng)，對大鼠微循環(huán)障礙有顯著的預(yù)防作用，阻止血栓形成，并對缺血、缺氧及血液再灌流造成的大鼠腦組織損傷有保護(hù)作用[17]。2.3抗炎作用天麻能抑制醋酸所致的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加，抑制5-HT和PGE2所致大鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增加[18]。天麻多次用藥,對腎上腺質(zhì)量無明顯影響，顯示其抗炎效應(yīng)可能與垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)無關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)天麻注射液有抗巴豆油鼠耳炎癥的作用。2.4增強(qiáng)免疫力陳怡敏[19]實驗表明天麻素注射液(1g/kg)能顯著增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能、血清溶菌酶活力，天麻素25mg可提高小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)。天麻素注射液的溶血空斑試驗、免疫玫瑰花結(jié)形成細(xì)胞(IRFC)試驗和抗綿羊紅細(xì)胞抗體(SRBC)值高于對照組，提示天麻素注射液對小鼠非特異性免疫和特異性免疫中的細(xì)胞免疫與體液免疫均有增強(qiáng)作用。2.5對神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用以天麻素對新生大鼠大腦皮層進(jìn)行體外神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，用谷氨酸建立離體的神經(jīng)元損害模型試驗，結(jié)果提示天麻素可拮抗興奮性氨基酸神經(jīng)毒性，具有對谷氨酸致培養(yǎng)皮層神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，并檢測到天麻素對體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞的缺血再灌注損傷有保護(hù)作用[20]。2.6天麻的毒性《本草綱目》記載天麻無毒。梁堅等[21]觀察天麻軟膠囊的急性毒性和亞急性毒性。結(jié)果小鼠MTD大于15mg/kg，大鼠喂養(yǎng)30d未觀察到中毒表現(xiàn)，天麻軟膠囊由天麻、植物精油、明膠、甘油等組成，各劑量組動物的體質(zhì)量、食物攝取率、血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)、各臟器的臟/體比，與空白對照組均無明顯差異，主要臟器的外觀形態(tài)和組織學(xué)檢查均未見異常變化，表明天麻軟膠囊無明顯毒性。但有報道[22-23]服用天麻后可出現(xiàn)惡心、嘔吐、呼吸加快、皮膚瘙癢、神志不清等毒副作用，中毒劑量為40g以上，中毒潛伏期為1～6h。服用大量天麻會引起心律失常致死和出現(xiàn)少津、口干、咽燥、大便干結(jié)、虛損、筋脈失養(yǎng)等血虛陰虛的癥候。3天麻的臨床應(yīng)用3.1治療癲癇用天麻有效成分制成的香莢蘭醛片(100，200mg)，成人每日口服3次，開始每次500mg，如4周后無效，增至每次600～700mg，如2周后仍無效，繼增至每次800mg；兒童酌減。一般治療3～6月以上。王加強(qiáng)等[24]用天麻輔助治療慢性頑固性癲癇291例，有效率73.9%。天麻治療癲癇的作用機(jī)制可能與抗驚厥作用有關(guān)。3.2治療血管性癡呆蔣鴻鑫[25]用天麻素治療血管性癡呆70例，結(jié)果顯著改善16例，明顯改善20例，無變化34例；表明天麻素對血管性癡呆患者有改善作用，可能與增加局部腦血流量有關(guān)。3.3治療腦萎縮彭美玲等[26]用天麻素30～50mL加入50g·L-1葡萄糖注射液250mL中靜滴治療腦萎縮36例，每日1次，20～30d為1個療程，一般進(jìn)行2～3個療程。結(jié)果顯效14例，好轉(zhuǎn)17例，無效5例。3.4治療血管性頭痛孫艷梅等[27]用天麻素600mg加入生理鹽水250mL中靜脈滴注治療血管性頭痛52例，結(jié)果痊愈16例，顯效22例，有效7例，無效7例，總有效率86.5%。4總結(jié)天麻及其有效成分對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、抗炎、增強(qiáng)免疫力、神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)具有很好的作用；治療癲癇、血管性癡呆、腦萎縮、眩暈、血管性頭痛等，具有很好的療效；且常規(guī)劑量無明顯毒副作用，因此，在臨床上值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。另外，天麻的化學(xué)分析不應(yīng)局限于已找到的成分，應(yīng)該不斷尋找新的活性成分，從天麻苷元的衍生物中，仍有可能找到更有效的中樞抑制藥物。天麻的產(chǎn)品開發(fā)也應(yīng)該由簡單的直接粗加工向提取、精制、深加工轉(zhuǎn)化，擴(kuò)大其藥用范圍，提高其藥劑的質(zhì)量和藥效，相信其將會有更美好的發(fā)展前景。參考文獻(xiàn)[1]國家藥典委員會.中國藥典2015年版:一部[M]北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2015:58.[2]HaoXY,etal.Anewdi-(p-hydroxybenzyl)hydroxylaminefromGastrodiaelataBl[J].ChineseChemicalLetters，1999，10（6）：467.[3]程黎暉.天麻及其有效成分的藥理作用與臨床應(yīng)用[J].西北藥學(xué)雜志,2008(03):188-190.[4]黃俊華.天麻注射液及天麻苷藥理作用的初步研究[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報,1985,7(5):399.[5]黃彬.天麻對大鼠腦內(nèi)多巴胺含量及釋放的影響[J].貴州醫(yī)藥,1993,17(1):35.[6]DAIShenglong,YURong.ProtectionofGastrodiaelataagainstperntylenetetrazoleinducedseizureinmice[J].ChinJNewDrugsClin